高危人乳頭瘤病毒基因分型聚合酶鏈式反應檢測在宮頸病變篩查中的價值

萬英凈 朱純剛

【摘要】? 目的? ? 分析高危人乳頭瘤病毒（HR-HPV）基因分型（DNA）聚合酶鏈式反應（PCR）檢測宮頸病變的臨床價值。方法? ? 對瑞昌市人民醫院2018年1月—2020年12月8 600份婦女宮頸脫落細胞樣本進行HR-HPV DNA PCR、超薄液基細胞學檢查（TCT），以組織病理檢查結果為金標準，對比2種檢測方法的診斷效能、不同病變檢出率，并分析HR-HPV各基因型與宮頸病變相關性。結果? ? 組織病理檢查結果顯示，8 600份婦女宮頸脫落細胞樣本中，陽性1 462份、陽性率為17.00%，陰性7 138份、陰性率為83.00%；TCT檢測結果顯示，真陽性1 298份、假陽性412份、真陰性6 726份、假陰性164份；HR-HPV DNA PCR檢測結果顯示，真陽性1 401份、假陽性243份、真陰性6 895份、假陰性61份。HR-HPV DNA PCR檢測方法診斷準確度、敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值顯著高于TCT檢測，差異有統計學意義（P<0.05）。與組織病理檢查相比，TCT、HR-HPV DNA PCR對不同病變檢出率差異均無統計學意義（P>0.05）；TCT、HR-HPV DNA PCR 2種檢測方法相比，差異無統計學意義（P>0.05）；與TCT檢測方法相比，HR-HPV DNA PCR檢測方法對不同病變檢出率更接近于病理檢查，診斷價值更高。經Logistic回歸分析，HPV16、18、31、33、52、58亞型與宮頸病變的發生均呈正相關（P<0.05）。結論? ? HR-HPV感染與宮頸病變具有密切的相關性，HR-HPV DNA PCR在宮頸病變的檢測中具有較高檢出率，診斷效能顯著。

【關鍵詞】? 人乳頭瘤病毒； 基因分析； 宮頸病變； 超薄液基細胞學

中圖分類號：R739.34? ? ? ? 文獻標識碼：A

文章編號：1672-1721（2023）29-0114-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.29.038

目前，大量研究已證實，HR-HPV感染后所引起的原癌基因、抑癌基因表達改變可促進細胞的增殖與惡性輕化，HR-HPV的持續感染為導致宮頸癌發生的首要病因。因此，尋求有效的檢測方法及時篩查該病具有必要性[1]。既往多采用TCT、巴氏涂片法等，但此類檢測方法易受主觀因素影響，檢測特異度、靈敏度仍具較大上升空間[2]。多種HPV亞型病毒感染均可導致宮頸發生癌前病變，不同基因型之間也具有明顯的差異，但目前臨床關于此觀點尚未達成完全一致。本研究選擇瑞昌市人民醫院8 600份婦女宮頸脫落細胞樣本，進一步探討HR-HPV DNA PCR的診斷效能。

1? ? 資料與方法

1.1? ? 臨床資料? ? 對瑞昌市人民醫院2018年1月—2020年12月8 600份婦女宮頸脫落細胞樣本進行HR-HPV DNA PCR、TCT。診斷標準：符合文獻中關于宮頸病變的判定標準[3]。納入標準：符合診斷標準者；具有陰道內分泌物增多、下腹疼痛、腰部疼痛等癥狀；患者均知情此研究且簽署同意書。排除標準：子宮切除患者；具有宮頸手術史者；合并嚴重的心、腦、血管等疾病者；肝、腎功能不全者；合并其他婦科惡性腫瘤疾病者；處于妊娠期或哺乳期者；檢查前24 h有性生活者；臨床資料不全、依從性不佳者。

1.2? ? 方法? ? 3種檢查方法具體操作如下。

1.2.1? ? 組織病理檢查方法? ? 對患者進行陰道鏡下宮頸組織病理學檢查，并將其檢查結果作為本次研究的金標準。于電子陰道鏡（江蘇新瑪醫療器械有限公司）下，定位宮頸內可疑病灶，取出部分宮頸組織行病理檢查。若于陰道鏡下未發現病灶，則于宮頸管口搔刮進行多點取材后，將其送檢。由瑞昌市人民醫院2名經驗豐富、資歷較深的病理師對病理檢查結果進行診斷，若意見不一致，進行商討后達成一致。宮頸腫瘤組織分類主要可分為正常或炎癥、宮頸上皮內瘤變（CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ級）、鱗狀細胞癌（SCC）5種類型，其中CINⅠ級及以上為陽性[4]。

1.2.2? ? TCT檢測方法? ? 指導患者取膀胱截石位，取樣前，應用棉拭子將宮頸口分泌物去除，應用特制毛刷取宮頸脫落細胞，將其保存在Thinprep保存液中，對其進行漂洗，之后測定細胞密度，離心沉降液體，應用Prep2000制片系統固片機（孝感奧華醫療科技有限公司），將其制成薄層細胞涂片（直徑大小為2 cm），選擇質量分數為95%的酒精作為固定液進行濕固定。巴氏染色細胞后，于顯微鏡下（奧林巴斯公司，型號CX21）對其進行鏡檢。將其鏡檢結果分為正常或炎癥、不典型鱗狀細胞（ASCH）、高度鱗狀上皮內病變（HSIL）、低度鱗狀上皮內病變（LSIL）、鱗狀細胞癌（SCC）5種類型，其中LSIL、HSIL判定為陰性，SCC判定為陽性[5]。

1.2.3? ? PCR定量檢測方法? ? 指導患者保持膀胱截石位，取樣前應用棉拭子去除宮頸口分泌物，之后將采樣刷深入到患者宮頸內1～2 cm處，按照順時針的方向旋轉5～8周，停留5 s取出，將采樣刷置于一次性使用宮頸脫落細胞保存液中，置于4～8 ℃的環境中保存，以待檢測。應用人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒（熒光PCR法）（HPV21分型）（江蘇碩世生物科技股份有限公司），按照試劑盒說明書操作步驟進行HPV檢測。高危HPV基因型包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、82等亞型。PCR擴增條件為50 ℃ 5 min UNG酶處理、95 ℃預變性10 min、95 ℃ 10 s、58 ℃ 40 s、38 ℃ 5 s，共45個循環，其中HPV亞型擴增曲線呈典型S曲線且CT值小于參考值判定為陽性。

1.3? ? 觀察指標? ? 分析檢測結果，對比2種檢測方法的診斷效能、不同病變檢出率，分析HR-HPV各基因型與宮頸病變相關性。

1.4? ? 統計學方法? ? 采用SPSS 22.0統計學軟件分析數據，計量資料以x±s表示，采用t檢驗，計數資料以百分比表示，采用χ2檢驗，采用Logistic回歸分析法分析高危HPV基因分型與宮頸病變的關系，P<0.05為差異有統計學意義。

2? ? 結果

2.1? ? 檢測結果? ? 組織病理檢查結果：8 600份婦女宮頸脫落細胞樣本中，陽性1 462份、陽性率為17.00%，陰性7 138份、陰性率為83.00%。TCT檢測結果：真陽性1 298份、假陽性412份、真陰性6 726份、假陰性164份。HR-HPV DNA PCR檢測結果：真陽性1 401份、假陽性243份、真陰性6 895份、假陰性61份，見表1。

2.2? ? 診斷效能? ? HR-HPV DNA PCR檢測方法診斷準確度、靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值顯著高于TCT檢測，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.3? ? 不同病變檢出率? ? 與組織病理檢查相比，TCT、HR-HPV DNA PCR對不同病變檢出率差異均無統計學意義（P>0.05）；TCT、HR-HPV DNA PCR 2種檢測方法相比，差異無統計學意義（P>0.05）；與TCT檢測方法相比，HR-HPV DNA PCR檢測方法對不同病變檢出率更接近于病理檢查，診斷價值更高，見表3。

2.4? ? Logistic回歸分析? ? 經Logistic回歸分析，HPV16、18、31、33、52、58亞型與宮頸病變的發生均呈正相關（P<0.05），見表4。

3? ? 討論

宮頸癌在臨床上非常常見，此病的發生主要是量變到質變的過程，發展周期高達3～8年。據相關統計資料顯示，宮頸癌疾病的發病率在女性惡性腫瘤中的占比高達25%，且近些年來此病患者逐漸年輕化，對廣大女性身體健康造成極為不利的影響[6-8]。因此，早期對宮頸病變進行正確篩查，對于防治宮頸癌具有重要意義。

既往臨床多采用宮頸細胞學檢查、陰道鏡檢查、組織病理學檢查等方法，TCT檢測較為常見，主要應用宮頸刷對宮頸鱗柱交界處細胞進行收集，并在相應處理后進行巴氏染色，之后根據國際癌癥協會推薦標準對檢測結果進行診斷[9-11]。此種檢測技術可在一定程度上提高細胞數量、質量，可更加科學客觀地描述病情，但此檢測方法的診斷結果與操作人員制片經驗具有一定關系，且細胞消化不充分、固定液的時間過長等因素，均可導致TCT檢測結果不準確，影響診斷結果[12-13]。本研究發現，HR-HPV DNA PCR檢測方法診斷準確度、敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值顯著高于TCT檢測，差異有統計學意義（P<0.05）。2種檢查方式對不同病變檢出率差異無統計學意義（P>0.05）；與TCT檢測方法相比，HR-HPV DNA PCR檢測方法對不同病變檢出率更接近于病理檢查結果，診斷價值更高。研究數據進一步證實，HR-HPV DNA PCR檢測方法對宮頸病變的診斷效能更顯著。近些年來，多數研究學者認為HPV持續感染極易導致上皮細胞的無限增殖，是引起宮頸癌疾病的主要分子機制[14-15]。本研究還發現，經Logistic回歸分析，HPV16、18、31、33、52、58亞型與宮頸病變的發生均呈正相關；數據提示高危HPV基因分型與宮頸病變的發生具有直接關系。分析其原因，病毒進入患者機體后，主要通過將自身DNA整合入宿主細胞中，從而有效抑制宿主的抑癌基因，其中最常見的感染類型為HPV 16、18亞型，而HPV31、33、35、39等其他基因分型次之。再次證實HPV感染為導致宮頸癌疾病發生的高危因子，并且不同基因分型對于宮頸癌的致病力也有所不同。由此可見，HPV基因分型PCR檢測對于宮頸病變的診斷具有顯著價值。

綜上所述，高危HPV基因分型與宮頸病變的發生具有緊密的相關性，高危HPV基因分型PCR檢測在宮頸病變篩查中具有較高的診斷準確度、靈敏度，對宮頸不同病變檢出率較高，臨床應用價值顯著，可繼續推廣。

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