一例蛋雞傳染性支氣管炎的診斷與防治

文│劉婷婷 馬妍 呂宗德（江蘇省南京市畜牧獸醫站）

朱冠全（江蘇省揚中市三茅街道畜牧獸醫站）

雞傳染性支氣管炎（A v i a n infectious bronchitis）是由冠狀病毒科冠狀病毒屬雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）引起的雞的一種急性高度接觸性呼吸道傳染病。其潛伏期短、發病快，具有非常強的傳染性，雛雞的死亡率可達30%及以上，但6周齡以上的死亡率很低。

該病一年四季均可發生，但在冬季和春季發生概率較高。該病主要通過呼吸道傳播，也可通過飼料、飼喂用具、污染的飲水經消化道感染。此外，雞群過于擁擠，雞舍內溫度太熱或太冷、通風不暢、雞群缺乏維生素和礦物質，以及飼料配比不當或飼料供應不足都會導致該病的發生。

各年齡的雞都會發病，其中雛雞的發病率最高，死亡率也高，多以40日齡以內的雛雞最常見。雛雞感染會繼發其他病菌感染，以張口呼吸、發出啰音、咳嗽等呼吸道癥狀和生產性能下降為主要特征，臨床上多表現為假母雞、腎炎及產蛋量和蛋品質下降。產蛋雞感染通常表現產蛋量降低，蛋品質下降。因為該病分為多種血清型，并會不斷有新的變異株出現，給該病診斷及后期的治療效果帶來一定難度。此前，國內就有雞傳染性支氣管炎病的報道，在不同地區均有發生，且雞傳染性支氣管炎病毒的血清型眾多，流行毒株也有地域差異。

一、發病情況

某蛋雞養殖場190日齡海蘭褐殼蛋雞2.1萬羽，開產后產蛋率一直上不去，最高僅達75%，蛋殼質量異常，次品蛋數量多、比例高，軟殼蛋、沙皮蛋多見，破蛋率高。場內其他批次的蛋雞開產后無此類情況發生。

經詢問得知，該批次蛋雞非本場育雛，引進的70日齡青年雞。引入雞群時供應商僅提供了育雛期間的免疫程序，并無相關免疫抗體檢測證明，雞場也未對雞群開展相關疫病病原學抽檢。

二、臨床觀察

雞群整體精神狀態良好，群體采食量略低于正常。部分雞可見雞冠碩大鮮紅、羽毛光亮、體型健碩。解剖可見內臟器官無明顯異常，但輸卵管發育不全，大部分病雞的輸卵管纖細且薄，有的輸卵管內含白色或透明的液體，并混有白色絮狀物；有的輸卵管內面形成盲端，與腹腔不通；有的輸卵管成為只有5～7厘米的纖細柱狀物。大部分病雞的卵巢正常，個別病雞的卵巢萎縮或變性。

三、實驗室診斷

依據臨床發病情況和病理剖檢可初步判斷該批蛋雞在育雛早期感染了傳染性支氣管炎病毒，進一步確診需進行實驗室RT-PCR診斷。

1.樣品的采集。無菌采集了4份公雞特征明顯的病雞咽喉-肛門雙拭子，放入盛有病毒保存液的離心管中，4～8℃冷藏箱保存，運送至實驗室。

2.儀器與試劑。核酸提取儀（美國應用生物系統公司（ABI），型號：MagMAX Express）、熒光PCR儀（羅氏（Roche），型號：LightCycler 96）、病毒核酸提取試劑盒（美國應用生物系統公司（ABI），批號：01077982）、雞傳染性支氣管炎病毒核酸測定試劑盒（北京森康生物科技有限公司，批號Q02-014-220520）。

3.試驗方法。

（1）病毒RNA的提取。采用磁珠法進行核酸提取，具體操作方法如下：在96孔提取板中，A排孔中各加20微升Bead Mix，130微升Lysis/Binding Solution，50微升樣品；B排孔和C排孔中各加入150微升Wash Solution 1；D排孔和E排孔中各加入150微升Wash Solution 2；F排孔中各加入50微升Elution Buffer。放入提取儀，選擇試劑盒匹配的程序，按“START”鍵，結束后F排中吸取核酸樣本。

（2）熒光RT-PCR擴增。選擇25微升反應體系，每個PCR反應管內分別加入19微升熒光RT-PCR反應液、1微升酶混合物和5微升核酸樣本，設置陰、陽性對照各1個，蓋緊管蓋，500轉/分鐘離心30秒。加樣后的PCR管放入熒光PCR儀，記錄樣品位置。反應參數設置：

反轉錄42℃/15分鐘；

預變性95℃/3分鐘；

延 伸9 5 ℃/1 5 秒，5 3 ℃/1 0秒，60℃/30秒（采集熒光），循環40次。

選定F A M 檢測通道讀取檢測結果。

4.結果判定。

（1）質控標準。陰性對照：無Ct值并且無擴增曲線；陽性對照：Ct值應≤32，并出現典型的擴增曲線。僅陰、陽對照同時滿足以上條件時試驗才成立。

（2）判定標準。無Ct值，且無特征性擴增曲線的樣品判為陰性；Ct值應≤36，且出現典型的擴增曲線的樣品判為陽性；Ct值＞36，且出現典型的擴增曲線的樣品需進行復檢，復檢仍出現上述結果判為陽性，否則判為陰性。

（3）檢測結果。陰、陽對照均成立，4份樣品中有1份陽性，Ct值為32.08。說明該雞群確實感染過雞傳染性支氣管炎病毒，且目前還存在帶毒的情況。

四、結果分析與處置

通過臨床表現和實驗室檢測結果可判斷，該雞群在育雛階段感染過雞傳染性支氣管炎病毒，且雞群仍然帶毒，部分雞只愈后輸卵管發育不良，導致不可逆的損傷，所以雞群產蛋率一直上不去。建議養殖場根據雞只外貌特征及時將疑似假母雞挑出單獨飼喂，確認不產蛋后及時剔除，同時做好雞群的隔離與消毒工作，避免病毒傳播至其他雞舍。

五、防治措施

1.雞苗把控。選擇從優質的種雞場購買雞苗，了解種雞場動物疾病凈化情況和流行病學情況；引入青年雞的更要小心謹慎，了解育雛場的雞苗來源、雞群健康狀況、預防用藥情況，以及免疫過的疫苗，包括疫苗的名稱、種類和免疫時間。有條件的養殖場引入前可開展相關疾病免疫抗體水平和常見病病原的抽檢，以確保雞群質量。

2.疫苗免疫。選擇與當地流行毒株相匹配的疫苗開展雞群免疫，雛雞的基礎免疫一定要選用活疫苗，加強免疫可用活疫苗和滅活疫苗聯合免疫。蛋雞傳染性支氣管炎病的免疫程序建議如下：1～3日齡，新支二聯活疫苗1倍劑量滴鼻或點眼或噴霧免疫；20日齡，新支二聯活疫苗1倍劑量滴鼻或點眼免疫；50～60日齡，新支二聯苗2倍量飲水免疫；105日齡新支減流四聯苗1倍量注射免疫；135日齡新支流三聯苗1倍劑量注射免疫；以后每2個月做1次新支二聯苗2倍量飲水免疫。

3.育雛管理。育雛前要對育雛雞舍做好消毒工作，尤其是發生過雞傳染性支氣管炎的雞舍，至少要空舍2～3個月，徹底清掃消毒，減少持續感染的可能。做好育雛舍保溫工作，濕度也要恒定，定期通風，防止有害氣體濃度超標，控制好飼養密度，避免雞群生存空間狹小、過擠。飼料營養要全面，配比要合理，不同日齡的雞對營養的需求也不同，要根據生長情況及時做出調整，必要時可添加維生素或微生態制劑等營養物質，提高雞群抵抗力。

4.消毒滅源。重視場內消毒工作，嚴格落實消毒制度。對進出人員、車輛、場內道路、器具、蛋筐及雞舍內部都要定期開展消毒工作，場內至少配備2種消毒藥，交替使用，并定期更換消毒藥的種類。有條件的雞場可以開展消毒效果試驗，評估每次的消毒效果。