血清NDRG3與甲狀腺功能指標聯合檢測對甲狀腺乳頭狀癌的診斷價值

孟小玉,柴婷婷

陜西省銅川市人民醫院外科,陜西銅川 727100

甲狀腺乳頭狀癌為臨床常見內分泌系統的惡性腫瘤之一,占甲狀腺癌的84%,是最常見的組織病理學類型。在我國所有惡性腫瘤中,甲狀腺乳頭狀癌的發病率居于第7位,而在女性中,該病發病率居于第4位,且發病率隨著女性年齡的增加而逐漸升高[1]。甲狀腺乳頭狀癌患者雖預后良好,但仍有大量患者出現浸潤轉移和復發,導致不良結局,因此準確的術前診斷對甲狀腺乳頭狀癌的臨床治療具有重要意義[2]。甲狀腺功能指標為判斷甲狀腺疾病的重要指標。當發生甲狀腺癌時,多種甲狀腺功能指標出現異常[3]。N-myc下游調控基因(NDRG)3是NDRG家族重要成員,參與細胞增殖、凋亡、分化等多種細胞活動,已被證實在胃癌、卵巢癌、前列腺癌等多種癌癥中呈現異常表達,近年來其在癌變過程中的作用逐漸受到關注[4-5],然而NDRG3在甲狀腺乳頭狀癌中的作用卻鮮有報道。此外對于甲狀腺乳頭狀癌的診斷,單一指標檢測靈敏度較低。因此,本研究以本院進行甲狀腺切除術的115例甲狀腺乳頭狀癌患者為研究對象,檢測患者血清NDRG3及甲狀腺功能指標的變化,并對以上指標聯合檢測診斷甲狀腺乳頭狀癌的價值進行探討,以期為臨床早期診斷、治療該疾病提供相關參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2021年5月至2022年5月本院收治的115例甲狀腺乳頭狀癌患者作為甲狀腺癌組。(1)納入標準:①均符合關于甲狀腺乳頭狀癌的診斷及治療指南[6],且經病理學檢查確診;②首次確診并接受治療,既往無相關疾病治療史;③未出現遠處轉移;④留取甲狀腺乳頭狀癌病灶組織前未經放療、化療。(2)排除標準:①合并其他頭部、頸部惡性腫瘤;②既往有頭部、頸部放療、化療史;③對研究配合度較低;④存在肝、腎、心臟功能明顯異常。115例甲狀腺乳頭狀癌患者中男40例,女75例;年齡45～90歲,平均(53.28±6.82)歲;有淋巴結轉移40例,無淋巴結轉移75例;TNM分期Ⅰ期12例,Ⅱ期9例,Ⅲ期65例,Ⅳ期29例。選取同期在本院進行診治的甲狀腺良性結節患者115例作為良性對照組,其中男46例,女69例;年齡46～90歲,平均(54.25±7.62)歲。兩組性別、年齡分布比較,差異無統計學意義(P>0.05)。患者及家屬對本研究知情同意,并簽訂知情同意書,本研究經本院醫學倫理委員會批準。

1.2方法 所有研究對象均禁飲、禁食8 h,于次日抽取晨起空腹肘靜脈血5 mL,在室溫下以4 500 r/min的轉速離心,分離上層血清,將上層血清置于-80 ℃的冰箱中保存待測。采用化學發光分析法檢測甲狀腺功能指標,包括甲狀腺過氧化物酶抗體(TpoAb)、甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)、促甲狀腺激素(TSH)、游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)水平,并計算FT4/FT3比值。采用酶聯免疫吸附試驗檢測患者血清NDRG3水平。

收集甲狀腺乳頭狀癌患者術后病理活檢組織及甲狀腺良性結節患者病理活檢組織,采用免疫組化法檢測NDRG3表達情況。4%甲醛固定、洗滌、脫水、透明、浸漬包埋,制備石蠟切片。兔抗人NDRG3一級抗體(Abam)的稀釋比為1∶200。使用已知的陽性膜作為陽性對照,使用磷酸鹽緩沖液代替第一抗體作為陰性對照。根據NDRG3陽性細胞的染色強度和陽性細胞百分比評估分析結果。根據染色強度進行評分,無著色記為0分(-),淡黃色記為1分(+),棕黃色記為2分(++),棕褐色記為3分(+++)。根據陽性細胞百分比進行評分,0～<11%記為1分,11%～<51%記為2分,51%～<81%記為3分,81%～100%記為4分。將染色強度和陽性細胞百分比得分相乘得出最終評分結果,<4分為低表達,而≥4分為高表達。

2 結 果

2.1兩組血清NDRG3及甲狀腺功能指標水平比較 甲狀腺癌組血清TpoAb、TgAb、TSH、FT4/FT3水平均明顯高于良性對照組,NDRG3、FT3水平明顯低于良性對照組,差異有統計學意義(P<0.05)。兩組FT4水平比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組血清NDRG3及甲狀腺功能指標水平比較

2.2免疫組化法檢測NDRG3表達結果 NDRG3在甲狀腺乳頭狀癌組織中主要表達于細胞核和細胞質中,陽性表達率為36.52%(42/115),明顯低于甲狀腺良性結節中的陽性表達率73.91%(85/115),差異有統計學意義(χ2=32.511,P<0.001)。見圖1。

A為甲狀腺乳頭狀癌組織中NDRG3表達;B為甲狀腺良性結節組織中NDRG3表達。

2.3多因素Logistic回歸分析甲狀腺乳頭狀癌發生的影響因素 以是否發生甲狀腺乳頭狀癌為因變量,將血清NDRG3及甲狀腺功能指標作為自變量,根據中位值進行賦值,賦值情況見表2,多因素Logistic回歸分析結果顯示血清TSH≥2.58 mIU/L、FT4/FT3≥3.32為甲狀腺乳頭狀癌發生的獨立危險因素(P<0.05),血清NDRG3≥432.89 pg/mg、FT3≥4.47 pmol/L為甲狀腺乳頭狀癌發生的獨立保護因素(P<0.05)。見表3。

表2 各變量賦值情況

表3 多因素Logistic回歸分析甲狀腺乳頭狀癌發生的影響因素

2.4血清NDRG3與甲狀腺功能指標聯合檢測對甲狀腺乳頭狀癌的診斷效能 繪制ROC曲線,血清NDRG3、TSH、FT3、FT4/FT3單獨檢測診斷甲狀腺乳頭狀癌的曲線下面積(AUC)分別為0.838、0.766、0.692、0.713,通過對Logistic的模型方程進行變換得到聯合預測因子的公式,即Y聯合= -1.759×XNDRG3+0.510×XTSH-0.221×XFT3+0.029×XFT4/FT3。聯合預測因子診斷甲狀腺乳頭狀癌的AUC為0.906,4項指標聯合檢測診斷對甲狀腺乳頭狀癌的AUC大于單項指標檢測。見表4、圖2。

表4 血清NDRG3與甲狀腺功能指標聯合檢測對甲狀腺乳頭狀癌的診斷效能

圖2 血清NDRG3及甲狀腺功能指標診斷甲狀腺乳頭狀癌的ROC曲線

2.5不同臨床特征甲狀腺乳頭狀癌患者NDRG3水平比較 存在甲狀腺外延伸、淋巴結轉移及TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的甲狀腺乳頭狀癌患者NDRG3水平明顯低于不存在甲狀腺外延伸、淋巴結轉移及TNM分期Ⅰ～Ⅱ期的狀腺乳頭狀癌患者,差異有統計學意義(P<0.05)。見表5。

表5 不同臨床特征甲狀腺乳頭狀癌患者NDRG3水平比較

3 討 論

甲狀腺癌是最常見的內分泌癌,已成為全球發病率增長最快的癌癥。甲狀腺乳頭狀癌是最常見的病理類型,占甲狀腺癌的80%～90%[7-8]。大多數甲狀腺乳頭狀癌的惡性程度較低,被認為是一種進展緩慢、預后良好的癌癥。然而,30%～80%的患者會發生淋巴結轉移,研究表明,淋巴結轉移與疾病復發密切相關[9]。當患者術后發生中央淋巴結轉移時,往往需要二次手術,不僅增加了手術難度,還增加了喉返神經損傷、甲狀旁腺功能下降等并發癥的發生風險。因此,早期診斷甲狀腺乳頭狀癌、及時治療對有效改善患者預后具有重要作用。

NDRG3在細胞增殖、分化和其他生物學功能中發揮重要作用。NDRG3在睪丸、卵巢、前列腺、脊髓和原始胸腺中高表達,其轉錄產物在腦中表達最高,其次是心臟和腎。NDRG3存在于生精上皮的外層,可能在精子產生過程中發揮作用[10]。近年來,NDRG3在癌變過程中的復雜作用引起了人們的關注。已有研究發現NDRG3能夠在缺氧條件下激活RAF-ERK通路,通過乳酸的積累加速腫瘤的發生和發展[11]。NDRG3通過調節雄性生殖細胞中的ERK信號通路來調節減數分裂雙鏈DNA斷裂修復。此外,NDRG3還可上調血管生成趨化因子(CXCL1、CXCL3 和 CXCL5)的表達水平,增加血管生成因子的表達,從而促進腫瘤的發展[12-13]。本研究結果顯示,在甲狀腺乳頭狀癌患者血清及組織中NDRG3明顯低于甲狀腺良性結節患者,且發現NDRG3水平與甲狀腺乳頭狀癌患者甲狀腺外延伸、淋巴結轉移、TNM分期有關,NDRG3診斷甲狀腺乳頭狀癌的AUC為0.838,本研究結果顯示TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的甲狀腺乳頭狀癌患者NDRG3水平明顯低于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期的狀腺乳頭狀癌患者,差異有統計學意義(P<0.05)。但有研究發現NDRG3的表達增加,與浸潤性乳腺癌患者的浸潤性生物學表型和預后不良有關[14]。本研究推測癌組織中NDRG3的降低或增加可能與細胞內缺氧程度有關,如果細胞持續缺氧,乳酸積累,NDRG3被誘導與乳酸結合增加,則其水平明顯降低;反之,如果細胞內沒有缺氧,則NDRG3不會被病理誘導,可以正常表達。

甲狀腺功能障礙是女性的一種流行病學相關疾病,嚴重的甲狀腺功能障礙可能與下丘腦-垂體-卵巢軸和生殖器官的直接和間接相互作用導致月經失調和不孕有關。本研究通過分析發現,與甲狀腺良性結節患者比較,甲狀腺癌患者TpoAb、TgAb、TSH、FT4/FT3水平均明顯升高,FT3水平明顯降低,認為甲狀腺功能指標在甲狀腺疾病早期篩查中具有一定臨床應用價值。既往研究顯示,高胰島素血癥和較高的TpoAb水平可能是甲狀腺乳頭狀癌患者發病的危險因素[15]。TgAb由甲狀腺的濾泡細胞產生并分泌到卵泡的頂端腔中,據報道,健康狀況下,甲狀腺會釋放少量TgAb,而在病理條件下,甲狀腺濾泡中的甲狀腺球蛋白溢入血液,刺激機體產生抗體,造成血液中TgAb水平明顯升高[16]。TSH是一種二聚糖蛋白,為下丘腦-垂體-甲狀腺軸的重要參與者。既往研究發現,較高的TSH水平可能刺激甲狀腺癌細胞的增殖及TgAb的產生[17]。據報道,相較于未接受抑制劑量的甲狀腺激素治療患者,接受抑制劑量的甲狀腺激素治療的患者大多數處于甲狀腺癌低風險[18]。另外,在乳腺癌的研究中證實,低FT3水平可能與腫瘤侵襲密切相關,其可能與細胞外調節蛋白激酶及其相互作用有關,而FT4/FT3水平的升高可能提示患者病情發生惡化[19]。以上研究均表明甲狀腺功能指標對評估甲狀腺乳頭狀癌具有重要作用。此外,本研究結果發現,血清NDRG3與甲狀腺功能指標聯合檢測診斷甲狀腺乳頭狀癌的靈敏度和特異度均升高,表明血清NDRG3與甲狀腺功能指標聯合檢測對甲狀腺乳頭狀癌具有較高的診斷效能,優于單一指標檢測的診斷效能。

綜上所述,甲狀腺乳頭狀癌患者血清NDRG3與甲狀腺功能指標呈現異常表達,各項指標可能參與了腫瘤的起源或進展,聯合檢測血清NDRG3與甲狀腺功能指標水平可以作為診斷甲狀腺乳頭狀癌的可靠手段。