多囊卵巢綜合征患者血清miR-29a、miR-143-3p表達及臨床意義

方秀麗 王達穎 黃秀敏 晁鵬麗 佘晶蓉 魏卓華

1.廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院婦產(chǎn)科，福建廈門 361004；2.廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗科，福建廈門 361004；3.廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系，福建廈門 361004

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是育齡期婦女常見的內(nèi)分泌代謝疾病之一，常伴有肥胖和不同程度的糖脂代謝異常、胰島素抵抗（insulin resistance，IR），可進一步加重PCOS 病情并增加心腦血管疾病風(fēng)險[1-3]。目前臨床主要通過藥物、運動、心理和飲食療法控制PCOS 患者肥胖、糖脂代謝和IR，但干預(yù)效果并不理想[4-5]。尋找反映PCOS 患者肥胖、糖脂代謝和IR 的指標(biāo)，對改善PCOS 患者至關(guān)重要。微RNA（microRNA，miRNA）能通過調(diào)控多種機制參與PCOS 進程[6]。miR-29a 和miR-143-3p 是兩個新近發(fā)現(xiàn)的miRNA，有研究通過分析胰島素信號通路相關(guān)miRNA 發(fā)現(xiàn)，miR-29a 和miR-143-3p 與糖尿病患者IR 具有強相關(guān)性[7]。另有學(xué)者通過轉(zhuǎn)錄組學(xué)聯(lián)合代謝組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，miR-29a 和miR-143-3p 是PCOS 患者代謝過程相關(guān)的miRNA[8]。本研究擬分析PCOS 患者血清miR-29a、miR-143-3p 表達與肥胖、糖脂代謝和IR 的關(guān)系，以期為PCOS 診治提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年6 月至2022 年6 月廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院（簡稱“我院”）收治的86 例PCOS 患者為PCOS 組，年齡18～39 歲，平均（30.43±4.32）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《多囊卵巢綜合征中國診療指南》[9]的診斷標(biāo)準(zhǔn)：有月經(jīng)稀發(fā)或閉經(jīng)或不規(guī)則子宮出血表現(xiàn)，超聲發(fā)現(xiàn)多囊卵巢，或者實驗室檢查為高雄激素血癥；②年齡18～45 歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并先天性腎上腺皮質(zhì)增生、糖尿病、性功能減退、甲狀腺功能亢進等內(nèi)分泌疾病；②合并造血、免疫、神經(jīng)系統(tǒng)損害、惡性腫瘤、嚴(yán)重心肝腎功能損害；③近3 個月內(nèi)使用激素類藥物、降脂藥物、胰島素敏化劑；④性傳播疾病、泌尿生殖系統(tǒng)急性感染、吸毒等嚴(yán)重不良嗜好。另選取我院同期49 名體檢健康志愿者為對照組，年齡19～40歲，平均（30.10±5.18）歲。兩組年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究患者及家屬知情并簽署同意書，且經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)（2019-02-031）。

1.2 研究方法

1.2.1 血清miR-29a、miR-143-3p 表達 采集PCOS患者（入院次日）和對照組（體檢當(dāng)天）空腹靜脈血3 ml，3 000 r/min 離心15 min（半徑為8 cm），取上層血清使用Trizol 試劑盒（北京百奧萊博科技有限公司，編號：ALH011）提取總RNA，TaKaRa 反轉(zhuǎn)錄試劑盒（湖南艾科瑞生物工程有限公司，編號：AG11705）合成cDNA。按照Premix Ex TaqTM試劑盒（上海赫果生物科技有限公司，編號：DRR820A）說明，采用PCR 儀（美國ABI，型號：ABI7500）進行PCR 擴增，反應(yīng)體系共20 μl：cDNA 1 μl、正反向引物各0.5 μl、Universal miRNA qPCR primer 0.5 μl、2×Top Green qPCR SurperMix 10 μl、無核酸酶水7.5 μl；反應(yīng)條件：95℃90 s、95℃30 s、63℃30 s、72℃15 s，循環(huán)40 次；以U6 為內(nèi)參，2-ΔΔCt法計算血清miR-29a、miR-143-3p 相對表達量。miR-29a 正向引物：5’-UUAAGACUUGCAGUGAUGUUU-3’，反向引物：5’-AAACA-UCACUGCAAGUCUUAA-3’（428 bp）；miR-143-3p 正向引物：5’-CGAACTGGACAGTAACA-TGGAG-3’，反向引物：5’-CAGTTTGCTGGCAAAGTAGAAA-3’（529 bp）；U6 正向引物：5’-UAGCGACUAAACACAUCAA-3’，反向引物：5’-UGUCCGAGUUGCUUCCCGA-3’（617 bp）。

1.2.2 肥胖、糖脂代謝指標(biāo)檢測 收集兩組身高、體重、腰圍和臀圍數(shù)據(jù)，計算體重指數(shù)（body mass index，BMI）[體重（kg）/身高（m2）]和腰臀比（waist-to-hip ratio，WHR）[腰圍（cm）/臀圍（cm）]。

采用全自動生化分析儀（深圳邁瑞，型號：BS-600M）檢測空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）、空腹胰島素（fasting insulin，F(xiàn)INS）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）。

計算穩(wěn)態(tài)模型評估（homeostasis model assessment，HOMA）-IR 指數(shù)=FBG（mmol/L）×FINS（μU/ml）/22.5，HOMA-IR 越高提示IR 越嚴(yán)重[10]。

1.3 分組方法

參考《中國成人超重和肥胖癥預(yù)防控制指南》[11]將BMI≥28 kg/m2定義為肥胖，《胰島素抵抗評估方法和應(yīng)用的專家指導(dǎo)意見》[12]將HOMA-IR＞2.6 定義為IR。根據(jù)是否合并肥胖或IR 將PCOS 患者分為肥胖組（36 例）與非肥胖組（50 例）、IR 組（61 例）與非IR組（25 例）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 28.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，比較采用t 檢驗；不符合正態(tài)分布的計量資料用中位數(shù)（M）和四分位數(shù)（P25，P75）表示，比較采用秩和檢驗。計數(shù)資料用例數(shù)或百分率表示，比較采用χ2檢驗。PCOS患者血清miR-29a、miR-143-3p 表達與肥胖指標(biāo)、糖脂代謝指標(biāo)和HOMA-IR 的相關(guān)性采用Pearson 或Spearman 相關(guān)性分析。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PCOS 組與對照組相關(guān)資料比較

PCOS 組BMI、WHR、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、miR-29a、miR-143-3p 高于對照組，HDL-C低于對照組（P＜0.05）。見表1。

表1 PCOS 組與對照組相關(guān)資料比較

2.2 肥胖組與非肥胖組血清miR-29a、miR-143-3p表達比較

肥胖組血清miR-29a、miR-143-3p 表達高于非肥胖組（P＜0.05）。見表2。

表2 肥胖組與非肥胖組血清miR-29a、miR-143-3p 表達比較（）

表2 肥胖組與非肥胖組血清miR-29a、miR-143-3p 表達比較（）

注miR-29a：微RNA-29a；miR-143-3p：微RNA-143-3p。

2.3 IR 組與非IR 組血清miR-29a、miR-143-3p 表達比較

IR 組血清miR-29a、miR-143-3p 表達高于非IR組（P＜0.05）。見表3。

表3 IR 組與非IR 組血清miR-29a、miR-143-3p 表達比較（）

表3 IR 組與非IR 組血清miR-29a、miR-143-3p 表達比較（）

注IR：胰島素抵抗；miR-29a：微RNA-29a；miR-143-3p：微RNA-143-3p。

2.4 PCOS 患者血清miR-29a、miR-143-3p 表達與肥胖指標(biāo)、糖脂代謝指標(biāo)和HOMA-IR 的相關(guān)性

PCOS患者血清miR-29a、miR-143-3p表達與BMI、WHR、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C 呈正相關(guān)（r/rs=0.638、0.671、0.625、0.608、0.749、0.574、0.543、0.570，0.649、0.622、0.678、0.616、0.777、0.551、0.512、0.604，P＜0.001），與HDL-C 呈負相關(guān)（r=-0.610、-0.526，P＜0.001）。

3 討論

PCOS 是遺傳和環(huán)境因素相互作用導(dǎo)致的生殖功能障礙，以卵巢多囊樣改變、黑棘皮征、月經(jīng)異常、不孕等為主要臨床表現(xiàn)[1-2]。PCOS 發(fā)病機制復(fù)雜，近年研究認為除遺傳和環(huán)境因素外，機體代謝紊亂可能是PCOS 的重要病理機制，以肥胖、糖脂代謝紊亂和IR為主要表現(xiàn)[13-15]。肥胖、糖脂代謝紊亂和IR 不僅會加劇PCOS 患者高雄激素的臨床表現(xiàn)（多毛、痤瘡、脫發(fā)、男性化體征等），還可破壞竇卵泡發(fā)育，并干擾丘腦-垂體-卵巢軸，引起不排卵、誘導(dǎo)排卵反應(yīng)差、胎盤功能不全、胚胎質(zhì)量差、懷孕率低、活產(chǎn)率低、流產(chǎn)率高及妊娠并發(fā)癥增加等女性生殖功能和圍生期危害[16-17]；同時也會促進動脈粥樣硬化和動脈鈣化，增加心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險[18]。

隨著生命科學(xué)的快速發(fā)展，研究證實miRNA 能通過引發(fā)mRNA 的降解或轉(zhuǎn)錄后的基因沉默參與PCOS 發(fā)生發(fā)展[6]。miR-29a 定位于人染色體7q32.3，是miR-29 家族表達最豐富的成員，參與機體代謝紊亂調(diào)控。Sun 等[19]研究報道，敲除小鼠miR-29a 基因，能改善高脂肪飲食誘導(dǎo)的小鼠糖耐量受損和IR。Wu等[20]研究報道，沉默miR-29a 表達能通過上調(diào)過氧化物酶體增殖物激活PPAR 改善棕櫚酸誘導(dǎo)的小鼠脂質(zhì)代謝功能障礙和IR。Liu 等[21]研究報道，miR-29a 在肥胖小鼠脂肪組織衍生的外泌體內(nèi)增加，能轉(zhuǎn)移至脂肪細胞導(dǎo)致體內(nèi)外IR，而敲低miR-29a 能上調(diào)過氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisome proliferators-activatedreceptors，PPAR）改善小鼠肥胖和IR。miR-143-3p定位于人染色體5q32，參與機體代謝紊亂調(diào)控。Lin等[22]研究報道，miR-143-3p 在高脂肪誘導(dǎo)的肥胖小鼠中高表達，能靶向胰島素樣生長因子2 受體（insulin-like growth factor 2 receptor，IGF2R）促進脂質(zhì)沉積和IR，而抑制miR-143-3p 發(fā)揮相反作用。Lin 等[23]研究報道，miR-143-3p 在代謝綜合征小鼠血清和尿液中升高，抑制miR-143-3p 表達能靶向IGF2R 防止肥胖和IR。但關(guān)于miR-29a、miR-143-3p 與PCOS 患者肥胖、糖脂代謝紊亂和IR 的關(guān)系尚未可知。

本研究結(jié)果顯示，PCOS 組BMI、WHR、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C 高于對照組，HDL-C 低于對照組。提示PCOS 患者存在明顯的肥胖、糖脂代謝紊亂和IR，符合既往研究[14-16]報道結(jié)果。本研究結(jié)果顯示，肥胖組和IR 組血清miR-29a、miR-143-3p 表達升高，PCOS 患者血清miR-29a、miR-143-3p 表達與 BMI、WHR、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C呈正相關(guān)，與HDL-C 呈負相關(guān)。提示PCOS患者血清miR-29a、miR-143-3p 高表達與肥胖、糖脂代謝和IR密切相關(guān)，其機制可能與miR-29a 能下調(diào)PPAR 表達和miR-143-3p 能下調(diào)IGF2R 有關(guān)。PPAR 是參與能量代謝的重要核受體，在調(diào)節(jié)PCOS 患者糖脂代謝、改善胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和逆轉(zhuǎn)IR 中發(fā)揮重要作用[24]。IGF2R 是一種跨膜受體，能被胰島素生長因子激活，引發(fā)自身磷酸化和促進胞內(nèi)信號傳導(dǎo)，改善糖脂代謝和IR[25]。敲低或沉默miR-29a 能上調(diào)PPAR 改善小鼠肥胖、糖脂代謝障礙和IR[20-21]；抑制miR-143-3p 表達能上調(diào)IGF2R 改善小鼠肥胖、脂質(zhì)代謝和IR[22-23]。

綜上所述，PCOS 患者血清miR-29a、miR-143-3p表達升高，與肥胖、糖脂代謝和IR 密切相關(guān)，這為臨床控制PCOS 患者機體代謝紊亂，促進患者預(yù)后改善可能提供了新的方向。但本研究結(jié)果仍需多中心研究驗證。