銀屑病中醫(yī)藥動物模型的研究進(jìn)展※

張中華 閆小寧 黃雪英 吳 迪

(1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院2021級碩士研究生,陜西 咸陽 712046;2.陜西省中醫(yī)醫(yī)院皮膚科,陜西 西安 710004)

銀屑病是一種由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫相關(guān)的炎癥性皮膚疾病,目前銀屑病總患病率介于0.09%～5.10%之間,近年來有上升的趨勢[1]。銀屑病的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,涉及遺傳、免疫、環(huán)境、心理等多方面因素,因此臨床療效難以保證,疾病常易反復(fù)發(fā)作[2]。治療銀屑病的傳統(tǒng)藥物如甲氨蝶呤、維A酸、環(huán)孢素等均存在起效慢、療效有限及不良反應(yīng)多等缺點(diǎn)[3],新興的生物制劑療法也需要持續(xù)關(guān)注長期安全性、成本效益以及耐受性數(shù)據(jù)[4]。而中醫(yī)藥治療銀屑病作為近年研究的熱點(diǎn),以其辨證論治、因人選方、方案多樣、副作用小等優(yōu)勢在治療銀屑病方面得到眾多學(xué)者的認(rèn)同[5]。但目前研究者針對中醫(yī)藥治療銀屑病的研究,主要以臨床療效觀察為主,而基礎(chǔ)動物實(shí)驗(yàn)研究相對較少,并且實(shí)驗(yàn)內(nèi)容存在量少、重復(fù)、不規(guī)范等問題,這極易造成動物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果的偏差。銀屑病的動物模型是目前研究銀屑病發(fā)病機(jī)制以及治療方法的重要工具,更對未來研發(fā)抗銀屑病新藥起到前瞻作用。因此在銀屑病基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究中, 選取和建立理想合適的動物模型十分重要。為了更好地幫助銀屑病中醫(yī)藥動物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步發(fā)展,本文就目前比較常用及穩(wěn)定的銀屑病中醫(yī)藥動物模型作一綜述,為今后動物實(shí)驗(yàn)研究中醫(yī)藥治療銀屑病提供合適的造模選擇。

1 中醫(yī)證型動物模型

中醫(yī)證型動物模型是在中醫(yī)藥理論的基礎(chǔ)上,通過致病因素對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行造模,使實(shí)驗(yàn)動物出現(xiàn)與臨床證候一致的表現(xiàn)[6]。目前中醫(yī)證型動物模型的產(chǎn)生大多采用復(fù)合多因素法,在使用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)動物模型的基礎(chǔ)上,以中醫(yī)藥理論作為基礎(chǔ),通過更改小鼠喂養(yǎng)方式、居住環(huán)境,增添特殊生活習(xí)性等,人為建造服務(wù)于中醫(yī)藥研究的特定動物模型。其中使用頻率較高,為學(xué)術(shù)界公認(rèn)的證型有腎陽虛、脾虛、胃實(shí)寒、胃實(shí)熱、脾胃濕熱、肝氣逆、寒凝血瘀、氣滯血瘀及寒熱錯雜等[6]。

中醫(yī)藥治療銀屑病可以根據(jù)患者癥狀表現(xiàn)給予辨證論治,每個患者的治療方案各不相同,無論是口服湯藥、中成藥,或輔以艾灸[7]、走罐[8]、中藥封包[9]、針灸[10]、火針[11]等均有較好的療效。近代皮膚病名家診治銀屑病多從“血分”出發(fā),最終形成了“從血論治”為基本出發(fā)點(diǎn)的辨證思路,確立了血熱證、血燥證、血瘀證3個基本證型[12],學(xué)術(shù)界針對銀屑病的中醫(yī)藥動物實(shí)驗(yàn)研究也多從這3個方面著手。

1.1 血熱證 血熱是銀屑病的根本原因,通過銀屑病血熱證動物模型的研究對理解銀屑病的發(fā)病機(jī)制具有啟發(fā)意義。楊大偉等[13]給予普萘洛爾乳劑誘導(dǎo)的小鼠模型照射紫外線以及灌服干姜、甘草煎液構(gòu)建出銀屑病血熱證模型,經(jīng)過背部皮膚皮損形態(tài)、組織病理Baker評分、T3、T4及炎癥因子如腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素17(IL-17)等評價標(biāo)準(zhǔn)判定后,表明其既有銀屑病的病理特征,又具有中醫(yī)血熱證的證候表現(xiàn),是適用于中藥療效評價和作用機(jī)制研究的實(shí)驗(yàn)動物模型。學(xué)術(shù)界對血熱證動物模型的建造方法大多采用這種多因素復(fù)合造模法,外用藥多用普萘洛爾乳劑或咪喹莫特乳膏,灌服的熱性中藥則有所差異,但無論是干姜、甘草煎液[14],附子、肉桂、干姜水煎液[15],干姜、肉桂水煎液[16],還是干姜、胡椒、蓽茇水煎液[17],對結(jié)果影響并不明顯。

1.2 血瘀證 銀屑病發(fā)展到一定程度后,常會導(dǎo)致氣血運(yùn)行不暢,從而出現(xiàn)血瘀證,隨著病程的延長,血瘀證在銀屑病患者中的占比在逐漸上升[18],針對銀屑病血瘀證動物模型的研究對銀屑病的轉(zhuǎn)歸變化具有一定的指導(dǎo)作用。周萌等[19]對普萘洛爾乳膏制造的銀屑病模型多次靜脈注射去甲腎上腺素和小牛血清白蛋白,并喂養(yǎng)半高脂高糖飼料及冰水刺激,以這種方法建造的動物模型在檢測血液流變學(xué)、血漿內(nèi)皮素-1(ET-1)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)后發(fā)現(xiàn)均符合血瘀證的表現(xiàn)。而后有學(xué)者進(jìn)行了更加深入的研究,樊丹采等[20]分別對寒凝氣虛血瘀和氣滯血瘀進(jìn)行造模,并加測計算脾指數(shù)、胸腺指數(shù)及病理組織后表明血瘀致銀屑病動物模型與臨床銀屑病特點(diǎn)具有相似性,可作為銀屑病研究的動物模型。現(xiàn)代研究認(rèn)為,血瘀證是引起代謝性疾病的原因之一,參與了心腦血管疾病、糖尿病、腎病、高血壓病、高脂血癥等多種疾病的發(fā)生和發(fā)展過程[21],并且根據(jù)不同的病因病機(jī),將血瘀證動物模型分為氣滯血瘀、氣虛血瘀、外傷血瘀、血虛血瘀、寒凝血瘀、陽虛血瘀、陰虛血瘀、痰濁血瘀、熱毒血瘀及慢性血瘀[22]。目前針對銀屑病血瘀證的造模方法比較單一,應(yīng)根據(jù)不同病因病機(jī)進(jìn)行更詳細(xì)的劃分以適應(yīng)不同的中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究。

1.3 血燥證 血燥證的產(chǎn)生是由于久病后傷及氣血津液,津液虧虛,生風(fēng)化燥,氣血不能濡養(yǎng)肌膚而發(fā)病。而銀屑病發(fā)病后,皮膚可見紅斑鱗屑,且全身均可發(fā)病,因此患者極易發(fā)現(xiàn)。由于銀屑病皮損極大地影響了患者的美觀性,造成患者的恐慌與焦慮[23],因此患者會選擇第一時間就診,所以在臨床上很少見到極具特征的血燥證患者,故而針對血燥證銀屑病患者的研究相對較少。在造模過程中,由于缺少對應(yīng)的觀察指標(biāo),血燥證動物模型缺乏可參考的設(shè)計標(biāo)準(zhǔn),造模難度較大,造成可參考的有關(guān)血燥證銀屑病動物模型極度缺乏,未來學(xué)者的研究方向應(yīng)該對此有所涉及。

1.4 特殊證型 銀屑病的病程長,致病因素復(fù)雜,發(fā)病初期大都符合“以血論治”的基本思路。但患者在經(jīng)過長期復(fù)雜多樣的治療后,疾病證候往往發(fā)生較大變化,單從血熱、血瘀、血燥辨證無法滿足臨床需要,因此也有部分的名家在治療銀屑病時會從不同的角度出發(fā),根據(jù)患者當(dāng)前的舌質(zhì)脈象,兼并癥狀重新辨證論治,由此也衍生了不同證候的銀屑病動物模型。

1.4.1 脾虛證 銀屑病患者在長期的治療過程中,由于服用過量的清熱涼血藥物或經(jīng)受長期高頻次的糖皮質(zhì)激素外用,或不規(guī)律的使用免疫抑制劑,均會影響脾胃運(yùn)化功能造成脾虛證[24]。郭菲等[25]對普萘洛爾乳劑建造的銀屑病豚鼠模型灌胃瀉下藥大黃后,通過觀察豚鼠活動度、進(jìn)食量 糞便質(zhì)地、排便量及比較Baker評分后發(fā)現(xiàn)建造的銀屑病脾虛證豚鼠模型具備銀屑病病理特征,并與中醫(yī)脾虛證證候表現(xiàn)相似。而后的學(xué)者不僅在造模時更新方法為苦寒瀉下結(jié)合營養(yǎng)限制法建立脾虛小鼠模型,更多次增加檢驗(yàn)指標(biāo)[26],充分說明單純銀屑病模型與銀屑病脾虛證模型確有差異[27]。薛紅等[28]在研究脾虛腹瀉模型時采用的高乳糖飼料喂養(yǎng),與劉未艾等[29]采用的勞倦束縛法,均為構(gòu)建銀屑病脾虛證動物模型提供了新的思路。

1.4.2 濕熱證 濕熱之邪貫穿銀屑病的整個病程,既是銀屑病發(fā)病的重要病機(jī),也是影響銀屑病發(fā)展、向愈的重要因素。王玉芝[30-31]通過改變小鼠的飲食習(xí)慣與生活環(huán)境,在通過肥甘飲食加白酒并濕熱外環(huán)境后干預(yù),小鼠的血脂、肛溫水平顯著升高,發(fā)現(xiàn)濕熱銀屑病小鼠的Baker評分及炎癥細(xì)胞浸潤數(shù)均高于銀屑病,這不僅說明濕熱在銀屑病的發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用,也體現(xiàn)了濕熱證銀屑病動物模型既具備銀屑病的病理特征,又符合中醫(yī)濕熱證的證候表現(xiàn)。在濕熱證模型的造模方法中,90%以上的學(xué)者選擇高脂高糖飲食與濕熱環(huán)境[32],并在此基礎(chǔ)上,根據(jù)研究的具體疾病方向,另外選取合適的致病因子,通過灌服鼠傷寒沙門氏菌[33]、踝關(guān)節(jié)注射尿酸鈉溶液[34]、腹腔注射鏈脲佐菌素[35]、靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素[36]、皮下多點(diǎn)注射登革病毒[37]的造模方法,在內(nèi)分泌和代謝疾病、風(fēng)濕與免疫性疾病、心血管疾病、感染性疾病等方面都取得了一定的研究進(jìn)展[38]。

2 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)動物模型

中醫(yī)藥治療銀屑病實(shí)驗(yàn)所選用的動物模型多參照現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)所選用的動物模型,實(shí)驗(yàn)方法多為觀察中醫(yī)藥特色治療方案對現(xiàn)代醫(yī)學(xué)動物模型的效果。這種實(shí)驗(yàn)設(shè)計較為簡單,實(shí)驗(yàn)效果較為明顯,但缺乏一定的國際認(rèn)可度。當(dāng)前常用動物模型包括自發(fā)性突變小鼠模型、生物醫(yī)學(xué)型動物模型、基因工程小鼠模型、異種移植小鼠模型及藥物誘發(fā)小鼠模型[39]。收集中國知網(wǎng)近3年中醫(yī)藥治療銀屑病基礎(chǔ)動物實(shí)驗(yàn)所選用的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)動物模型進(jìn)行數(shù)據(jù)分析后可知,共有89.2%的動物模型為藥物誘發(fā)小鼠模型,其中84.9%為咪喹莫特乳膏誘導(dǎo),4.3%選用普萘洛爾乳劑誘導(dǎo),6.4%選用生物醫(yī)學(xué)型動物模型,有4.3%選用基因工程小鼠模型。分析后可知藥物誘發(fā)小鼠模型操作簡單,造模時間較短,且較好地模擬了人類銀屑病組織病理學(xué)表皮的主要改變,是當(dāng)前研究中醫(yī)藥治療銀屑病的首選模型,其中普萘洛爾誘導(dǎo)受限于豚鼠模型[40],因此咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病模型成為中醫(yī)藥基礎(chǔ)動物實(shí)驗(yàn)研究中使用最廣泛的銀屑病小鼠模型;基因工程小鼠模型的造模所需實(shí)驗(yàn)條件較為苛刻,實(shí)驗(yàn)過程較為繁瑣,且由于該模型只涉及單個基因,不能全面模擬銀屑病的復(fù)雜機(jī)制[41-42],因此只有少部分涉及研究中醫(yī)藥治療銀屑病作用機(jī)制會選用;生物醫(yī)學(xué)型動物模型經(jīng)濟(jì)易得,中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究選用這種模型的主要目的是研究中醫(yī)藥治療方案的干預(yù)方式與療效[39];自發(fā)性突變小鼠模型由于缺乏T淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤,且對抗銀屑病的藥物治療效果較差[43],不論中醫(yī)藥還是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)都很少選用這種模型;異種移植小鼠模型由于自身具有免疫缺陷,因此極易產(chǎn)生感染,所需的喂養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)及飼養(yǎng)環(huán)境需求較高,飼養(yǎng)成本相較其他模型也有所升高,因此很少用于中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)。見表1。

表1 中醫(yī)藥研究銀屑病常用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)動物模型

3 總結(jié)

當(dāng)代學(xué)者研究中醫(yī)藥治療銀屑病的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)多選用咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型,這種模型操作簡便,國際認(rèn)可度較高,因而為實(shí)驗(yàn)首選。常規(guī)選擇為藥物誘發(fā)小鼠模型,療效觀察可選用生物醫(yī)學(xué)型動物模型,特殊機(jī)制研究可選用基因工程小鼠模型,研究人員可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件、研究目的選擇合適的動物模型,以便得到真實(shí)可信的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。中醫(yī)證型動物模型是研究中醫(yī)證型與銀屑病結(jié)合的獨(dú)特模型,基于這種動物模型將會更好地闡釋中醫(yī)藥治療銀屑病的機(jī)制、更詳細(xì)地觀察中醫(yī)藥治療銀屑病的療效,但目前研究者對中醫(yī)證型動物模型的造模方法較單一,涉及的證型較為局限,需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究以完善基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)所缺乏的病證結(jié)合動物模型。

綜上所述,中醫(yī)藥研究銀屑病的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)動物模型目前已經(jīng)較為成熟,總體穩(wěn)定性較好,且模型構(gòu)建操作技術(shù)完善,為廣大研究者青睞。中醫(yī)證型動物模型可以體現(xiàn)以中醫(yī)藥為指導(dǎo)的治療理念,但目前研究數(shù)據(jù)較少,仍需不斷優(yōu)化提升現(xiàn)有的病證結(jié)合模型。研究者在進(jìn)行中醫(yī)藥治療銀屑病基礎(chǔ)動物實(shí)驗(yàn)研究時,可根據(jù)治療方案、研究目的、實(shí)驗(yàn)室條件、經(jīng)費(fèi)狀況等條件,結(jié)合以上不同類型動物模型的特點(diǎn),做出恰當(dāng)?shù)倪x擇。