類風濕關節炎患者血清CTX-Ⅱ HDAC3水平與免疫功能疾病活動度的相關性

熊 英, 肖 偉, 任 翔, 彭麗娟, 李先耀, 鄒 瑤, 甘海娜, 李麗華

(湖南省常德市第一人民醫院風濕免疫科, 湖南 常德 415000)

類風濕關節炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種影響著全球0.5～1%人口健康的風濕類疾病,該病通常伴有關節腫脹、壓痛和疼痛,降低患者活動能力和整體生活質量[1]。在RA疾病進展中持續的炎癥反應將造成不可逆的軟骨、滑膜和骨骼退化,最終使整個關節結構變形,使患者關節活動能力喪失和肌肉萎縮[2]。RA還會引起淋巴瘤、心血管疾病、糖尿病、貧血等并發癥,嚴重影響患者身心生活質量[3]。早期識別RA可以在適當治療后緩解臨床癥狀。盡管RA發病機制尚未明確,但以往研究表明免疫功能異常與RA發生發展密切相關[4]。Ⅱ型膠原C端肽(type Ⅱ collagen C-terminal peptide,CTX-Ⅱ)是軟骨代謝標志物,由軟骨組織Ⅱ型膠原降解而來,已有研究證實在RA患者血清中CTX-Ⅱ水平顯著高于健康人群[5]。組蛋白去乙?；?(histone deacetylase 3,HDAC3)屬于I類HDAC,是一種重要的轉錄調節蛋白,參與免疫系統發育、細胞周期調控過程,有研究顯示,HDAC3參與骨關節炎致病過程,其能夠反映骨關節炎嚴重程度[6]。但針對CTX-Ⅱ、HDAC3與RA免疫功能、疾病活動度關系的研究較少。本研究通過檢測RA患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3表達變化,明確其與免疫功能指標、疾病活動度相關性。

1 資料與方法

1.1研究對象:2020年1月1日～2021年12月31日,選擇本院接診的84例RA患者(RA組)與84例健康體檢者(NC組),兩組間一般資料具有可比性(表1)。納入標準:①RA患者均符合《2018年中國類風濕關節炎診療指南》[7]中標準;②年齡>18周歲;③知情同意書。排除標準:①近期經生物制劑、激素等藥物治療;②骨關節炎、腫瘤、強直性脊柱炎、心腦血管疾病、痛風;③其他自身免疫性疾病;④傳染性疾病或感染性疾病;⑤關節嚴重畸形者。本研究經醫院倫理委員會批準。RA組患者根據28個關節疾病活動(disease activity score in 28 joints,DAS28)評分[8]:評分<2.6分者為緩解期(n=37,緩解組),評分≥2.6分為活動期(n=47,活動組),兩組性別、年齡、病程等一般資料具有可比性(表2)。

表1 RA組與NC組一般資料比較

表2 活動組與緩解組一般資料比較

1.2觀察指標與方法

1.2.1血清CTX-Ⅱ、HDAC3檢測: NC組于體檢當日、RA組于入院次日采集空腹外周血,5000×g離心10min,分離血清,-80℃保存待測。采用酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測兩組CTX-Ⅱ(批號:20190516,上海紀寧實業有限公司)、HDAC3(批號:20190123,上海紀寧實業有限公司)水平,檢測過程嚴格按照試劑盒配套說明步驟進行。

1.2.2免疫功能指標及疾病活動度相關指標檢測:兩組患者采血后均送至檢驗科,按照以下方法檢測:使用流式細胞儀(型號:NovoCyte Quanteon,安捷倫)及其配套試劑檢測T淋巴細胞亞群:CD3+、CD4+、CD8+T細胞比例,CD3+T細胞比例正常范圍為60～80%,CD4+T細胞比例正常范圍為35～55%,CD8+T細胞比例正常范圍為20%～30%。全自動生化分析儀(型號:ADVIA?XPT,西門子公司)上采用免疫散射比濁法檢測免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)A、IgM、IgG,配套試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司,IgA參考值為0.7～3.8g/L,IgM參考值為0.6～2.5g/L,IgG參考值為7.0～17.0g/L。采用雙抗夾心定量法檢測C反應蛋白(C-reactive protein,CRP)水平(批號:20191021,華美生物公司),其正常范圍為0.068～8.2mg/L。采用血細胞自動分析儀以魏氏法檢測血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR),男性正常范圍為0～15mm/h,女性為0～20mm/h。

2 結 果

2.1兩組血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平分析:RA組患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平均明顯高于NC組,差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 RA組與NC組血清CTX-Ⅱ HDAC3水平比較

2.2RA組不同病情程度患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平比較:RA組不同病情程度患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平比較結果顯示,緩解組患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平均明顯低于活動組(P<0.05)。見表4。

表4 RA組不同病情程度患者血清CTX-Ⅱ HDAC3水平比較

2.3各組免疫指標水平分析:RA組CD3+、CD4+T細胞比例低于NC組,而CD8+T細胞比例以及IgM、IgA、IgG水平高于NC組(P<0.05)。見表5。與緩解組相比,活動組CD3+、CD4+T細胞比例降低,IgM、IgA、IgG水平升高(P<0.05)。見表6。

表5 RA組與NC組免疫指標水平比較

表6 RA組不同病情程度免疫指標水平比較

2.4RA組血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平與免疫功能指標相關性:相關性分析顯示,血清HDAC3與CD3+、CD4+T細胞比例均呈負相關(r值分別為-0.529、-0.464,P<0.05),與IgM、IgA、IgG均呈正相關(r值分別為0.460、0.491、0.445,P<0.05),與CD8+T細胞比例無相關性(r值為0.173,P>0.05);血清CTX-Ⅱ與CD3+、CD4+T、CD8+T細胞比例、IgM、IgA、IgG均無相關性(r值分別為-0.107、-0.182、0.149、0.215、0.178、0.156,P>0.05)。

2.5各組疾病活動度相關指標分析:RA組患者ESR、CRP水平顯著高于NC組,而活動組患者ESR、CRP水平高于緩解組(P<0.05)。見表7、8。

表7 RA組與NC組疾病活動度相關指標水平比較

表8 RA組不同病情程度患者的疾病活動度相關指標水平比較

2.6RA組血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平與疾病活動度的相關性:Pearson分析顯示,RA組患者血清CTX-Ⅱ與ESR、CRP、DAS28評分均呈正相關(r值分別為0.572、0.495、0.809,P<0.05)。血清HDAC3與ESR、CRP、DAS28評分均呈正相關(r值分別為0.540、0.519、0.864,P<0.05)。

3 討 論

ESR與CRP均是評價RA活動期的重要指標,其水平在機體發生炎癥或組織損傷時可在外周血中檢測到明顯上升,且會隨病情輕重而呈現出升降變化[9]。本研究中,RA組患者ESR、CRP水平顯著高于NC組,活動組患者ESR、CRP水平高于緩解組,與以往研究一致。RA作為一種自身免疫性疾病,免疫功能紊亂與其發病、進展密切相關,研究表明,T細胞(CD3+、CD4+、CD8+)、免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)均參與RA病理過程[10]。本研究發現,與NC組相比,RA組CD8+T細胞比例、IgM、IgA、IgG水平升高,CD3+、CD4+T細胞比例降低;緩解組CD3+、CD4+T細胞比例高于活動組,而IgM、IgA、IgG水平低于活動組,與王曉亮等[10]和鄒曉軍等[11]研究結果一致,進一步驗證RA發病過程與體液免疫、細胞免疫紊亂有關。因此,探究與RA免疫功能紊亂、疾病活動度相關的分子標志物,對于臨床治療及病情評價極其重要。

血清中CTX-Ⅱ含量是綜合反映關節軟骨損傷累計程度標志物,能夠準確預測關節軟骨受損情況。趙伊婷等[12]認為,膝關節骨性關節炎患者血清、尿液CTX-Ⅱ水平均增加,并與病程、軟骨損傷嚴重程度有關,可考慮用其評估早期膝關節骨性關節炎發生風險。本研究發現與上述研究結果一致,說明CTX-Ⅱ與該病發病和病情進展有關。HDAC是一種通過去除組蛋白乙?；鶃碚{節染色體結構和轉錄因子活性的酶,可以調節多種信號通路,包括核因子κB(nuclearfactor kappa-B,NF-κB),并影響細胞凋亡。張赫等[6]研究發現,HDAC3可以促進軟骨組織中NF-κB介導的炎癥反應,是運動治療骨關節炎的重要靶點。本研究中,RA患者血清HDAC3水平增加,說明HDAC3可能參與RA發病過程。本研究活動組HDAC3水平升高,說明血清HDAC3水平可能參與RA病情的活動、發展過程。進一步研究發現,CTX-Ⅱ、HDAC3均與ESR、CRP、DAS28評分呈正相關,說明二者與疾病活動度密切相關,并對RA患者的病情有一定預測價值。以往研究發現,在免疫系統中,HDAC3對外周T細胞成熟、調節性T細胞發育和功能較為重要[13]。本研究進一步發現,RA組血清HDAC3與CD3+、CD4+、IgM、IgA、IgG存在相關性,提示HDAC3參與RA免疫調節過程,HDAC3水平增加可能導致免疫指標水平升高,同時臨床中對HDAC3有效控制,可在一定程度上抑制RA進展。

綜上所述,RA患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平升高,HDAC3與RA免疫功能紊亂、疾病活動度密切相關,CTX-Ⅱ僅與RA疾病活動度有關。但本研究所取樣本量較小,且為單中心研究,可能導致結果有所偏倚,有待后續多中心大樣本研究加以驗證;仍未明確CTX-Ⅱ、HDAC3參與RA發生、發展具體調控機制,尚需后續開展基礎研究。