對乙酰氨基酚配伍腺苷蛋氨酸復方片劑的制備及質量評價

陳俊,唐其蔚,胡秀虹,譚榮,黃雨驥

(1.凱里學院,貴州 凱里 556011,2.黔東南州人民醫院,貴州 凱里 556099)

對乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)又名撲熱息痛,作為OTC類解熱鎮痛藥是目前全球最常用的解熱鎮痛藥物,其解熱作用緩慢而持久,且具有刺激性小、極少有過敏反應等優點,在推薦治療量范圍內通常被認為是安全的,但服用不當或藥物過量會引起藥物性肝損傷,目前是臨床上導致DILI最常見藥物,引起全世界范圍內越來越多的關注[1-2]。

腺苷蛋氨酸(S-adenosy-L-methionine,SAMe)于1952年由意大利科學家Cantoni發現[3],存在于人體所有組織和體液中的內源性物質及生物活性成分。大量的實驗研究表明,外源性SAMe通過調節肝細胞生長、分化和死亡的重要代謝產物可減輕肝癌的發生[4]。它可參與合成內源性谷胱甘肽,減弱氧化應激反應;促進腺苷蛋氨酸依賴性質膜磷脂的合成而恢復細胞質膜的流動性,降低術后急性總膽紅素增高;克服轉硫基反應障礙,促進了內源性解毒過程中巰基的合成;抑制肝星狀細胞的活化,減弱肝纖維化,增加DNA的甲基化作用,抑制惡性腫瘤的發生、發展[5]。鑒于對體內多種生化反應起重要作用,它的不足可引起多種病理生理及病理學改變,補充外源性的SAMe可以恢復體內不足引起的肝損傷及減低慢性肝病中肝硬化的發展[6-7]。

藥物性肝損傷(Drug-induced liver injury,DILI)是在服用某種或幾種藥物后,由藥物、藥物在體內的代謝產物以及輔料導致肝損傷或肝臟對其發生過敏反應引起的肝損傷[8]。藥物性肝損傷(DILI)發病率呈現上升趨勢。作為肝病大國,對DILI的認識并進行相關研究提供理論指導刻不容緩。國內外未見有文獻明確報道對SAMe和APAP復方制劑的研究。課題組前期研究表明SAMe對APAP引起的DILI有保護作用,其作用與SAMe的劑量呈相關性且效果優于等劑量的N-乙酰半胱氨酸。根據其生物藥劑學特性,有針對性地開展復方制劑的劑型研究,為一種安全有效復方制劑的開發和實際應用提供基礎理論依據。本課題的實施對開發具有副作用較小的對乙酰氨基酚復方制劑具有指導作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑

腺苷蛋氨酸(陜西森弗天然制品有限公司,批號:SX171005);對乙酰氨基酚(源葉生物科技有限公司,批號:B19M8E36136);聚乙烯吡咯烷酮(大連美侖生物技術有限公司,批號:N0928A);硬脂酸鎂(大連美侖生物技術有限公司,批號:M0509A);交聯聚乙烯吡咯烷酮(上海源葉生物科技有限公司,批號:B24N9S75970);低取代丙纖維素(阿拉丁試劑有限公司,批號:B1629352);交聯羧甲纖維素(北京索萊寶科技有限公司,批號:521K021);羧甲淀粉鈉(安徽山河藥用輔料股份有限公司,批號:J02M6R1);乳糖(大連美侖生物技術有限公司,批號:A000007);微晶纖維素(大連美侖生物技術有限公司,批號:M0126A);可壓性淀粉(北京索萊寶科技有限公司,批號:308M021);無水乙醇(重慶川東化工(集團)有限公司;批號:20170301);微粉硅膠(上海源葉生物科技有限公司,批號:141202)。

1.1.2 主要儀器

AUY120型分析天平(日本島津公司產品);超純水純化系統(四川沃特爾科技有限公司);紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);DP30A型單沖式壓片機(北京國藥龍立科技有限公司);ZRS-6G型溶出儀(天津市天大天發科技有限公司);YD-35型片劑硬度測試儀(天津盛達三合光學儀器有限公司);CS-2型脆碎度測試儀(天津市精拓儀器科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 APAP顆粒的制備工藝

原料藥與輔料過100目篩(篩孔徑0.15 mm)備用,將APAP、稀釋劑和崩解劑均勻混合,然后加入5%PVP乙醇溶液,混合均勻制成軟材(握之成團,觸之即散),20目(篩孔徑0.85 mm)整粒過篩,于50 ℃下干燥30 min,干燥后在20目篩(篩孔徑0.85 mm)進行整粒,加入潤滑劑(等量遞加)混勻,壓片。

1.2.2 APAP崩解劑、填充劑、潤滑劑的選擇

處方中APAP用質量分數為76.5%。填充劑用質量分數為11%,黏合劑用質量分數為7%,崩解劑用質量分數為5%,潤滑劑用質量分數為0.5%。分別以交聯聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)、低取代丙纖維素(L-HPC)、交聯羧甲纖維素鈉(CCNa)、羧甲淀粉鈉(CMS-Na)采用內加法,PVPP和CMS-Na以質量比1∶1采用內外加法作為崩解劑。固定以MCC為填充劑,PVP-K30為黏合劑,硬脂酸鎂為潤滑劑。分別以乳糖、微晶纖維素(MCC)、可壓性淀粉作為填充劑,固定以PVPP為崩解劑,PVP-K30為黏合劑,硬脂酸鎂為潤滑劑。分別以硬脂酸鎂,微粉硅膠作為潤滑,固定以MCC為填充劑,PVP-K30為黏合劑,PVPP為崩解劑。按制備工藝進行處方壓片,隨機選取6片進行溶出度的測定,并計算溶出度平均值,篩選合適的崩解劑、填充劑、潤滑劑。

1.2.3 對乙酰氨基酚顆粒輔料用量的優化

在以上單因素試驗結果的基礎上,固定處方其他因素,本次試驗確定PVP-K30為黏合劑,得最佳崩解劑,最佳稀釋劑,最佳潤滑劑,但其用量需進一步優化。采用正交試驗的方法,設計一個三因素三水平的正交試驗。通過L9(34)正交表,以APAP在15 min時的溶出度為主要考察指標,優化輔料的用量。因素水平表見表1。

表1 正交設計因素水平表

1.2.4 腺苷蛋氨酸顆粒處方設計

1.2.4.1 SAMe顆粒的制備工藝

將腺苷蛋氨酸及輔料分別過100目篩(篩孔徑0.15 mm)備用,按照要求取適量L-HPC、MCC、乳糖,采用等量遞加的方法加入研缽混合均勻,腺苷蛋氨酸的用質量分數為67%,微晶纖維素用質量分數為22.8%,乳糖用質量分數為9.2%,微粉硅膠用質量分數0.5%,低取代丙纖維素用質量分數0.5%,加入5% PVP-K30乙醇溶液制備軟材,20目篩(篩孔徑0.85 mm)制粒,50 ℃鼓風干燥30 min后,20目篩(篩孔徑0.85 mm)整粒,加入微粉硅膠作為潤滑劑(等量遞加)混勻,壓片。

1.2.4.2 填充劑的比例篩選

腺苷蛋氨酸的吸濕性較強,前期的實驗研究表明優選微晶纖維素和乳糖作為填充劑能很好解決吸濕性導致的顆粒不易成型。故本次優選兩者的比例作為優選的填充劑。按照《中國藥典》2020版 四部 9103 藥物引濕性試驗指導原則下的規定,對腺苷蛋氨酸的吸濕效果進行考察,從而確定填充劑的比例,微晶纖維素和乳糖的比例用量見表2。

表2 微晶纖維素和乳糖的比例

1.2.5 復方對乙酰氨基酚片劑的制備

本實驗按照前期篩選的最優處方和制備工藝,使用DP30A型單沖式壓片機,14號沖模為囊型模具制備復方片劑。

1.2.6 復方對乙酰氨基酚片的溶出度測定

從制得的復方片劑中隨機選取6片(批號20191110),溶出度采用(《中國藥典》2015年版 四部 通則 0931 第二法),以pH值6.8的磷酸鹽緩沖溶液1000 mL為溶出介質,升溫使溫度保持在(37±0.5)℃,轉速為50 r/min,放入已精密稱定的片劑,同時開始計時,分別在1,5,10,15,30,45 min時取樣10 mL,同時補加同溫等體積的溶出介質。用0.45 μm微孔濾膜過濾,取續濾液,精密量取續濾液1 mL置25 mL量瓶中,并用溶出介質稀釋至刻度。相似因子法評價復方對乙酰氨基酚片劑主藥成分的體外溶出度,簡單的模型非依賴性方法采用差異因子f1和相似因子f2比較溶出曲線。差異因子f1是計算在每一個時間點兩個曲線差異的百分率(%),是兩條曲線相對誤差的衡量參數。相似因子f2對偏差的平方根的倒數進行對數轉換。為兩條曲線溶出百分率(%)相似性評價的衡量參數。

f1={[|Rt﹣Tt|]/[Rt]}×100%

(1)

f2=50×log{[1+(1/n)(Rt﹣Tt)2]-0.5×100%}

(2)

式中:Rt為參比制劑,Tt為受試制劑在時間t的釋放度,n為時間點的個數。

1.2.7 外觀性質

隨機篩選實驗所制的片劑,考察其外觀性狀。

1.2.8 片重差異

按片重差異的測定方法(《中國藥典》2015版 四部 0101片劑),精密稱取自制片20片的總質量,求得平均片重。再分別精密稱定每片的質量,將每片質量與平均片重相減,再除以平均片重,即得質量差異百分比。按照限度規定:平均質量0.30 g以下的質量差異限度為±7.5%,0.30 g或0.30 g以上的為±5%。

1.2.9 硬度的測定

隨機取片劑6片,用硬度測定儀測定硬度。調整儀器上硬度指示為零,打開硬度盒蓋,讓藥片徑向放在頂柱與夾頭間,夾住被測藥片。開啟電源開關,按下啟動按鈕,當加壓指針右移,藥片破碎顯示的值即為硬度值。

1.2.10 脆碎度測定

按照(《中國藥典》2015年版 四部 通則0923)的要求,取10片藥片,用吹風機吹去脫落的粉末后精密稱量置圓桶中,轉動100次取出,同法除去粉末,精密稱重。

2 結果

2.1 對乙酰氨基酚的處方篩選

2.1.1 崩解劑的選擇

以PVPP、L-HPC、CCNa、CMS-Na用內加法,PVPP、CMS-Na質量比為1∶1用內外加法,綜合考慮選用PVPP作崩解劑。

2.1.2 稀釋劑的選擇

分別以乳糖、微晶纖維素、可壓性淀粉作為稀釋劑時主藥的溶出曲線結果見圖1,綜合考慮最終決定選用MCC作稀釋劑。

圖1 稀釋劑(填充劑)的選擇

2.1.3 潤滑劑的選擇

分別以硬脂酸鎂,微粉硅膠作為潤滑劑時主藥的溶出曲線結果見圖2,綜合考慮最終決定選用硬脂酸鎂作為潤滑劑。

圖2 潤滑劑的選擇

2.1.4 正交試驗方案及結果

正交試驗方案及結果見表3。由正交數據分析結果可知,因素C的極差最大,說明因素C對實驗結果影響較大,其次是因素A和因素B。影響溶出度的重要性依次為:因素C>因素A>因素B。A 影響因素A3>A2>A1,B 影響因素B1>B2>B3,C 影響因素C2>C1>C3。綜合分析最優組合為A3B1C2,即PVPP為崩解劑用質量分數為5%,MCC用質量分數為11%,PVP-K30的用質量分數為7%。

表3 正交試驗方案及結果

2.2 腺苷蛋氨酸的處方優化

優選稀釋劑MCC和乳糖的比例見表4,在此比例下的平衡吸濕量最低。

表4 微晶纖維素和乳糖比例的選擇

2.3 復方對乙酰氨基酚片劑處方的確定

復方對乙酰氨基酚片劑處方見表5。按制備方法,將主藥與輔料采用等量遞加的方法加入研缽混合均勻,加入5% PVP-K30乙醇溶液制備軟材,20目篩(篩孔徑0.85 mm)制粒,50 ℃鼓風干燥30 min后,20目篩(篩孔徑0.85 mm)整粒,加入潤滑劑硬脂酸鎂(等量遞加)混勻,壓片,即得復方對乙酰氨基酚片劑。

表5 復方對乙酰氨基酚片劑處方

2.4 相似因子法評價復方對乙酰氨基酚片劑主藥成分的體外溶出度

對于溶出相似性曲線,一般情況下,差異因子f1值≤15且相似因子f2≥50,則認為兩條溶出曲線相似,反之,認為不相似。結果見表6,f1=4.16<15,f2=67.42>50,說明自制復方對乙酰氨基酚片的主藥成分(對乙酰氨基酚)與通過一致性評價的市售產品(對乙酰氨基酚片,通化萬通藥業股份有限公司)溶出度相近,體外釋放度相似無明顯差異,本次試驗對自制的復方片劑具有參考價值。

表6 APAP與SAMe溶出曲線相似性比較

2.5 外觀檢查

所檢查的片劑表面完整光潔,色澤均勻,邊緣整齊,均符合中國藥典2015版四部制劑通則中0101片劑的要求。

2.6 片重差異

所制備的三批片劑的片重平均值分別為800.60,799.58,803.43 mg,根據藥典規定允許片重差異±5%,三批片劑的片重在760.57～840.63,759.60～839.56,763.26～843.60 mg之間,符合規定。

2.7 硬度的測定

三批片劑平均硬度分別為115.3,128.7,119.2 N,在100～150 N之間,符合標準規定。

2.8 脆碎度的測定

三批片劑平均脆碎度分別為0.11%,0.23%,0.19%,均小于1%,檢測無斷裂、龜裂及粉碎的片劑。符合片劑脆碎度檢查法標準規定。

3 討論

藥物的處方篩選中,APAP的溶解性不好,在制備過程中選用加入崩解劑可提高藥物的溶出度。SAMe是吸濕性很強的藥物通過大量的實驗篩選抗吸濕劑的種類和用量,找到了適宜的抗吸濕性輔料,從而嚴格控制了樣品制備過程中出現的吸潮現象。輔料的性質及用量可影響藥物的安全、有效、穩定和可控性,因此選擇恰當的藥物輔料是處方工藝篩選的重要步驟。

固體制劑口服給藥后,藥物的吸收取決于藥物從制劑中的溶出或釋放、藥物在生理條件下的溶解以及在胃腸道的滲透,對吸收具有重要影響[9]。體外溶出度試驗常用于指導藥物制劑的研發,評價制劑批間、批內質量的一致性,以及評價藥品處方工藝變更前后質量和療效的一致性等[10]。通常采用多條溶出曲線測定藥物的溶出行為,相對體內試驗具有更高的靈敏度和更強的區分能力,可更好地反映制劑質量的特點[11]。

普通口服固體制劑仿制藥質量一致性評價主要采用比較體外多條溶出曲線相似性這一技術手段進行[12]。本實驗中比較實驗室自制的復方對乙酰氨基酚片劑主藥成分與市售的萬通藥業對乙酰氨基酚片劑的體外溶出曲線時,能客觀反映制劑特點、具有適度的靈敏度和區分力。

本節實驗參照《中國藥典》2015版 四部 0101片劑項下的要求,主要針對自制復方片劑的外觀性狀、片重差異、脆碎度、硬度、含量測定以及穩定性實驗建立初步的標準。為了制劑中主藥成分可同時測定,本實驗采用高效液相色譜法。它具有分離效能高、分析速度快、應用范圍廣等特點,在藥品檢驗中應用較廣泛。