高效液相色譜法在大棗質量控制中的應用

李杰 祝珊珊 秦飛 王雪穎

(廈門醫學院藥學系,福建 廈門 361023)

大棗為鼠李科植物棗ZiziphusjujubaMill.的干燥成熟果實[1],別名紅棗、干棗、棗子等,味甘,性平,具有補中益氣、養血安神功效,既是常用的中藥材,又是一種營養極其豐富的食品,即藥食同源。大棗中含有環磷腺苷、黃酮類、多糖、三萜類、酚類等多種生物活性物質[2]。高效液相色譜法具有快速、高效、靈敏等特點,在中藥質量控制中得到廣泛的應用,已成為中藥質量評價研究中重要方法之一[3]。作者通過查閱整理近年的文獻,總結歸納高效液相色譜法在大棗質量控制中的應用現狀,旨在為大棗質量控制深入研究提供參考。

1 棗中成分的含量測定

1.1有機酸 有機酸作為棗果中重要的風味指標之一,對果實的營養價值有著重要的作用[4]。大棗中的酸類物質可以起到免疫調節作用,提高大鼠的免疫應答,降低自身體內的低抗體應答[5]。馬倩倩等[6]采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器法,經水浴超聲、離心、膜過濾提取棗果實中的有機酸,可以準確、高效的測得草酸、酒石酸、奎寧酸、蘋果酸、檸檬酸、富馬酸的含量。

1.2糖類 棗中糖分含量占干物質的60%～80%,按聚合度不同可分為多糖、低聚糖和單糖。棗多糖具有增強免疫力、鎮靜、補氣養血及抗腫瘤等多種生物學活性[7]。王向紅等[8]建立了柱前衍生高效液相色譜法對金絲小棗、大荔龍棗等8種棗中水溶性多糖的單糖組成及其比例進行分析比較,結果顯示8種棗多糖均由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖6種單糖組成,其單糖組成比例存在很大差異。

1.3維生素類 維生素C又稱 L-抗壞血酸,廣泛存在于新鮮的水果及蔬菜中,是人體新陳代謝所必需的營養物質。李玉明等[9]采用高效液相色譜法對鮮棗中維生素C進行了分析研究,以純水為流動相,檢測波長267 nm,溫度30℃為色譜條件,此方法簡單、快速、準確度高,適用于鮮棗中維生素C含量的測定。β—胡蘿卜素是類胡蘿卜素之一,在進入人體后可以轉變為維生素A。袁瑾等[10]采用反相HPLC法,以甲醇-四氫呋喃為流動相,在5.7 min內就能完成滇刺棗中β-胡蘿卜素的分析測定。

1.4萜類 五環三萜酸是大棗的主要活性成分之一,主要包括齊墩果酸、熊果酸、樺木酸等。現代藥理究發現,棗中樺木酸、齊墩果酸和熊果酸對多種疾病有治療作用。崔毅軒等[11]建立了分散液液微萃取結合高效液相色譜法(DLLME-HPLC)同時對大棗中的白樺脂酸(BA)、齊墩果酸(OA)及熊果酸(UA)含量進行測定。

1.5酚類 酚類物質是果實生長代謝過程中的次生產物,它對植物的生長發育和調節、基因的誘導表達、信號轉導、果蔬產品的褐變、生物固氮有一定的影響[12]。念紅麗等[13]利用高效液相色譜法分別對全綠、綠白、半紅和全紅4個成熟期的冬棗果皮中游離態、酯化態和結合態多酚進行了定性定量檢測分析。

1.6黃酮類 紅棗中黃酮類化合物的生物活性主要表現為清除自由基能力、抗氧化和抗疲勞作用等。李喜悅等[14]采用HPLC方法對14個品種大棗中所含的槲皮素-3-O-洋槐糖苷、蘆丁、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷5種黃酮苷同時檢測。

1.7環核苷酸類 環磷酸腺苷(cAMP),是核苷酸的衍生物,作為“第二信使”的環磷酸腺苷是有機體中廣泛存在的一種重要的生理活性物質,參與多種生理生化過程的調節[15]。李輝等[16]采用高效液相色譜(HPLC)法準確測定環磷酸腺苷(cAMP)含量。

1.8內源性激素 植物激素是由植物自身代謝產生可調節植物生理反應的活性物質,也被稱為植物天然激素或植物內源激素[17]。劉英翠[18]以棗果、棗葉片為實驗材料,建立了高效液相色譜法同時測定棗果、葉片中4種內源激素赤霉素(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、玉米素(ZT)、脫落酸(ABA)含量的測定方法。

1.9真菌類 鏈格孢菌是在自然界中廣泛分布的一種常見植物病原真菌和腐生真菌,能引發紅棗縮果、黑斑病等病害,影響紅棗的品質和產量[19]。鄒良君等[20]采用超高效液相色譜-串聯質譜法,建立了一種用于農產品檢測的快速樣品前處理技術(QuEChERS)方法檢測紅棗中騰毒素(Ten)、鏈格孢霉素(ALT)、鏈格孢酚甲基乙醚(AME)和鏈格孢酚(AOH)4種鏈格孢霉毒素(ATs)的含量。

2 棗中添加劑的測定

2.1矯味劑 甜蜜素、糖精鈉和安賽蜜均為非營養型甜味劑,具有甜度高、用量少等特點。GB/T 2760-2014標準明文規定這些甜味劑使用的范圍和限量,并不允許在鮮果中添加[21]。祝平等[22]建立一種快速、高效、準確的測定冬棗和紅棗中甜蜜素、安賽蜜和糖精鈉的超高效液相色譜-三重四級桿串聯質譜聯用法(UPLC-MS/MS)。

2.2防腐劑 苯甲酸是一種使用較為廣泛的食品添加劑,常用于食品防腐。但過量食用可誘發癌癥,長期使用可誘發哮喘、蕁麻疹及血管性水腫等變態反應,對人體健康造成不利影響[23]。國家標準對于苯甲酸在食品中的添加有嚴格限制,而且在部分食品中禁止使用。鄭曉冬等[24]采用剪切-均質-超聲相結合的方式提取紅棗中的苯甲酸,選擇了液相色譜流動相類型與配比,建立了一種水溶液直接浸提結合高效液相色譜法檢測紅棗中苯甲酸的方法。

3 棗中農藥殘留的測定

為了防治害蟲的侵襲,紅棗在種植過程中都會噴灑農藥,如果噴灑不當或者過量,會影響人們的身體健康,有必要對其含量控制。沈慧慧等[25]建立QuECHERS-超高效液相色譜-串聯質譜法快速檢測紅棗中29種農藥殘留量。

4 小結與展望

大棗做為藥食兩用的中藥材,受到越來越多的關注,對它的質量要求也是越來越規范。本文通過總結高效液相色譜法在大棗質量控制方面的應用,旨在為大棗質量控制的深入研究,為建立簡單、快速、準確的質控方法提供理論參考。目前高效液相色譜法已經用于測定棗中有機酸、糖類、維生素類、黃酮類、萜類、酚類、環核苷酸類、內源性激素及作用于植物的真菌類,此外還有外源性的如矯味劑、防腐劑以及農藥殘留。但對于大棗的研究,橫向寬度和縱向深度有待進一步拓展,一方面利用高效液相色譜法通過選取部分有效成分指標開展指紋圖譜和一致性評價研究,相對系統地評價紅棗的質量;另一方面可以在質量評價的基礎上,建立有效成分和生物活性相關的譜效關系,進一步探明作用機理,以期待將大棗更好地開發應用。