MTHFR(C677T)基因多態性和同型半胱氨酸與急性腦梗死患者靜脈血栓形成的相關性研究

潘秀鋒,李付廣,李敏婷,吳愛娟

廣州醫科大學附屬第六醫院/清遠市人民醫院分子診斷中心,廣東清遠 511518

隨著經濟的高速發展,人們的生活水平得到大幅度提升,老齡人口快速增長,心腦血管疾病發病率日益升高,而腦卒中成為一種臨床中常見的腦血管性疾病[1]。據統計,我國每年新發腦卒中患者高達200萬人,因腦卒中死亡約165萬人,腦卒中已成為影響我國居民健康的主要殺手之一[2]。部分腦卒中患者出現腦栓塞、腔隙性腦梗死及腦血栓等癥狀,這類情況都被稱為腦梗死,其中急性腦梗死占比最高,好發于50歲以上的老年群體。腦梗死是發病率較高的神經系統疾病。有研究發現,急性腦梗死患者通常腦部發生不同程度血液循環障礙,其發病機制較為復雜,主要原因為血管內形成血栓,造成血管堵塞導致腦部組織缺血壞死[3]。急性腦梗死患者發病初期多有眩暈、頭暈、頭疼、肢體麻木等癥狀,后期會引發偏盲、失語及下肢深靜脈血栓形成等癥狀,而下肢深靜脈血栓形成為急性腦梗死的常見并發癥[4]。另有研究發現,多種心腦血管疾病的發生與機體內高濃度同型半胱氨酸(Hcy)有密切關系,而亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)能催化Hcy代謝,若MTHFR催化作用下降會導致Hcy大量積累[5-6]。有研究表明,MTHFR的基因上第677位堿基發生異常,由胞嘧啶(C)突變為胸腺嘧啶(T),進而降低了酶的活性,造成Hcy濃度的升高[7-8],因此,MTHFR(C677T)基因的多態性跟急性腦梗死患者靜脈血栓的形成可能存在相關性。本研究探討了MTHFR(C677T)基因多態性和Hcy與急性腦梗死患者靜脈血栓形成的相關性,以及急性腦梗死患者靜脈血栓形成的危險因素。現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2020年11月至2021年10月本院收治的334例急性腦梗死患者作為腦梗死組,另選取同期于本院體檢中心就診的100例健康體檢者作為健康組。患者按照是否形成靜脈血栓將腦梗組分為血栓組(80例)和非血栓組(254例)。納入標準:(1)符合急性腦梗死診斷標準[9]且經MRI或CT檢查確診;(2)年齡>18歲;(3)發病時間≤1周;(4)首次發病且神經功能缺損評分(NIHSS)得分≥1分;(5)頸部經超聲檢查者。排除標準:(1)短暫性腦缺血者;(2)出血性腦卒中者;(3)腎功能不全者;(4)合并腫瘤者;(5)存在腦靜脈竇血栓者;(6)有肺栓塞史或下肢深靜脈血栓形成史者;(7)有靜脈或下肢靜脈曲張手術史者;(8)經常接受抗凝藥物治療者;(9)臨床資料不全者。腦梗死組男226例,女108例;平均年齡(63.63±6.84)歲。健康組中男62例,女38例,平均年齡(64.13±7.38)歲。腦梗死組和健康組年齡、性別等比較,差異均無統計學意義(P>0.05),具有可比性。腦梗死組中局部腫脹48例(14.37%),疼痛32例(9.58%),皮膚溫度升高17例(5.09%),足背快速屈伸疼痛26例(7.78%)。血栓組中,遠端血栓62例(77.50%),近端血栓患者18例(22.50%),受累靜脈部位主要為腓腸肌間靜脈、股總靜脈、股淺靜脈、脛后靜脈及腓靜脈等。本研究所有研究對象均知情同意,且通過醫院醫學倫理委員會審批(IRB-2022-001)。

1.2方法

1.2.1收集臨床資料 收集所有研究對象的臨床資料,包括糖尿病史、高血壓史、飲酒史、吸煙史、MTHFR(C677T)基因分型、空腹血糖水平、Hcy水平、血脂相關指標水平、影像學檢查結果等。

1.2.2檢測血漿Hcy和相關血脂指標水平 抽取所有研究對象2 mL外周血置于分離膠抗凝管中,采用全自動分析儀的循環酶法檢測血漿Hcy和血脂相關指標水平。若Hcy≥15 μmol/L,則為高Hcy血癥;低密度脂蛋白>3.3 mmol/L,甘油三酯>1.7 mmol,總膽固醇>5.7 mmol,滿足上述條件其中1條則為高脂血癥。

1.2.3檢測MTHFR(C677T)基因多態性 制備DNA樣本:抽取所有研究對象靜脈血2 mL,置于乙二胺四乙酸抗凝管中,用致善DNA提取試劑盒(廈門至善生物科技股份有限公司,閩廈械備20180360號)對血液基因組進行DNA提取和純化。采用百傲試劑盒(上海百傲科技股份有限公司,國械注準20163402259)進行PCR擴增后雜交顯色,再掃描及分析數據,MTHFR基因型分為677TT、677CT、677CC 3種。

2 結 果

2.1腦梗死組和健康組MTHFR (C677T)基因型和等位基因頻率比較 腦梗死組MTHFR (C677T)基因TT基因型與T等位基因頻率均高于健康組,差異均有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 腦梗死組和健康組MTHFR(C677T)基因型和等位基因頻率比較[n(%)]

2.2血栓組與非血栓組MTHFR (C677T)基因型和等位基因頻率比較 血栓組MTHFR (C677T) 基因CT基因型、TT基因型和T等位基因頻率均高于非血栓組,差異均有統計學意義(P<0.05),見表2。

表2 血栓組與非血栓組MTHFR(C677T)基因型和等位基因頻率比較[n(%)]

2.3血栓組和非血栓組臨床資料比較 血栓組和非血栓組年齡、吸煙情況比較,差異均有統計學意義(P<0.05),見表3。

表3 血栓組和非血栓組臨床資料比較[n(%)]

2.4血栓組與非血栓組攜帶MTHFR(C677T)基因的Hcy水平比較 血栓組和非血栓組攜帶MTHFR(C677T)基因TT、TC、CC基因型間Hcy水平比較,差異均有統計學意義(P<0.05);血栓組與非血栓組攜帶MTHFR(C677T)基因TT基因型患者的Hcy水平高于CT和CC基因型,且CT基因型高于CC基因型,差異均有統計學意義(P<0.05),見表4。

表4 血栓組與非血栓組MTHFR(C677T)基因的Hcy水平比較

2.5急性腦梗死患者靜脈血栓形成的二元Logistic回歸分析 將是否形成靜脈血栓作為因變量,賦值如下:形成=1,不形成=0。將上文表2、3、4中差異有統計學意義的指標[年齡(<60歲=0,≥60歲=1),Hcy(<15 μmol/L=0,≥15 μmol/L=1),MTHFR(C677T)基因基因型(CC基因型=1,CT基因型=2,TT基因型=3),吸煙情況(吸煙=0,不吸煙=1)]作為自變量。經二元Logistic回歸分析結果顯示,攜帶MTHFR(C677T)基因TT基因型、Hcy≥15 μmol/L是急性腦梗死患者靜脈血栓形成的危險因素(P<0.05),見表5。

表5 急性腦梗死患者靜脈血栓形成的二元Logistic回歸分析

3 討 論

靜脈血栓的發病機制較為復雜,有研究發現,血栓形成的3種狀態互為關聯,相互因果,即血液高凝、血液瘀滯、血管內皮損傷這3種狀態[10-13]。而急性腦梗死患者靜脈血栓形成可能是由多種因素引起的,如年齡大、飲酒、吸煙、高血壓、血液呈高凝狀態等因素,預防腦梗死患者靜脈血栓形成是降低腦卒中患者的致殘率和致死率的關鍵[11]。

Hcy是一種蛋氨酸循環過程中的中間產物,人體內高水平的血漿Hcy 能加速血管硬化,促進靜脈血栓的形成,進而引發心腦血管疾病的發生[14]。MTHFR作為Hcy在機體代謝中起關鍵作用的一種酶,其C677T基因突變會導致MTHFR的熱穩定性及活性降低,引發Hcy代謝異常而致使患高Hcy血癥的風險升高[15]。而本研究結果顯示,腦梗死組MTHFR(C677T)基因TT基因型與T等位基因頻率均高于健康組,差異均有統計學意義(P<0.05),這一結果與既往研究結果相符[16],說明該基因存在一定的遺傳變異和基因多態性。而MTHFR(C677T)基因突變是FROSST等[17]首先發現的,位于MTHFR基因第677位的核苷酸上,有C等位基因取代T等位基因,由高度保守編碼的丙氨酸轉變為纈氨酸,使得MTHFR與黃素腺嘌呤二核苷酸的結合度大大降低,故C677T基因突變會導致MTHFR的熱穩定性及活性降低,致使MTHFR基因純合突變后酶的活性只有原先的34%,雜合突變后酶的活性降低至約71%。而本研究結果顯示,攜帶MTHFR(C677T)基因TT基因型、Hcy≥15μmol/L是急性腦梗死患者靜脈血栓形成的危險因素(P<0.05);血栓組和非血栓組攜帶MTHFR(C677T)基因TT基因型、CT基因型、CC基因型患者的Hcy水平比較,差異均有統計學意義(P<0.05);血栓組與非血栓組患者的攜帶MTHFR(C677T)基因TT基因型患者的Hcy水平高于CT基因型、CC基因型,且CT基因型高于CC基因型,差異均有統計學意義(P<0.05),說明Hcy水平對急性腦梗死患者靜脈血栓形成具有重要作用,而攜帶MTHFR(C677T)基因TT基因型在其中起著關鍵性作用,這一結論與既往研究結果一致[18]。急性腦梗死的發病機制較為復雜,可能為MTHFR基因由于基因缺陷引發代謝紊亂,從而罹患心腦血管疾病,其中C667T位點基因突變引起的急性腦梗死患者形成靜脈血栓的機制復雜,其間有密切關系,高Hcy水平能抑制纖維系統,損傷血管壁內皮細胞、激活凝血因子的作用,有著致栓的效果。王陽等[19]通過Meta分析對我國人群MTHFR(C677T)基因多態性和靜脈血栓癥的相關性進行研究發現,我國人群中攜帶MTHFR第C677位突變T等位基因能使靜脈血栓的發病風險大幅度提升。LI等[20]研究證實了MTHFR(C677T)基因多態性對 Hcy 水平變化的協同作用增加了中國人群中缺血性腦卒中發生的風險,且攜帶MTHFR(C677T)基因TT基因型的血漿Hcy水平高于CC和CT基因型(P<0.05),與本結果一致。

MTHFR(C677T)基因多態性會對Hcy水平產生影響,從而引發急性腦梗死患者靜脈血栓的形成。在臨床中對于攜帶MTHFR(C677T)基因TT基因型的急性腦梗死患者應給予關注,預防靜脈血栓的形成。本研究的不足在于樣本量少及影響因素種類較少,在以后的臨床研究中會彌補這些方面的不足。