干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術在結核病臨床診斷中的應用

王珍，王志遠，肖婷婷

聊城市第四人民醫院檢驗科，山東聊城 252000

我國肺結核發病率高，嚴重危害人民群眾的生活，故及時診治是肺結核防治的重要環節。目前，肺結核是一種在全球范圍內普遍存在的、不可忽略的公共健康問題[1]。肺結核的臨床癥狀多種多樣，且隨病情進展可影響到全身系統，從而危及到患者的健康，故應盡早確診，并針對病情進行有針對性的治療，以提高患者的預后。痰培養是對結核病臨床診斷的“金標準”。但是，對分枝桿菌進行培養，耗時長、效率低、陽性檢出率不理想等問題[2-3]。因此，如何找到一種能更好地提高肺結核患者的預后，就成了醫學領域的重要課題。干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術是以酶聯免疫檢測法為基礎，逐步發展而來的一種新方法，是用對抗原或抗體展開檢測，在獲取患者血清后，對酶復合物進行常規稀釋，并與說明書的內容相結合，以區分診斷檢驗中的陰性或陽性結果，從而對患者的疾病狀況進行判斷，干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術在診斷效率和精度上都有顯著的提升，在結核病的臨床診斷中發揮重要價值[4]。為探究結核病臨床診斷中，采用干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術的有效性，本次研究選取2022 年2 月—2023 年2 月聊城市第四人民醫院檢驗科98 例疑似結核病患者開展調研。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院檢驗科就診的98 例疑似結核病患者為研究對象，女38 例，男60 例；年齡18~82 歲，平均（50.12±6.08）歲；體質指數18~25 kg/m2，平均（21.26±0.89）kg/m2。本研究經過醫院醫學倫理委員會批準同意。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①具有良好的溝通和表達能力；②自愿入組研究，簽署知情同意書。

排除標準：①神經系統疾病患者；②近期接受免疫抑制劑治療或糖皮質激素治療的患者；③合并支氣管哮喘患者；④肝腎功能異常患者。

1.3 方法

結核菌素皮膚過敏試驗。采用皮內注射法，將0.1 mL 純蛋白衍生物原液作為備用，再將0.2 mL 純蛋白衍生物原液與0.9%氯化鈉注射液混合，將其稀釋到0.4 mL。純蛋白衍生物的劑量：第1 次測試溶液為0.000 1 mg/0.1 mL。采用傳統的滅菌方法，將0.1 mL 的純蛋白衍生物注入上肢前臂區，2~3 d后進行試驗，并對結果進行分析。對病灶周圍及周圍組織進行有無硬結，同時對病灶周圍組織進行檢查，同時對病灶周圍組織進行測量，并對病灶周圍組織進行測量，以平均≥5 mm 病灶為陽性，<5mm 的病灶為陰性。

干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術。采用酶聯免疫斑點試劑，收集被試患者靜脈血10 mL，用乙二胺四乙酸抗凝，2 h 后內將被單核細胞洗滌兩次，并在酶聯免疫斑點培養板前用抗干擾素-γ 抗體包裹，加入100 μL 細胞懸浮液，每孔2×105 個細胞。在陽性對照組的孔隙中，添加5 μg/mL 濃度的植物血凝素；禁止將刺激物加入到陰性對照組的每個孔隙中。在實驗孔中添加具有5 μg/mL 濃度的特異抗原刺激劑，如PoolB、ESAT-6、PoolA。將該培養板置于含有5% CO2且溫度37℃的培養箱中，繼續進行16~24 h 培養。2 h 后清洗該板，添加生物素抗體干擾素-γ，溫育1 h。以親和素作標記二抗體，繼續培養1 h 后加入基質溶液，進行顯色。用自來水沖洗后，用酶聯免疫斑點測定儀檢測斑塊數目。檢驗結果（每個孔洞的斑塊數目不包括陰性孔洞的斑塊數目）≥30 為陽性；如果PoolB、ESAT-6、PoolA 中至少有1 種抗原呈陽性，該檢測結果為陽性；3 項抗原檢測均為陰性時，檢測結果為陰性。

1.4 觀察指標

將痰培養結果作為診斷的金標準。對比結核菌素皮膚過敏試驗、干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術診斷的陽性檢出率。

對比結核菌素皮膚過敏試驗、干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術診斷的診斷效能。包含敏感度、特異度、準確性。靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%；特異度=真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100%；準確性=（真陽性例數+真陰性例數）/總例數×100%。

1.5 統計方法

采用SPSS 23.0 統計學軟件進行數據分析，計數資料以例數（n）和率（%）表示，進行χ2檢驗。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種檢查方法陽性檢出率對比

痰培養（金標準）顯示，陽性40 例（檢出率：40.82%）、陰性58 例（檢出率：59.18%）。結核菌素皮膚過敏試驗檢測，陽性48 例（檢出率：48.98%）、陰性50 例（檢出率：51.02%）。干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術檢測，陽性41 例（檢出率：41.84%）、陰性57 例（檢出率：58.16%）。見表1。

表1 兩種檢查方法陽性檢出率對比（n）

2.2 兩種檢查方法的診斷效能對比

干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術的特異度與準確性均高于結核菌素皮膚過敏試驗，差異有統計學意義（P<0.05）；兩種檢驗方法的敏感度比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

表2 兩種檢查方法的診斷效能對比（%）

3 討論

結核病是由結核桿菌感染引起的一種慢性傳染病，是全球第二大傳染病，也是僅次于艾滋病的第二疾病。我國是肺結核高發的大國，患者人數位居全球第二，而且其感染人數持續增長，已成為影響人民生命和生命的重要因素。當前，結核分枝桿菌的臨床確診主要依靠臨床癥狀、影像學和病理等綜合方法，但由于其臨床和影像學特征不明確，容易造成漏診，而病理學方法又存在樣本難以獲取等問題[5]。目前，臨床上多以細菌學檢查為主，費時費力且靈敏度不高，難以達到臨床要求。結核菌素皮膚過敏試驗是目前臨床上使用最多的一項免疫檢查技術，但是由于其容易受到非結核分枝桿菌感染和卡介苗的感染而出現假陽性[6-7]。

近年來，以干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術為代表的新型免疫學方法，已經在臨床上廣泛使用。現代研究都表明，干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術對于結核桿菌的特異性比較高。在獲得疑似結核病患者血液樣品后，可以對受檢者進行全血檢測，通過識別伽馬干擾素水平變化，從而對患者身體狀況做出詳細判斷，從而判斷是否發生結核桿菌感染等情況[8]。干擾素體外釋放檢測可用于檢測抗結核治療期間人體產生的抗結核免疫反應，其檢測靈敏度和特異性均較高，適用于各種結核病患者的輔助診斷[9]。干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術與抗結核治療有效相關，與患者的臨床癥狀、臨床分型、年齡、性別以及健康狀況等均無相關性，具有良好的可重復性[10]。

干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術可以迅速地檢測到患者的伽馬干擾素反應水平，可以根據T細胞的介導狀態做出判定，并根據這些重要的生化指標來判定患者的病情進展，從而確保其準確性[11]。具本次調查結果顯示，干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術的特異度（91.38%）與準確性（90.82%）均高于結核菌素皮膚過敏試驗（72.41%、75.51%）（P<0.05）。張宏軍等[12]學者研究結果表明，干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術的特異度（92.00%）與準確性（90.00%）均高于結核菌素皮膚過敏試驗（72.00%、75.00%）（P<0.05），與本文研究結果類似。結核病的確診具有很高的特異度與準確性，從而能夠利用干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術將結核病進行快速準確地鑒別，因此，在臨床上，利用干擾素的離體酶聯免疫檢測技術，能夠幫助醫生迅速地做出診斷，特別是對于肺外結核病有著非常高的敏感性。在臨床上，對于結核潛伏感染或合并免疫系統疾病的患者，采用干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術仍能維持高的陽性檢出率，干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術已有取代結核菌素皮膚過敏試驗的趨勢，干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術在結核病臨床診斷可以滿足結核病臨床診斷的需要，且操作步驟簡單、結果精準等優勢[13]。可以減少誤診、漏診等現象的發生率，為結核病的早期預防、早期治療奠定堅實的基礎，干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術在結核病臨床診斷中有著廣泛的應用前景[14-15]。

綜上所述，干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術在結核病臨床診斷中應用效能較高，具有廣泛的應用價值。