兩湖地區肺癌人群MICA 基因分布比較分析

陳慧，陳純靜，李育萌，陳恩

（1.南華大學附屬第一醫院病案室，湖南 衡陽 421001；2.湖南中醫藥大學，湖南 長沙 410208；3.南華大學附屬第一醫院檢驗醫學中心，湖南 衡陽 421001）

肺癌是目前全球發病率和死亡率最高的腫瘤， 且呈現發病率逐年增高、 發病年齡年輕化趨勢。 肺癌的發生發展與吸煙、大氣污染、危險因素暴露及基因變異等多種因素特別是人群遺傳背景有關[1-2]。 MICA 是NK 細胞表面NKG2D 分子的配體，MICA 與NK 細胞表面NKG2D 分子結合后，可以通過調節NK 細胞功能來發揮重要的作用[3]。MICA 基因和多種腫瘤的發生發展密切相關，我們前期研究也表明MICA 基因多態性和肺癌的易感性相關， 但不同種群特別是兩湖地區肺癌人群之間MICA 分布是否有差異仍不清楚。本研究選擇兩湖地區肺癌人群，對其MICA 的分布進行比較分析。

1 材料與方法

1.1 研究對象 160 名肺癌患者分別來自湖北省荊州市和湖南省衡陽市，其中荊州市100 例，衡陽市60 例；所有患者均經病理診斷為肺癌患者；研究對象相互間無親緣關系； 并符合倫理委員會的其他相關要求。

1.2 外周血基因組DNA 的提取 收集肺癌患者新鮮的EDTA 抗凝靜脈血2 mL， 采用WHO 推薦的標準鹽析法提取gDNA，測定波長260 nm 和280 nm的OD 值，A260/A280 值在1.6 ～1.8 范圍內為宜。

1.3 MICA 基因分型方法 采用PCR-SSP(PCR sequence-specific primers) 與PCR-SBT （PCR sequence-based typing） 兩種不同的方法對樣本進行MICA 基因分型，具體方法參照文獻進行[4-5]。

1.4 統計學分析 MICA 等位基因頻率、MICA 基因型頻率、Hardy-Weinbergequilibrium (HWE) 采用SHESIS 軟件（http://analysis.bio-x.cn）計算獲得，χ2檢驗、 單因素方差分析及t檢驗采用SPASS 18.0軟件完成。

2 結果

2.1Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗 所選擇的研究樣本經Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗分析表明， 各等位基因的分布理論頻率與觀察頻率之間無顯著差異， 表明本實驗所選樣本符合Hardy-Weinberg平衡（χ2=31.29，P=0.6913）。

2.2 兩地肺癌人群一般資料比較分析 本組研究對象分別來自湖南省衡陽市和湖北省荊州市的確診肺癌患者，衡陽肺癌患者60 例，平均年齡61.73歲（36~83 歲），其中男性49 例（81.7%），女性11 例（18.3%）；荊州肺癌患者100 例，平均年齡60.9 歲（33~81 歲），其中男性69 例（69.0%），女性31 例（31.0%）； 兩組人群中性別和年齡間無統計學差異，見表1。

表1 兩地肺癌人群一般資料比較

2.3 兩地肺癌人群MICA 等位基因頻率分布差異分析 衡陽組和荊州組各檢出8 種MICA 等位基因，其中衡陽組中未檢出MICA*027，荊州組中未檢出MICA*009N； 荊州患者組中分布頻率最高的3 種等位基因是MICA*00201、MICA*019 和MICA*010；衡陽患者組中分布頻率最高的3 種等位基 因 是 MICA*010、MICA*00201 和 MICA*01201； 兩組間MICA 等位基因分布存在統計學差異（χ2=16.75，P=0.0327），見表2。

表2 兩地區肺癌人群MICA 等位基因頻率分布差異

2.4 兩地肺癌人群MICA 等位基因型差異分析衡陽組和荊州組共檢出28 種MICA 等位基因型，其中荊州組中檢出24 種，衡陽組中檢出19 種。 但兩地肺癌人群MICA 等位基因型分布無統計學差異（χ2=39.23，P=0.0609），見表3。

表3 兩地肺癌人群MICA 等位基因型差異

2.5 兩地肺癌人群MICA-STR 等位基因頻率分布差異分析 衡陽組檢出5 種MICA-STR 等位基因，荊州組中檢出4 種MICA-STR 等位基因； 荊州組中未檢出MICA-A6。兩地肺癌人群MICA -STR 等位基因頻率分布無統計學差異 （χ2=5.54，P=0.2362），見表4。

表4 兩地肺癌人群MICA-STR 等位基因頻率分布

2.6 兩地肺癌人群MICA -STR 等位基因型差異比較 衡陽組和荊州組共檢出14 種MICA -STR 等位基因型，其中荊州組中檢出14 種，衡陽組中檢出10 種。 但兩地肺癌人群MICA -STR 等位基因型分布無統計學差異（χ2=19.11，P=0.1203），見表5。

表5 兩地區肺癌人群MICA-STR 等位基因型差異

3 討論

肺癌是目前世界上發病率和死亡率最高的惡性腫瘤，并且肺癌患者逐年趨于年輕化。 據湖南省和湖北省腫瘤年報顯示， 湖南省癌癥新發病例數約15 萬/年、 湖北省癌癥新發病例數約17 萬/年，兩省因癌癥死亡數均約為10 萬/年，肺癌在新發和死亡的病例中仍排名第一。 肺癌發病機制復雜，與多種因素特別是人群遺傳背景有關， 大量的研究開始關注于肺癌與基因多態性之間的關聯性研究。 通過腫瘤與基因多態性相關性的研究，可以在腫瘤預防、精準診療、預后評估等方面為腫瘤臨床防治提供指導。

MICA 基因位于第6 號染色體的6p21.3 區域的MHC 基因座位內， 包括了6 個外顯子結構和5個內含子結構，與MHC-I 類基因的組織排列方式十分相似，屬非經典的MHC Ⅰ類基因家族[6-7]。MICA 基因第5 外顯子和其余幾個外顯子不相同，其在不同型別之間具有微衛星的多態性， 一般有4~10 個串聯重復序列，根據微衛星GCT 串聯重復的數目差異，可將其分為A4~A10 等不同類型的等位基因。 已有大量研究表明MICA 與多種腫瘤相關，MICA 在多種腫瘤的轉歸的過程中發揮了重要的作用[8-12]。 我們前期研究表明，MICA 等位基因多態性與肺癌的易感性間存在關聯性[13]，但對不同地區人群之間差異未進行比較。 在本研究中，我們選擇湖南和湖北即兩湖地區的漢族肺癌患者人群進行研究， 對其MICA 基因分布特征進行分析研究。結果表明，在兩湖地區肺癌人群MICA 基因分布之間存在統計學差異，也是首次報道。

在進行兩湖地區肺癌人群研究中， 湖北省選擇荊州市，湖南省選擇衡陽市。 因衡陽和荊州對兩地人群都有很好的代表性。 荊州地處湖北之中、中部之中、江漢平原腹地，總面積1.41 萬平方公里，常住人口為523 萬， 是漢地九州之一和楚文化的發祥地之一。 衡陽位于湖南省中南部，總面積1.53萬平方公里，常住人口為664 萬人，湘南地區的政治、經濟、軍事、文化中心。 《尚書·禹貢》記載，“荊及衡陽惟荊州”[14]，荊州及衡陽都具有悠久的歷史，保持了遺傳的持續性，衡陽及荊州兩地對兩湖地區肺癌人群MICA 基因分布研究具有很好的代表性。

本研究中衡陽組和荊州組各檢出8 種MICA等位基因，其中衡陽組中未檢出MICA*027，荊州組中未檢出MICA*009N； 荊州患者組中分布頻率最高的3 種等位基因是MICA*00201、MICA*019和MICA*010； 衡陽患者組中分布頻率最高的3種等位基因是MICA*010、MICA*00201 和MICA*01201； 兩組之間MICA 等位基因分布間存在統計學差異， 結果表明兩湖地區肺癌人群MICA 等位基因頻率分布之間存在差異。不同人群中MICA 遺傳背景不同[15]，引起此種差異的原因可能是兩地人群MICA 等位分布頻率本身存在差異，但湖南和湖北人群MICA 基因分布頻率目前仍然未有研究，我們將會進行進一步的研究分析； 同時也不能排除肺癌對多種MICA 等位基因均易感。

本研究在衡陽組和荊州組檢出的MICA 等位基因型、MICA -STR 等位基因分布頻率和MICA -STR 等位基因型均不相同。但兩地肺癌人群MICA等位基因型、MICA -STR 等位基因分布頻率和MICA -STR 等位基因型分布總體比較并無統計學差異（P＞0.05），結果進一步表明兩湖地區肺癌人群MICA 基因分布之間存在差異。 分布總體比較并無統計學差異原因主要是MICA 等位基因型中包含有雜合子和純合子， 受到了另外一條等位基因影響；MICA-STR 包含了不同的基因型如MICA-A4包含了MICA*012、MICA*045 等，不同MICA 等位基因型影響所致。 本研究提示在臨床診療中，特別是健康人群體檢中， 可以開展MICA 基因型鑒定，對肺癌等腫瘤易感基因人群， 需通過生活方式干預、 增加體檢頻次等方法預防腫瘤發生及開展早期診斷。