草莓脫毒種苗生產(chǎn)及塑料大棚無(wú)土栽培高效繁育技術(shù)

趙韻 邢博文 方連明 卜順?lè)?湯桂鈞 胡海峰

（1 上海市閔行區(qū)三農(nóng)綜合服務(wù)中心，上海 201109；2上海市閔行區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，上海 201199） *為通信作者

草莓是薔薇科草莓屬多年生草本漿果植物，是我國(guó)目前發(fā)展較快的水果之一。草莓因其結(jié)果快、成熟早、果色艷麗、營(yíng)養(yǎng)豐富、香味濃郁、風(fēng)味甜酸適中，而深受消費(fèi)者喜愛(ài)。近年來(lái)，上海市郊的草莓生產(chǎn)有了長(zhǎng)足的發(fā)展，種植總面積已達(dá)2 500 hm2，且大多采用塑料大棚保護(hù)地栽培，平均每667 m2產(chǎn)量在1 500～2 000 kg。

在草莓種苗繁殖生產(chǎn)中，長(zhǎng)期將土壤種植母株上的匍匐莖子苗作為種苗，但在生產(chǎn)過(guò)程中（尤其是在連作栽培以及農(nóng)戶(hù)自繁自育的情況下），草莓種苗極易感染多種土傳病毒，如S M V（草莓斑駁病毒）、SCV（草莓皺縮病毒）、SMYEV（草莓輕型黃邊病毒）和SVBV（草莓鑲脈病毒），造成病毒病發(fā)生嚴(yán)重，影響草莓的產(chǎn)量和品質(zhì)。研究表明，我國(guó)草莓病毒的感染率高達(dá)80.2%[1]，而種苗攜帶病毒是國(guó)內(nèi)草莓生產(chǎn)上普遍存在的問(wèn)題，并成為了制約草莓生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展的瓶頸因素。

根據(jù)國(guó)內(nèi)外先進(jìn)經(jīng)驗(yàn)，解決種苗帶病毒的根本方法是采用組織培養(yǎng)技術(shù)繁育無(wú)病毒原種苗，再應(yīng)用設(shè)施栽培無(wú)土育苗技術(shù)繁育原種一代苗作為生產(chǎn)用種苗。目前，發(fā)達(dá)國(guó)家的草莓組培脫毒苗種植面積已占草莓種植總面積的80%左右，達(dá)到了提高草莓品質(zhì)和產(chǎn)量的雙重效果。鑒于此，筆者進(jìn)行了草莓主要品種的種苗組織培養(yǎng)脫病毒研究，并以生產(chǎn)出的脫毒原種苗為母本苗，在連棟塑料大棚內(nèi)進(jìn)行原種一代苗的無(wú)土栽培繁育生產(chǎn)，最終取得了顯著的成效。現(xiàn)筆者擬將研究出的相關(guān)技術(shù)要點(diǎn)總結(jié)介紹如下，以供相關(guān)從業(yè)人員參考借鑒，從而推進(jìn)草莓生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展。

1 草莓脫毒原種苗的生產(chǎn)

1.1 外植體選擇與清洗

于5 月—6 月、草莓匍匐莖發(fā)生及快速生長(zhǎng)時(shí)，選取草莓母株上生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害、頂端小葉尚未展開(kāi)的匍匐莖，剪取頂端約3～4 cm 長(zhǎng)的頂芽作為外植體，將其用洗潔精清洗3遍，再用紗布包裹后置于自來(lái)水龍頭下連續(xù)沖洗2 h。

1.2 外植體消毒與莖尖剝?nèi)?/h3>

在實(shí)驗(yàn)室的超凈工作臺(tái)上，對(duì)外植體進(jìn)行消毒滅菌，先后用75%酒精消毒1 min、潔爾敏50 倍液消毒15 min、10%次氯酸鈉消毒15 min、無(wú)菌水沖洗3 遍，然后在超凈工作臺(tái)上，借助80 倍解剖鏡用手術(shù)刀與解剖針剝?nèi)〈笮≡?.3 mm 以下的莖尖，接種于發(fā)生培養(yǎng)基上。

1.3 莖尖培養(yǎng)與繼代增殖

莖尖培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為MS+BA 0.5 mg/L+IBA 0.05 mg/L，培養(yǎng)室溫度為23 ℃，光照時(shí)間為12 h/d，光照強(qiáng)度為3 000 lx 左右，以誘導(dǎo)發(fā)生無(wú)菌系。經(jīng)1～2個(gè)月培養(yǎng)，無(wú)菌新芽長(zhǎng)出叢生芽育成無(wú)菌系。

繼代增殖的培養(yǎng)基配方為MS+BA 0.1 ～0.5 mg/L +IBA 0.01 ～0.05 mg/L，培養(yǎng)室溫度為23 ℃，光照時(shí)間為12 h/d，光照強(qiáng)度為3 000 lx。繼代增殖率為1∶3～5，且無(wú)“玻璃苗”產(chǎn)生。

1.4 無(wú)菌系的病毒檢測(cè)

無(wú)菌系瓶苗增殖至一定基數(shù)后（每個(gè)品種100瓶以上），委托上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院草莓和生物技術(shù)課題組對(duì)無(wú)菌系組培苗中常見(jiàn)的S M V、S C V、S M Y E V和SVBV 4種病毒進(jìn)行檢測(cè)。在送檢的30個(gè)樣品中，有3個(gè)品種（‘紅顏’‘章姬’‘豐香’）的3個(gè)樣品完全脫毒，剩下的27 個(gè)樣品只感染SMV，單一的病毒感染對(duì)草莓的產(chǎn)量和品質(zhì)基本沒(méi)有影響。剔除仍攜帶病毒的瓶苗后，再對(duì)無(wú)毒瓶苗進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)。

1.5 脫毒無(wú)菌系的再增殖

將脫毒成功的無(wú)菌系瓶苗進(jìn)行繼代增殖，培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)過(guò)程同1.3 繼代增殖培養(yǎng)。

1.6 脫毒無(wú)菌系的生根培養(yǎng)

將莖尖脫毒無(wú)菌系的叢生芽切成單芽，接種于1/2 MS+IBA 0.1 mg/L 的培養(yǎng)基上（培養(yǎng)基中添加2%蔗糖、鐵鈉鹽38.23 mg/L、瓊脂粉5.0～5.5 g/L，調(diào)節(jié)pH 至5.8）進(jìn)行生根培養(yǎng)，直至將其培育成完整的試管苗。培養(yǎng)條件同1.3 繼代增殖培養(yǎng)。

1.7 試管苗煉苗馴化

將試管苗假植于泥炭∶珍珠巖=2∶1（質(zhì)量比）的基質(zhì)中，基質(zhì)厚度在8 cm以上。試管苗栽后澆足活棵水，并覆蓋塑料小環(huán)棚，且每天葉面噴灑清水3～5 次，防止植株失水萎蔫；15 d 后，葉面噴施或結(jié)合澆水施用營(yíng)養(yǎng)液（0.2%磷酸二氫鉀+0.2% 硝酸銨+0.2%氯化鎂），每月施用2 次。煉苗時(shí)間為3個(gè)月，待苗高在3 cm 以上、具4～5 張葉片、根系發(fā)達(dá)、無(wú)病蟲(chóng)害發(fā)生時(shí)，即可出圃進(jìn)行原種一代苗的繁育生產(chǎn)。

2 原種一代苗的塑料大棚無(wú)土栽培高效繁育技術(shù)

脫毒試管苗營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)旺盛，會(huì)抑制花芽分化和生殖生長(zhǎng)，且草莓大田生產(chǎn)的用苗量大、成本高，故脫毒試管苗在煉苗馴化后不能立即用于大田生產(chǎn)，需將其作為母本苗再繁育生產(chǎn)出原種一代苗，進(jìn)而用于大田生產(chǎn)。同時(shí)，為防止土壤傳播病毒，原種一代苗的生產(chǎn)宜采用無(wú)土（基質(zhì)）高架立體繁苗方式。

2.1 塑料大棚內(nèi)育苗設(shè)施建造

以連棟塑料大棚（2～5 連棟）為育苗設(shè)施，大棚四周需用尼龍網(wǎng)隔離防護(hù)，以防蚜蟲(chóng)等害蟲(chóng)進(jìn)入大棚傳播病毒，隔離昆蟲(chóng)性病毒源。大棚內(nèi)采用高架鍍鋅鐵絲網(wǎng)苗床，四周用鈣塑板作圍欄（高30 cm），高架鍍鋅鐵絲網(wǎng)苗床的骨架為三角鋼，苗床高度在80 cm 左右、寬為150 cm、長(zhǎng)為13 m，兩個(gè)苗床之間設(shè)60 cm 寬的走道，以便于生產(chǎn)操作以及匍匐莖子苗的生長(zhǎng)。大棚地面及其周邊、中間走道鋪設(shè)水泥混凝土，大棚中間及四周修筑水泥排水溝。在苗床上方1.2 m 左右高度處架設(shè)自動(dòng)噴霧塑料管帶，每隔1.2 m 安裝1 個(gè)噴頭，由自動(dòng)機(jī)械系統(tǒng)控制水分噴霧，以滿(mǎn)足匍匐莖子苗生長(zhǎng)的水分需求。

2.2 栽培基質(zhì)選擇及消毒、鋪設(shè)

栽培基質(zhì)是草莓原種一代苗繁育生產(chǎn)的主要場(chǎng)所，它不僅是決定草莓根系生長(zhǎng)的關(guān)鍵環(huán)境因素，還是設(shè)施栽培的核心和基礎(chǔ)，會(huì)直接影響原種一代苗的正常生長(zhǎng)和產(chǎn)量。無(wú)土栽培基質(zhì)以“泥炭+珍珠巖+發(fā)酵有機(jī)肥”較好，質(zhì)量比為3∶1∶1。同時(shí)，由于基質(zhì)中可能含有病原微生物（如細(xì)菌、真菌、病毒、蟲(chóng)卵等），為確保母本苗及原種一代苗的正常生長(zhǎng)及無(wú)病蟲(chóng)害發(fā)生，需預(yù)先對(duì)栽培基質(zhì)進(jìn)行消毒。目前應(yīng)用較多的消毒方法是物理消毒，以熱水、太陽(yáng)能、蒸汽等方式為主，相對(duì)安全[2]。例如，可采用先進(jìn)的蒸汽消毒機(jī)進(jìn)行消毒（蒸汽消毒機(jī)主要由蒸汽消毒控制系統(tǒng)、基質(zhì)攪拌系統(tǒng)、蒸汽輸送系統(tǒng)等機(jī)械結(jié)構(gòu)組成，機(jī)器裝配4個(gè)充氣輪胎，能實(shí)現(xiàn)蒸汽消毒機(jī)的順暢移動(dòng)[3]。應(yīng)用蒸汽消毒機(jī)時(shí)，應(yīng)將內(nèi)部蒸汽溫度控制在120 ℃以上，然后將蒸汽導(dǎo)入消毒箱內(nèi)的栽培基質(zhì)中，對(duì)其進(jìn)行高溫消毒[4]；同時(shí)，蒸汽消毒機(jī)的攪拌葉會(huì)通過(guò)機(jī)器軸體的不斷轉(zhuǎn)動(dòng)，對(duì)栽培基質(zhì)進(jìn)行充分?jǐn)嚢瑁瑥亩沟没|(zhì)在蒸汽消毒機(jī)內(nèi)受熱更均勻，消毒更徹底）。最后，將消毒過(guò)的栽培基質(zhì)平鋪在苗床上，厚度在30 cm 左右。

2.3 母本苗栽植

將母本苗移栽至高架苗床上，進(jìn)行原種一代苗的繁育生產(chǎn)。母本苗的栽植深度是影響其成活的關(guān)鍵，若栽植過(guò)淺，則新莖外露，易引起秧苗干枯，不易成活；若栽植過(guò)深，則埋住心葉，不易發(fā)苗，且易引起秧苗腐爛。理想的栽植深度為心葉與基質(zhì)相齊，上不埋心，下不露根。在移栽時(shí)，還應(yīng)注意根系舒展，以利于根部生長(zhǎng)。栽植株行距為30 cm×40 cm，寬150 cm、長(zhǎng)13 m 的苗床可栽植160～165 株草莓苗。

2.4 栽植后肥水管理

在原種一代苗繁育生產(chǎn)期間，于8月之前每天澆水1 次，8 月之后適當(dāng)減少澆水次數(shù)。

肥料一般用液肥，且要求氮磷鉀肥合理搭配。同時(shí)，6月—8月是草莓匍匐莖子苗的快速生長(zhǎng)時(shí)期，對(duì)養(yǎng)分的需求較多，需每隔7 d施用含氮磷鉀三要素的液肥400～600倍液1次。此外，由于氮肥施用過(guò)多不利于花芽分化，故在草莓花芽分化前，應(yīng)停止施用氮肥，以促進(jìn)植株健壯生長(zhǎng)及原種一代苗的花芽分化。

2.5 病蟲(chóng)害防治

病害主要是炭疽病、黃萎病、白粉病等，炭疽病和黃萎病可交替使用百菌清600～800 倍液、炭特靈600 倍液、百克1 500 倍液、適樂(lè)時(shí)1 500 倍液進(jìn)行防治，防止單一使用某一種藥劑；白粉病可使用福星4 000 倍液、腈菌唑1 200 倍液、硫磺懸浮劑800～1 000倍液進(jìn)行防治。蟲(chóng)害主要是螨類(lèi)、蚜蟲(chóng)、薊馬等，可使用蟲(chóng)螨光、殺蟲(chóng)雙1 000 倍液等進(jìn)行防治。

2.6 匍匐莖子苗的培育

母本苗在生長(zhǎng)至一定階段（約30 d 左右）時(shí)，從母株上抽出匍匐莖，匍匐莖上長(zhǎng)出子苗，當(dāng)子苗葉片長(zhǎng)至具有3 葉時(shí)，即可剪取子苗栽入口徑為5 cm 的營(yíng)養(yǎng)缽中，成為大田草莓生產(chǎn)用的原種一代苗。營(yíng)養(yǎng)缽中的培養(yǎng)土為泥炭∶珍珠巖∶發(fā)酵有機(jī)肥=3∶1∶1（質(zhì)量比）。子苗在移栽到營(yíng)養(yǎng)缽時(shí)，須露出心葉。移栽后應(yīng)及時(shí)澆足活棵水，若7月—8月遇高溫天氣，需在大棚上方覆蓋75%遮光率的黑色遮陽(yáng)網(wǎng)，以減少?gòu)?qiáng)光直射，降低棚內(nèi)溫度，減少水分蒸發(fā)，防止子苗失水及葉片灼傷。一般1株母本苗1年可繁育原種一代苗20株以上，1個(gè)5連棟的大棚（1 700 m2）1 年可生產(chǎn)原種一代苗12 萬(wàn)～13 萬(wàn)株，且生產(chǎn)出的原種一代苗質(zhì)量?jī)?yōu)異，達(dá)到了高效、快速繁育草莓脫毒苗的目的。