豬口腔液在豬病毒感染監測中運用方法

口腔液是檢測動物是否感染病毒的重要工具，可以有效代替動物血清做病毒的抗原檢測。為監測豬病毒的感染情況，豬口腔液可以直觀地反映出檢測數據。本文簡要概述豬口腔液在豬傳染病檢測中的應用情況，研究豬口腔液的采集和運用方法。

1、豬口腔液的作用

口腔液主要產生于豬的口腔內壁，通過唾液腺分泌而成，是一種無色無味的中性物質，除蛋白酶外，水的含量高達九成以上。在進行豬病毒感染監測的過程中，無需配備專業的工作人員，養殖戶自己就可以完成唾液收集工作，并在較短的時間內就可以獲取相應的檢測數據。因為口腔液的獲取十分方便，資金投入相對較少，所以在進行區域性豬病毒防治時，可以大量獲得豬口腔液。除此之外，因為口腔液的采集不容易導致豬出現驚嚇反應，突然發狂，還可以持續采集。特別是針對性格暴烈、不可控的種豬，也能對口腔液有效收集。近年來，隨著我國生物學和醫學水平不斷提升，在很多牲畜病原檢測中，口腔液得到了廣泛使用。在臨床研究過程中發現，豬病毒發病的初期階段，口腔液就可以檢測出豬病毒。例如，在口蹄疫發病的潛伏期，就可以通過口腔液進行病毒檢測?？谇灰褐懈缓S富的動物蛋白酶，工作人員通過比對健康族群和病原族群口腔液中的蛋白酶含量，根據數據的差值，可以有效判斷病原族群的狀態。

由于豬口腔液的收集方式相對簡便，養殖戶可以利用棉線繩索等具有極強吸附性質的工具開展豬口腔液的收集。豬生來對周遭事物具有極強的好奇心，喜歡咀嚼視線范圍內存在的一切物質，在豬口腔液的收集過程中會積極靠近并用嘴咀嚼繩子，養殖戶可以通過擰攥豬啃食過的繩子，從中提取豬口腔液試驗樣液。與傳統活體牲畜組織液、血液等試驗液體的采集不同，農戶在收集口腔液時不是非要活體生物不可，不會對動物本體產生影響，更不會出現應激反應，可以從根本上保證動物的健康生長，對口腔液采集的工作人員掌握專業技術的需求也相對不高，并且同一種口腔液可以多次使用、試驗目標可以涵蓋整個種群，能從根本上降低人力和財力的投入，更能在動物相關疾病的發病初期發現并治療，從源頭上阻斷疫病的傳播和發展?，F階段，在我國大多數豬口腔液的研究分析與研究工作的主要目標，是檢驗完成并成功殺死病毒的試驗物種，將試驗結果應用至現實生活中，豬飼養場地的病原檢測情況并不常見。相關領域的專家學者在掌握豬養殖場的傳染病檢測過程和養殖場可能出現的疫病病毒種類和分布情況后，展開進一步的分析工作?，F階段，在我國六成以上的生豬養殖場內，以豬欄為基本單位，開展豬口腔液的采集作業，利用較為常見的PCR檢測技術和化學藥劑PCR檢測技術，同時檢驗出在該區域的幾種較為常見的豬病病毒，其中包括：口蹄疫、豬瘟、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病等，采用口腔液檢測的方式，從源頭進行養豬場的豬病檢測工作相對有效。

2、豬口腔液的采集方法

在采集豬口腔液前，需要先對豬進行斷水斷食處理，必須保證時長達到六個小時以上。養殖戶可以在食物投喂完畢后，使用麻繩將其捆綁至木架或護欄上。固定架的兩端必須與豬骨骼等高。還要盡量將水槽和食槽放置到相對較遠的位置，避免豬接觸，影響口腔液分泌。將豬靜置半小時左右，取下木架上被豬啃咬過的麻繩，并對其進行封存處理。在實驗室中，對麻繩進行壓縮，收集繩子上豬的口腔液，并移送至10毫升的離心試管中。為保證數據的準確，口腔液的收集量盡量保持在4毫升左右。工作人員結束口腔液收集工作后，應快速將樣品進行冷卻處理，并及時進行檢測。但是在檢測前，應盡量避免對樣品進行消毒滅菌處理，更不要為保持蛋白酶活性，在樣品中加入活性物質。在常規溫度下試驗樣品可以保存超過24小時，還可以進行低溫冷凍處理，不會對病毒感染檢測數據產生影響。

針對3000頭以上或圍欄在60個以上的大型豬舍，捆扎15根麻繩就可以滿足口腔液的收集，但是必須保證麻繩處于不同區域，避免實驗數據集中化。在20頭以下的小型豬舍內，使用一到兩根麻繩就可以獲得一定含量的口腔液。因為口腔液的收集不會導致豬產生不良反應，收集周期應盡量控制在一個星期一次，還可以根據豬病毒的發病情況進行合理的增加。在采集口腔液樣本時，麻繩的直徑應控制在1.5厘米左右，還要保證繩子的質量一致。為避免數據出現誤差，盡量不要使用尼龍材料。因為豬是一種群居動物，喜歡啃咬，對周圍環境十分好奇。在樣品收集時應將麻繩放置在種群中間，確保大量的豬都可以對繩子進行啃咬，但是盡量不要讓繩子接觸到水，避免數據出現誤差，稀釋口腔液濃度。除此之外，在口腔液收集的過程中，一旦繩子發生斷裂，應及時更換，重新收集，不可以使用被污染的樣本。在送檢過程中，也不可以讓繩子長期裸露在空氣中，避免樣本流失。和人類一樣，豬同樣具有見異思遷的特性，被其啃咬過的麻繩不得二次使用。而且豬一般在上午比較活潑，口腔液的收集工作可以在該時段完成。

專家在對豬口腔液開展病毒的抗原檢測時，需要重點遵守magen磁珠病毒檢測法，利用核酸試劑盒對采集到的全部豬口腔液樣本進行檢測，在檢測的過程中，按照說明書中寫出的關于各類豬病毒的病原檢測方法，在樣本組加入適量的試劑，并對試驗樣本展開擴容作業。開展同步的化學試劑RT-PCR增量試驗的豬病病毒有：口蹄疫病毒、豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒機器變異毒株；利用實時化學藥劑進行PCR擴容的病毒為豬偽狂犬病病毒。當實驗結果呈現S型增長圖像，檢測的ct數值小于等于7時，可以判定檢測結果為陽性；利用PCR擴容技術檢測豬圓環病毒1型和2型時，在檢測的同時加入10%的瓊脂糖凝膠，進行電流檢驗，并在試驗結束后觀察系統呈現的數據和曲線，擴容物的成像和性質曲線無法完全重合時，檢測結果為陰性。

專家為全面掌握不同種類的養殖場所的豬病病毒傳播現狀，可以將檢測地點分成以下幾種：種豬的代加工廠、種豬的養殖場、飼養小區和家豬養殖戶。在收集完相關場所中的豬口腔液樣品，并對其進行檢測后，可以看出，相比于泗陽小區和家豬養殖戶，種豬的代加工廠和種豬的養殖場中檢測出的豬病病毒相對較多。HP-PRRSV、CSFV等豬病病毒只出現在種豬的代加工廠，在種豬的代加工廠和種豬的養殖場中檢測出FMDV豬病病毒，PCV1和PCV2豬病病毒只在家住養殖戶的檢測中出現。種類不同的養殖地點，PCV2豬病病毒的陽性核酸檢測結果平均相對較高，其中家住養殖戶的陽性概率最高，檢測結果超過三成。為從根本上掌握在不同地點和養豬場所內，利用豬口腔液開展豬病病毒的檢測試驗是否可行，可以按照出欄比例和分布情況將豬口腔液分成6份，檢測的結果顯示，六個檢測樣品中均出現PCV1和PCV2豬病病毒，其中在前兩份檢測樣液中PCV1豬病病毒核酸檢測結果為陽性的概率最高，檢測概率均超過了二成。在第一和第六份豬口腔液中，檢測出了PCV2豬病病毒，核酸檢測結果為陽性，實驗結果均超過了三成。在第一、第四、第五和第六份豬口腔樣液的檢測中，檢測出了FMDV豬病病毒。只在第一和第三份樣液中檢測出了HP-PRRSV豬病病毒，只在第三份豬口腔樣液的檢測中檢測到了CSFV豬病病毒。核酸檢測結果顯示PCV1豬病病毒的檢測概率超過30%，PCV2核酸檢測為陽性的概率超過50%，兩種不同豬病病毒混合感染的概率約為25%，實驗結果表明在生豬的養殖區域內豬圓環2型病毒是最為常見的豬病病毒。

3、口腔液在豬病毒感染檢測中的應用

為有效檢驗豬群感染病毒的風險，病原體檢測是時效性極強的檢測方法，可以避免病毒傳播風險，降低病死率。為實時監測豬病毒的感染情況，血清中的病原體檢測受到了一致好評，針對豬瘟、藍耳病、口蹄疫等傳染速度相對較強的豬病毒，豬舍需要定時定期對豬群進行檢測，避免造成嚴重后果。隨著我國醫學和生物學的高速發展，在豬病毒感染檢測的過程中，通常使用檢測試劑盒。豬的口腔液中不僅富含豐富的蛋白酶，還含有豬血液中的IgG、IgA等抗體物質，多年的臨床試驗表明，很多豬病毒都是從豬口腔排出體外，發生這種情況與豬的血液循環系統有關。因此，在對豬瘟、水泡等豬病毒的檢測中，可以優先使用口腔液。作為豬病毒的檢測樣本，口腔液可以從不同的豬口腔中采集。針對發病周期相對較長的豬病，口腔液病毒檢測完畢后，還可以應用到很多試驗中。

豬病毒主要分為豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬德爾塔冠狀病毒、豬呼吸道冠狀病毒、口蹄疫病毒、非洲豬瘟病毒等。豬病毒的病原體大多由大腸桿菌、鏈球菌、豬鼻支原體、豬肺炎支原體組成。在獸醫視域下，早在上個世紀的蘇聯地區，針對豬病毒的檢測研究人員就開始使用豬的口腔液。目前，國內外的專家學者通過實驗表明，相比于血液和其他實驗樣本，口腔液的檢測更能直觀的反應發病情況。針對非洲豬瘟等隱蔽性較強豬病毒，口腔液可以更早的檢測出來。但是豬瘟、口蹄疫等病毒的隱秘性相對較強，發病初期的癥狀不明顯，沒有規律可循，使用qPCR技術進行檢測時，實驗數據波動相對平緩。對比口腔液，血清的采樣需要專門人員進行，耗時耗力，豬還容易出現應激行為。在感染風險相對較高的傳染病檢測中，并不合適。

為掌握生豬種群感染豬病病毒的風險和概率，并從根本上清除豬病病毒，傳統的豬病抗原檢測是最直接有效的手段之一，可以有效降低豬病病毒的傳播，在整個牲畜的養殖行業具有重大作用。作為新時代能夠有效檢查生豬的健康情況和疾病的傳播情況，豬的口腔液檢測是極其重要的檢測方法。在豬病病毒傳播初期，就能有效檢測出相關的病毒，具有特殊的意義。作為動物組織液的一種，豬口腔液的應用非常廣泛，可以用在不同類型的豬病病毒和抗原檢測中。實驗結果顯示，很多豬病病毒是利用豬的口腔排出體外的，這與豬的口腔組織結果和食物的消化系統構成密不可分，所以相比于豬的血液檢測，豬口腔液的檢測更能直觀的顯示出豬病病毒的感染情況，例如非洲豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合癥、水泡形口腔炎癥等豬病病毒。專家學者采集口腔液的目標種群大多為生長情況良好的活體豬，如果在豬口腔液樣品中核酸結果顯示為陽性，這時豬病病毒的傳播和感染可能處于排出時期或隱性潛伏期，在豬病病毒的檢測過程中，豬口腔液可以應用于病毒感染初級階段，這一時期的檢測數據更加直觀有效。作為種群患病的檢驗樣本，一種口腔液可以涵蓋整個種群或者生豬養殖場中的所有活體生豬，如果核酸檢測結果呈現陽性，可以作為早期的豬病監測依據，但是相比于口腔液，血清的檢測對活體生豬具有一定程度的傷害，而且無法進行多次采集，并且需要采樣工作人員掌握更加專業的技術，但是豬的口腔液樣液不僅方便提取，還可以在不同種群不同生長階段開展豬病毒的感染調查。利用PCR檢測技術，對比血清樣本和口腔樣液的檢測結果可以發現，口腔樣液核酸檢測結果為陽性的可能性更高，檢測結果出來的時間更短、效率更高。

在收集豬口腔液時，養殖戶可以，以單一的豬欄為基礎，讓豬欄內的生豬啃咬提前放置的棉繩，并及時提取繩子上的豬口腔液樣品。在實驗室內，專家利用分子生物領域的檢測方式對生豬種群感染豬病病毒的情況進行檢測，實驗數據體現出，在生豬的養殖區域內，豬瘟、口蹄疫、豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環等病毒都可以得到有效的檢測，特別是在春天，相關的豬病病毒出現的概率更高。出現相關結果不僅和生豬在運輸的過程中感染相關豬病病毒息息相關，更與在溫度相對較低的環境中，豬病病毒的成活率更高的特性有關。在春末夏初的季節，豬圓環病毒和口蹄疫病毒出現的概率較大。相關時節的晝夜溫差相對較大、空氣中的水分也相對較多，是相關豬病病毒感染概率較高的主要原因。根據在多種生豬的檢測場所的實驗結果顯示，規模較大、生豬的數量較多的生豬養殖場和豬舍內，檢測出的豬病病毒比家豬養殖戶等場所概率高，大概率是受到養殖規模、生豬品種和活體生豬的密集程度等因素的影響，豬病病毒在養殖規模較大的豬舍的傳播與感染的概率也隨之提升。

以流行性腹瀉病毒為例，在臨床上通常歸結為肛腸性傳染病一類。在傳統的病原檢測中，大多使用豬的排泄物進行檢測，但是臨床表現相對較弱。通過試驗發現，相比于糞便樣本，口腔液的檢測效果更加明顯。檢測時，可以選取100頭生長周期相同的豬，并將其分為樣本和對照兩組，還要確保這些豬并沒有事先與患有流行性腹瀉的同類接觸，病原體檢測結構大多為陰性。在檢測過程中，將兩類豬分開飼養。樣本區的豬區分成5個飼養欄進行飼養，對照區分成3個。為樣本區的豬注射含有流行性腹瀉病毒的組織液，對照組的豬不注射。在接種后12小時左右，采集樣本區和對照區的食物殘渣、口腔液樣本和糞便。第一個星期采集一次，第二個星期開始逐漸遞增。接種至40天左右，對樣本區的病死豬進行尸檢，并制備血清樣本，記錄相關檢測數據。數據表明，樣本區的豬接種腹瀉病毒后一個星期內開始發病，出現腹瀉的情況，在第二個星期時，癥狀減緩甚至消失，但病毒檢測仍為陽性。通過對比分析糞便樣本和口腔液，可以明顯觀察到，在接種疫苗開始排毒時，5天左右抗體存量升至最大值，且病毒僅僅出現在口腔液中，糞便樣本則沒有出現明顯的數據變化。試驗表明，樣本組的口腔液樣本和糞便樣本中pedv檢測結果在排毒和接種期都產生一定聯系，口腔液樣本可以檢測出流行性腹瀉病毒的抗體，準確有效地檢測豬的健康狀況。現如今，我國的專家學者對靈長類動物口腔液研究日漸加深，但是對豬等牲畜類動物的口腔液研究重視程度還有待提升。

近年來，在我國豬的養殖數量逐年遞增，市場上的豬肉投放量也在穩步增長。因此，人們對豬病毒感染檢測的重視程度也在提升?？谇灰鹤鳛橹匾牟《緳z測物質，不僅采集簡便，實用性也相對較高，可以準確有效地檢測出豬病毒的感染情況。

（作者單位：636100廣西北海市合浦縣畜牧獸醫技術服務中心； 536119廣西北海市合浦縣常樂鎮農業和鄉村振興服務中心；536132廣西北海市合浦縣黨江鎮農業和鄉村振興服務中心）