乳腺癌組織內缺氧誘導因子-1α、胸苷磷酸化酶、血管內皮生長因子表達水平及其與淋巴結轉移的關系

【摘要】目的 探討乳腺癌組織內缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）、胸苷磷酸化酶（TP）及血管內皮生長因子（VEGF）表達水平及其與淋巴結轉移的關系，以期為臨床提供參考。方法 選取2017年9月至2022年9月于青島市城陽區人民醫院接受手術治療的80例乳腺癌患者為研究對象進行回顧性分析，檢測患者乳腺癌組織和癌旁乳腺組織中HIF-1α、TP及VEGF水平，探討其與臨床病理特征的關系。結果 乳腺癌患者癌組織中HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率高于癌旁組織（Plt;0.05）。導管浸潤組與非導管浸潤組患者HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05）。高分化組、中分化組患者HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率低于低分化組（Plt;0.05）；高分化組與中分化組患者HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05）。I期組和Ⅱ期組患者HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率低于Ⅲ期組（Plt;0.05）；I期組與Ⅱ期組患者HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05）。有轉移組患者HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率高于無轉移組（Plt;0.05）。結論 HIF-1α、TP及VEGF在癌組織中均呈陽性表達，且與淋巴結轉移密切相關。

【關鍵詞】乳腺癌；缺氧誘導因子-1α；胸苷磷酸化酶；血管內皮生長因子；淋巴結轉移

【中圖分類號】R737.9 【文獻標識碼】 A 【文章編號】2096-2665.2023.07.0008.05

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2023.07.003

Expression of hypoxia inducible factor-1α thymidine phosphorylase and vascular endothelial growth factor in breast tumors and their relationship with lymph node metastasis

Zhang Hui1， Ren Lijun2

（1. Pathology Department，Qingdao Chengyang People’s Hospital; 2. Thyroid and Breast Surgery， Qingdao Chengyang People’s Hospital， Qingdao，266109，Shandong，China）

【Abstract】Objective To investigate the relationship between the levels of hypoxia inducible factor-1α （HIF-1α）， thymidine phosphorylase （TP）， vascular endothelial growth factor （VEGF） and lymph node metastasis in breast tumor. To provide reference for clinical practice. Methods Eighty patients with breast cancer who received surgical treatment in Qingdao Chengyang People’s Hospital from September 2017 to September 2022 were selected as the research objects for retrospective analysis， and the levels of HIF-1α、TP and VEGF in" breast cancer tissue resected surgically and normal adjacent breast tissue were detected to explore the relationship between them and clinicopathological characteristics. Results The positive expression rates of HIF -1α， TP and VEGF in breast cancer tissues were higher than those in adjacent tissues （Plt;0.05）. There was no significant difference in the positive expression rates of HIF -1α， TP and VEGF between patients in catheter infiltration group and non-invasive group （Pgt;0.05）.The positive expression rates of HIF -1α， TP and VEGF in the well differentiated group and the middle differentiated group were lower than those in the poorly differentiated group （Plt;0.05）. There was no significant difference in the positive expression rates of HIF -1α， TP and VEGF between the well differentiated group and the middle differentiated group （Pgt;0.05）. The positive expression rates of HIF -1α， TP and VEGF in stage I and stage Ⅱ group patients were lower than those in stage Ⅲ group （Plt;0.05）. There was no significant difference in the positive expression rates of HIF -1α， TP and VEGF between the patients in stage I and stage Ⅱ group （Pgt;0.05）. The positive expression rates of HIF -1α， TP and VEGF in patients with metastasis were higher than those in patients without metastasis （Plt;0.05）. Conclusion HIF-1α、TP and VEGF were positive in cancer tissues， and were closely related to lymph node metastasis.

【Keywords】Breast cancer; Hypoxia inducible factor-1α; Thymidine phosphorylase; Vascular endothelial growth factor; Lymph node metastasis

乳腺癌是發生于乳腺的一種惡性腫瘤，嚴重影響患者的生活質量，但由于具體病因還尚未明確，所以對乳腺癌的防治難度較大。研究表明，腫瘤發生、發展過程與缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）、胸苷磷酸化酶（TP）及血管內皮生長因子（VEGF）水平有密切關系[1-2]。過快增生的組織會導致微環境缺氧，而HIF-1α在低氧環境刺激下會發揮抗凋亡蛋白作用；TP在人體內廣泛存在，在誘導血管生成和對抗凋亡細胞功能中具有重要作用；VEGF則是目前熟知的促進腫瘤組織血管生成的重要因子[3]。有研究表明，HIF-1α、TP及VEGF在腫瘤組織增殖及血管生成中具有重要作用[4]。基于此，本研究分析HIF-1α、TP及VEGF表達水平與乳腺癌組織生長、轉移的關系，以期為臨床提供參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年9月至2022年9月于青島市城陽區人民醫院進行手術治療的80例乳腺癌患者為研究對象進行回顧性分析，研究對象術前未接受過對癥治療，均經病理檢查確診。依據病理類型分為導管浸潤組（47例）和非導管浸潤組（33例）：導管浸潤組患者年齡25～70歲，平均年齡（47.54±6.52）歲；身體質量指數（BMI）22～26 kg/m2，平均BMI（24.14±1.37）kg/m2；婚姻狀況：已婚26例，未婚21例；文化程度：小學4例，初中10例，高中17例，大專及以上16例。非導管浸潤組患者年齡25～69歲，平均年齡（48.16±6.55）歲；BMI 22～26 kg/m2，平均BMI（24.37±1.32）kg/m2；婚姻狀況：已婚15例，未婚18例；文化程度：小學2例，初中6例，高中15例，大專及以上10例。依據分化程度分為高分化組（15例）、中分化組（37例）和低分化組（28例）：高分化組患者年齡25～68歲，平均年齡（47.62±6.43）歲；BMI 23～27 kg/m2，平均BMI（24.46±1.28）kg/m2；婚姻狀況：已婚7例，未婚8例；文化程度：小學1例，初中3例，高中6例，大專及以上5例。中分化組年齡患者25～70歲，平均年齡（48.22±6.44）歲；BMI 22～26.5 kg/m2，平均BMI（23.94±1.45）kg/m2；婚姻狀況：已婚19例，未婚18例；文化程度：小學2例，初中7例，高中15例，大專及以上13例。低分化組患者年齡25～68歲，平均年齡（48.43±6.37）歲；BMI 23.5～27 kg/m2，平均BMI為（24.37±1.38）kg/m2；婚姻狀況：已婚15例，未婚13例；文化程度：小學3例，初中6例，高中11例，大專及以上8例。依據臨床TNM分期[5]分為I期組（20例）、Ⅱ期組（37例）和Ⅲ期組（23例）：I期組患者年齡25～69歲，平均年齡（48.25±6.34）歲；BMI 23～27.5 kg/m2，平均BMI為（24.57±1.28）kg/m2；婚姻狀況：已婚10例，未婚10例；文化程度：小學2例，初中4例，高中8例，大專及以上6例。Ⅱ期組患者年齡26～70歲，平均年齡（48.25±6.34）歲；BMI 23～26.5 kg/m2，平均BMI為（24.54±1.36）kg/m2；婚姻狀況：已婚18例，未婚19例；文化程度：小學3例，初中7例，高中15例，大專及以上12例。Ⅲ期組患者年齡25～70歲，平均年齡（48.28±6.42）歲；BMI 22～27 kg/m2，平均BMI為（24.38±1.43）kg/m2；婚姻狀況：已婚13例，未婚10例；文化程度：小學1例，初中5例，高中9例，大專及以上8例。依據淋巴結轉移情況分為無轉移組（28例）和有轉移組（52例）：無轉移組患者年齡25～68歲，平均年齡（47.73±6.57）歲；BMI 22～26 kg/m2，平均BMI為（24.35±1.32）kg/m2；婚姻狀況：已婚14例，未婚14例；文化程度：小學2例，初中6例，高中11例，大專及以上9例。有轉移組患者年齡25～70歲，平均年齡（48.47±6.65）歲；BMI 23～26.5 kg/m2，平均BMI為（24.41±1.35）kg/m2；婚姻狀況：已婚27例，未婚25例；文化程度：小學4例，初中10例，高中21例，大專及以上17例。相同依據分組的患者組間一般資料比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05），組間具有可比性。本研究經青島市城陽區人民醫院醫學倫理委員會批準。納入標準：①符合《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范（2015版）》[6]中乳腺癌的診斷標準；②均經術后病理檢查確診；③年齡25～70歲。排除標準：①合并其他惡性腫瘤者；②伴有精神疾病者；③研究開始前接受過對癥治療者；④伴有重要器官障礙者；⑤合并免疫系統疾病；⑥合并嚴重感染者；⑦妊娠期或哺乳期婦女。

1.2 研究方法 ①標本處理：以80例患者癌組織和癌旁組織為實驗標本，采用10%新配比甲醛溶液固定標本，脫水，并用石蠟包埋切片，脫蠟封閉。②試劑來源：HIF-1α、TP、VEGF抗體均由美國Santa Cruz公司生產，一抗、二抗試劑分別由南京百世金、金斯瑞公司生產，雙組分金屬增強（DAB）顯色液由南京奧青生物科技有限公司生產。③免疫組化實驗：對上述處理過的標本進行熱修復，加一抗試劑0.2 mL，1∶100稀釋，37 ℃孵育1 h后滴加二抗試劑0.2 mL，1∶200稀釋，37 ℃孵育30 min后按說明書將DAB顯色液按比例混合，孵育、顯色，后用蘇木素進行復染、封片。每個組織切片均用HIF-1α、TP、VEGF抗體染色一張。對照用聚丁二酸丁二醇酯（PBS）染色。④陽性判定方法[7]：高倍顯微鏡（深圳市西尼科光學儀器有限公司，型號：XK-3230A）下，將HIF-1α、TP、VEGF細胞質或細胞膜為棕黃、深棕黃色顆粒作為判定陽性標準。隨機選取8～10個視野進行細胞占比評估及染色打分判定：染色強度（SI）：未染色為0分；淺色為1分，深棕為2分；棕褐色為3分；陽性細胞占比（PP）：無陽性記為0分；陽性細胞1%～10%記為1分；陽性細胞11%～50%記為2分；陽性細胞51%～80%記為3分；陽性細胞gt;80%記為4分。免疫反應積分（IRS）=PP×SI，IRSgt;3分為陽性。

1.3 觀察指標 ①比較HIF-1α、TP及VEGF在癌旁組織和癌組織中的表達情況。②分析HIF-1α、TP及VEGF的表達與病理特征的關系。③分析HIF-1α、TP及VEGF的表達與乳腺癌分化程度的關系。④分析HIF-1α、TP及VEGF的表達與乳腺癌TNM分期的關系。⑤分析HIF-1α、TP及VEGF的表達與乳腺癌淋巴結轉移的關系。

1.4 統計學分析 采用SPSS 22.0統計學軟件處理數據。計數資料以[例（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗。以Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HIF-1α、TP及VEGF在癌組織和癌旁組織中的表達情況比較 乳腺癌患者腫瘤組織中HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率高于癌旁組織，差異有統計學意義（Plt;0.05），見表1。

2.2 不同病理類型患者HIF-1α、TP及VEGF的表達情況比較 導管浸潤組與非導管浸潤組患者HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05），見表2。

2.3 不同分化程度乳腺癌患者HIF-1α、TP及VEGF的表達情況比較 高分化組和中分化組患者HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率低于低分化組，差異有統計學意義（Plt;0.05）；高分化組和中分化組患者HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05），見表3。

2.4 不同TNM分期乳腺癌患者HIF-1α、TP及VEGF的表達情況比較 Ⅰ期和Ⅱ期組患者HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率低于Ⅲ期組，差異有統計學意義（Plt;0.05）；Ⅰ期和Ⅱ期組患者HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05），見表4。

2.5 不同淋巴結轉移情況乳腺癌患者HIF-1α、TP及VEGF的表達情況比較 有轉移組患者HIF-1α、TP及VEGF陽性表達率高于無轉移組，差異有統計學意義（Plt;0.05），見表5。

3 討論

乳腺腫瘤組織的浸潤、轉移依賴血管的形成，已有研究表明，在乳腺癌組織中有十幾種促血管形成的因子在腫瘤血管新生及轉化中扮演著重要角色[8]。腫瘤組織中微環境缺氧及細胞對缺氧的適應是其生長的重要因素，在腫瘤生長中一些基因及分子具有重要作用，在促進腫瘤侵襲、轉移中也是關鍵因素[9]。

本研究結果顯示，乳腺癌患者癌組織HIF-1α、TP及VEGF的表達水平高于癌旁組織，在低分化、TNM Ⅲ期、有淋巴結轉移等患者中均存在高表達，提示HIF-1α、TP及VEGF與乳腺腫瘤組織發生、發展、轉移等過程關系密切，在預測腫瘤組織發生及轉移上有一定價值。HIF-1α直接決定了HIF-1的功能和活性，HIF-1α作為缺氧時有調節作用的因子，在腫瘤生長、轉移及新血管生成中具有重要作用，不僅能提高腫瘤細胞在缺氧微環境中的存活率，還能夠促進腫瘤細胞轉移[10-11]。研究表明，HIF-1α在多數腫瘤組織中存在過度表達，在癌旁組織中低表達或不表達，且在發生轉移患者表達水平高于未轉移者，說明HIF-1α可作為乳腺腫瘤轉移的生物標記物，是反映腫瘤發生、發展的重要指標[12-13]。TP則廣泛存在于人體內，可誘導血管生成和對抗細胞凋亡，且在不同類型組織中TP的表達量差異有統計學意義[14]。有研究顯示，在腫瘤組織TP活性高于正常組織可能是因為癌細胞代謝活躍、核酸合成旺盛[15]。有研究表明，腫瘤組織中TP表達量是癌旁組織的3～10倍，且與腫瘤類型密切相關[11]。VEGF可刺激血管生成，調控血管內皮細胞生長及增殖，VEGF過量表達會導致腫瘤發生、發展及轉移等。研究表明，VEGF通過旁分泌與受體結合來影響內皮細胞增殖和遷移，VEGF誘導血管的生成與腫瘤浸潤、轉移等關系密切[16-17]，其增加了腫瘤細胞侵襲淋巴的機會，促進了腫瘤組織的轉移[18]。

綜上所述，乳腺癌發生、發展及轉移過程中有多因子參與表達，HIF-1α、TP、VEGF水平的表達在癌組織和癌旁組織中存在顯著差異，HIF-1α、TP、VEGF水平的表達與淋巴結轉移存在顯著相關性。

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