支氣管鏡肺泡灌洗液GeneXpert MTB/RIF技術、結核分枝桿菌基因擴增、涂片找抗酸桿菌對肺結核的診斷價值

【摘要】目的 分析支氣管鏡肺泡灌洗液GeneXpert MTB/RIF技術（簡稱GeneXpert）、結核分枝桿菌基因（TB-DNA）擴增檢測、涂片找抗酸桿菌對肺結核的診斷價值，為臨床上明確疾病診斷提供依據。方法 選取2021年6月至2022年6月梅州市人民醫院收治的214例疑似肺結核患者作為研究對象，所有患者行支氣管肺泡灌洗，并行GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌檢測，并以結核分枝桿菌液體培養結果為金標準，比較三種方法對肺結核的檢出情況；計算三種方法診斷肺結核的靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值等診斷效能指標。結果 結核分枝桿菌液體培養結果顯示陽性有147例，陰性有67例；GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌檢測對肺結核的檢出率分別為93.46%、73.83%、45.79%；GeneXpert診斷肺結核的靈敏度最高，涂片找抗酸桿菌診斷靈敏度最低；GeneXpert的診斷特異度最低，涂片找抗酸桿菌的診斷特異度最高（均Plt;0.05），三種檢測方法的陽性預測值、陰性預測值比較，差異均無統計學意義（均Pgt;0.05）。結論 三種檢測方法均能有效診斷肺結核，且各有優勢，臨床需要結合患者的實際情況，酌情考慮多種檢測方法的使用，以提高肺結核特別是耐藥結核的早期診斷的準確率。

【關鍵詞】肺結核 ; 結核分枝桿菌 ; 傳染病 ; 干酪樣壞死 ; 支氣管鏡 ; 肺泡灌洗液

【中圖分類號】R521 【文獻標識碼】A 【文章編號】2096-3718.2023.24.0111.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-3718.2023.24.035

肺結核是由結核分枝桿菌引起的一種傳染病，患者常伴有咳嗽、咳痰、胸痛、乏力、發熱等癥狀。肺結核具有較強的傳染性，且病程時間較長，因此現階段對于肺結核的預防控制和檢出工作仍十分重要[1]。GeneXpert MTB/RIF技術（以下簡稱GeneXpert）是一種新型的結核分枝桿菌檢測技術，可對結核分枝桿菌的rpoB基因突變性進行檢測，且操作簡單，用時少，現在臨床得到廣泛應用[2]；結核分枝桿菌基因（TB-DNA）擴增檢測是一種基于實時熒光聚合酶鏈式反應（PCR）技術的結核分枝桿菌脫氧核糖核酸（DNA）檢測方法，與GeneXpert類似可快速準確地診斷肺結核[3]；而涂片找抗酸桿菌是傳統的顯微鏡檢測方法，是通過染色后在顯微鏡下觀察痰液中的抗酸桿菌[4]。以上三種檢測方式是臨床上常用的肺結核檢測方法，但是每種方法都各有優勢與劣勢，故而本研究旨在對比分析支氣管鏡肺泡灌洗液GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌對肺結核的診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年6月至2022年6月梅州市人民醫院收治的214例疑似肺結核患者作為研究對象，其中男性患者178例，女性患者36例；年齡14～75歲，平均（44.60±18.25）歲。納入標準：①患者出現長期咳嗽（超過兩周）、咳痰、咳血或呼吸困難等呼吸系統癥狀；②胸部X線、CT或其他影像學檢查顯示肺部結節、陰影、空洞、浸潤或其他異常改變；③患者肺部組織活檢或刷片檢查發現結核分枝桿菌或典型的干酪樣壞死組織；④均行支氣管鏡肺泡灌洗；⑤所有患者行GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌檢測，⑥首次入院檢查，此前未接受過相關治療。排除標準：①合并嚴重基礎疾病或嚴重外傷；②合并惡性腫瘤或其他部位結核；③依從性差或因身體原因等無法配合完成研究；④既往有結核病史或肺部手術史。本研究經梅州市人民醫院醫學倫理委員會審核并通過，所有患者均知曉并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

1.2.1 支氣管鏡肺泡灌洗 患者入院后先進行心電圖、凝血功能、血常規等常規檢查，充分了解患者既往病史及疾病身體狀況等情況后禁食水4 h，患者取平臥位，采用2%鹽酸利多卡因注射液（石藥銀湖制藥有限公司，國藥準字H14024045，規格：5 mL∶0.1 g）局部麻醉后從口腔將支氣管鏡（上海澳華內鏡股份有限公司，型號：BBF-4）放入氣管，對雙側氣道行局部麻醉，通過配套顯示屏觀察，根據需求在病變部位取活檢組織、刷檢，然后取80～100 mL生理鹽水灌入支氣管及病變部位，灌洗后負壓吸引回收洗液，留取適量洗液送檢。

1.2.2 GeneXpert檢測 取1 mL支氣管鏡肺泡灌洗標本放入預處理管中，然后加入液化液；15～20 min后將混合液2 mL放入反應盒，采用結核分枝桿菌復合群核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）（廣州達安基因股份有限公司，規格：單管單人份， 20人份/盒）和熒光PCR檢測系統（杭州博日科技有限公司，型號：FQD-48A），行擴增檢測，應用全自動醫用PCR分析系統（美國賽沛公司，型號：GX-XVI R2）進行自動化檢測并報告結果。擴增曲線呈S型，根據Ct值和擴增曲線判斷（Ct值gt;10 Hu為陽性，≤ 10 Hu為陰性）。

1.2.3 TB-DNA檢測 取1 mL支氣管鏡肺泡灌洗標本，4%氫氧化鈉溶液稀釋液化搖勻后靜置30 min，離心（轉速3 000 r/min，時間10 min）用于基因擴增。應用實時熒光定量PCR技術檢測標本中TB-DNA。實驗步驟及結果判讀嚴格按照試劑盒上的說明書實施操作，同時做好室內質量控制。

1.2.4 涂片找抗酸桿菌檢測 取新鮮灌洗液，離心（轉速3 000 r/min，時間10 min），取下層濃縮液或沉淀涂片，若表面為活檢組織則通過勻漿后取勻漿液涂片，涂片后紫外線照射30 min進行固定，萋 - 尼法染色后在10×100倍鏡下觀察標本。

1.3 觀察指標 ①比較三種檢測方式下肺結核陽性檢出情況。對比GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌等方式的陽性及陰性檢出率。②比較三種檢測方式對肺結核的診斷效能。以結核分枝桿菌液體培養結果為金標準，對比GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌等方式檢測診斷肺結核的靈敏度、特異度、陽性預測值和陰性預測值。陽性預測值=[真陽性數量/（真陽性數量+假陽性數量）]×100%；陰性預測值=[真陰性數量/（真陰性數量+假陰性數量）]×100%；特異度=[真陰性數量/（真陰性數量+假陽性數量）]×100%；靈敏度=[真陽性數量/（真陽性數量+假陰性數量）]×100%。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0統計學軟件分析本研究所有數據，計數資料以[例（%）]表示，兩組間比較用χ2檢驗，3組間比較行χ2趨勢檢驗。以Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 GeneXpert對肺結核檢出情況 結核分枝桿菌液體培養結果陽性有147例，陰性有67例；GeneXpert診斷肺結核的檢出率為陽性93.46%、陰性6.54%，見表1。

2.2 TB-DNA對肺結核檢出情況 結核分枝桿菌液體培養結果陽性有147例，陰性有67例；TB-DNA檢測診斷肺結核的檢出率分別為陽性73.83%、陰性26.17%，見表2。

2.3 涂片找抗酸桿菌對肺結核檢出情況 結核分枝桿菌液體培養結果陽性有147例，陰性有67例；涂片找抗酸桿菌檢測診斷肺結核的檢出率分別為陽性45.79%、陰性54.21%，見表3。

2.4 三種方法診斷肺結核診斷效能比較 GeneXpert診斷肺結核的靈敏度最高，涂片找抗酸桿菌最低；GeneXpert特異度最低，涂片找抗酸桿菌最高，差異均有統計學意義（均Plt;0.05）；三種檢測方法的陽性預測值、陰性預測值比較，差異均無統計學意義（均Pgt;0.05），見表4。

3 討論

肺結核是國內最常見的傳染病之一，是目前最嚴峻的公共衛生問題之一，防治肺結核是醫護人員的重要工作內容[5]。盡管醫療技術日益發達，肺結核的治療效果也有了明顯改善，死亡率和致殘率大幅度降低，治療后患者生活質量明顯提高，但是我國人口基數大，絕對患病人數和新發病例數都較大，因此對肺結核的防治工作仍舊不能松懈。患者感染肺結核后早期大多無臨床表現，少數患者會出現咳嗽、咳痰等癥狀，隨著疾病發展或機體免疫力降低時才會出現明顯癥狀，若不及時治療可出現典型病變，包括發熱、咯血、咳嗽、乏力、結核結節、干酪樣壞死等，影響患者預后[6]。因此需要廣泛開展結核病的篩查工作，對早期患者進行準確的診斷，這樣有助于保護患者及公眾健康，盡可能減少疾病的傷害，提高治療效果。

支氣管肺泡灌洗是肺部疾病診斷和治療中常用的方法，常用生理鹽水通過支氣管鏡的輔助灌入支氣管肺泡中，再將液體排出，進而達到清潔氣道，標本取材及治療的目的[7]。灌洗液可用于臨床上常見的生化、免疫、微生物、細胞學等檢查，應用十分廣泛。

GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌檢測是目前臨床應用較多的肺結核篩查和診斷措施。每種檢測方法各有優缺點，部分醫護人員尚不明確這幾種檢測方法在診斷肺結核中的價值，因此開展本次研究，探索這幾種方法對肺結核的診斷效能。本研究結果顯示，結核分枝桿菌液體培養結果陽性有147例，陰性有67例；GeneXpert、TB-DNA、涂片找抗酸桿菌檢測對肺結核的檢出率分別為93.46%、73.83%、45.79%，說明3種方法均對肺結核具有一定的診斷價值，其中GeneXpert、TB-DNA的檢出率相對較高，雖然涂片找抗酸桿菌檢測檢出率雖然較低，但是作為傳統簡單快速的檢測方法也是必不可少的。

本研究結果顯示，GeneXpert診斷肺結核的靈敏度最高，涂片找抗酸桿菌最低；GeneXpert特異度最低，涂片找抗酸桿菌最高。分析其原因，GeneXpert檢測技術是一種以 GeneXpert系統平臺及PCR原理為基礎的體外診斷技術，全自動一體化實時定量檢測，以利福平耐藥rpoB基因為靶基因，自動提取 DNA片段，并擴增其基因的192bp片段，以進行檢測的技術手段，并檢測出結核分枝桿菌對利福平是否耐藥情況；且與傳統的培養方法相比，GeneXpert具有更高的敏感性，并且結果可以在幾小時內得出，這使得GeneXpert成為一種快速、準確的肺結核診斷方法[8]。然而，GeneXpert的成本較高，限制了其在資源匱乏地區的應用。TB-DNA可以檢測肺結核病原體的DNA，但是TB-DNA在測定中極易因采樣、試劑等污染致使結果出現誤差，而且TB-DNA的操作復雜常需要較高水平的實驗室設備和技術人員，因此在資源匱乏地區的使用也受到限制[9]。而涂片找抗酸桿菌作為一種常見的快速病原體檢測方法，可以通過染色技術直接觀察抗酸桿菌（結核分枝桿菌）的存在，盡管涂片找抗酸桿菌具有簡單、快速的優點，但其敏感性較低，特別是對于微量感染和難以培養的菌株[10]，因此，涂片找抗酸桿菌常常與其他診斷方法聯合使用，以提高診斷準確性。通過分析后發現，單一檢測雖具有一定優勢但具體應用還應根據實際情況酌情考慮。

綜上，GeneXpert具有較高的靈敏度、涂片找抗酸桿菌有較高的特異度，TB-DNA也有著比涂片找抗酸桿菌較高的檢出率和較GeneXpert更高的特異度。三種檢測方法均能有效診斷肺結核，且各有優勢，臨床需要結合患者的實際情況，酌情考慮多種檢測方法的使用，以提高肺結核特別是耐藥結核的早期診斷率。

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