抗血小板藥物的質量研究進展

摘要：抗血小板藥物近年來呈現蓬勃發展的態勢，其質量控制標準也在不斷發展和完善。本綜述基于《中國人民共和國藥典》2020年版（ChP 2020）、《美國藥典》43版（USP 43）、《日本藥典》17版（JP 17）等國內外及相關指導原則等參考資料，全面歸納了抗血小板藥物在藥典中的收錄情況，對常見的抗血小板藥物的質量控制方法進行總結，對含量測定和體內藥物分析方法等項目進行全面分析，期望為抗血小板藥物的研究與開發提供參考。

關鍵詞：抗血小板藥物；含量測定方法；體內藥物分析；有關物質檢查；吩噻吡啶藥物

中圖分類號：R969" " " " "文獻標志碼：A" " " " "文章編號：1001-8751（2024）01-0035-09

Research Progress on the Quality of Antiplatelet Drugs

Abstract：" "In recent years， antithrombotic drugs have been increasingly developed， and the related quality control standards have also been improved.The inclusion of antithrombotic drugs in these pharmacopeias was summarized based on the 2020 edition of the People's Republic of China Pharmacopoeia （ChP 2020）， the 43 edition of the United States Pharmacopeia （USP 43）， the 17 edition of the Japanese Pharmacopeia （JP 17）， and pertinent domestic and foreign guidelines. In addition， the elements of quality control， such as assay and in vivo drug analysis methods， were specifically included to serve as a point of reference for the research and development of quality control methods for antithrombotic drugs.

Key words：" "antiplatelet drugs;" "content determination method;" "in vivo drug analysis;" "examination of relevant substances;" "phenothiopyridine drugs

心腦血管疾病是心臟血管和腦血管疾病的總稱，心血管以冠心病為主，而腦血管疾病是指由血栓形成引起的腦部缺血性損傷癥狀[1]。從《2020世界衛生統計報告》中可知，2016年全球有4 100萬死于非傳染性疾病，其中死于心血管疾病的有1 790萬人，占比高達43%[2]。心腦血管疾病具有高致死率和致殘率[1]且病因復雜，而血栓的形成和血栓栓塞是引發該疾病的重要病因。目前，臨床治療血栓性疾病的藥物主要分為抗血小板藥物、溶血栓藥物和抗凝血藥物三大類[3]。分析這三大類藥物的經濟效益，抗血小板藥物的市場份額高達62.49%[4]；同時三類藥物的使用情況，抗血小板藥物的使用頻率高，發展前景好[5]。因此本文對抗血小板藥物的質量研究作簡要介紹。

1 抗血小板藥物的概述

血小板聚集是動脈血栓形成的關鍵因素，已成為動脈粥樣硬化形成的一級和二級預防的重要靶點?？寡“逅幬锿ㄟ^各受體的促進或抑制作用防止血小板聚集以及二次聚集，最終達到防止血栓形成的目的。各受體作用機制圖如圖1所示。

抗血小板藥物的作用機制主要分為幾類：由磷脂層產生游離的花生四稀酸（AA）在環氧化酶（COX-1）作用下，產生前列腺素（PGG2），再在血栓素酶（TxA2S）作用下，生成血栓素（TXA2）；凝血酶以及二磷酸腺苷分別作用于PAR-1、PAR-4受體和P2Y1和P2Y12受體；同時還有血小板糖膜蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/GPⅢa）受體以及磷酸二酯酶（PDEs）受體等作用，通過P2Y12和三磷酸腺苷直接作用于血小板[8]。不同的抗血小板活化途徑的作用效果不同，其中血栓素合成的途徑作用效果最強。

1.1 抗血小板藥物分類

基于藥物的作用機制不同，抗血小板藥物分類如表1所示。

1.2 抗血小板藥物在國內外藥典的收錄情況

查閱相關藥典和各資料，本文統計了抗血小板聚集藥物的原料藥在各大藥典中的收錄情況。其中阿司匹林、吩噻吡啶類藥物和磷酸二酯酶抑制劑在各大藥典中均有收錄，而GPⅡb/GPⅢa受體拮抗劑、血栓素A2受體拮抗劑和前列腺素藥物均未有收載。其中原料藥收載8個品種，具體收載情況如表2所示。

結合表1中信息以及查閱的文獻，以及各類抗血小板藥物的質量研究進展進行匯總。研究顯示，吩噻吡啶類藥物的結構優化以及磷酸二酯酶類藥物靶點成為近年來的研究熱點[10]。因此本文主要是對吩噻吡啶類以及磷酸二酯酶類藥物作詳盡介紹。

2 抗血小板藥物的質量研究

2.1 阿司匹林

作為醫藥史上三大經典藥物之一的阿司匹林，從1898年上市至今，已應用百余年。阿司匹林不僅是鎮痛解熱的非甾體抗炎藥，而且近年來在抗血栓方面也發揮極大的作用。隨著對該藥物的廣泛使用，臨床應用中阿司匹林在抗血栓過程中，常出現胃腸道不良反應和出血等副作用。但與其他藥物聯用可達到最優效果，與氯吡格雷聯用后，藥效顯著提高，同時抑制炎癥的發生[11]；與低分子肝素聯用，可有效的改善凝血功能，提高安全性[12]。

阿司匹林的含量測定采用的是酸堿滴定—酚酞指示劑法，采用中性乙醇做溶劑增大溶解度的同時可防止乙?；?。有關物質檢測采用高效液相色譜法，溶劑為1.0%冰醋酸的甲醇溶劑，色譜柱為十八烷基硅烷基鍵合硅膠，檢測波長為276 nm。洗脫程序為A：100.0%→20.0%（0→60min）；流動相A：乙腈—四氫呋喃—冰醋酸—水（20：5：5：70）；流動相B：乙腈。

2.2 吩噻吡啶類

噻氯匹定和氯吡格雷由Sanofi生產研制，普拉格雷由Daiichi Sankyo生產研制，這三類藥物均通過抑制磷酸二酯酶誘導的血小板聚集而發揮抗血小板效應。三類藥物均為白色結晶性粉末，溶解度差異較大。且氯吡格雷和普拉格雷存在多種晶型，而各晶型的穩定性及成藥性能，對于制劑的穩定性和制備有著重要影響。

三種藥物存在相同的母核結構，且眾多研究者對其進行結構優化。早期優化的位點較散且多，后期位點主要為吩噻并四氫吡啶的2、3、4、7位點[13]。氯吡格雷和普拉格雷就是通過對2、7位點的修飾而制得，由于這兩種藥物比噻氯匹定有著更好的藥效，后續改進相關位點的研究也將繼續。本文查閱文獻資料對該類藥物的體內藥物分析方法和含量測定等方法進行匯總，對比各類藥物方法的差異性，見表3。

藥典方法提示，其中鹽酸噻氯匹定的有關物質和含量測定大致相同；而硫酸氫氯吡格雷的含量測定中采用丙酮可以防止由于沉淀中對反應物有吸留和包夾；鹽酸普拉格雷有關物質和含量測定則采用150 mm的短柱，有關物質粒徑更小，柱效更高。普拉格雷與前兩種化合物檢測方法差異較大，位點優化后的吩噻吡啶類藥物可根據與三類藥物的相似性選擇相應的檢測方法。

體內藥物分析方法就為藥物的臨床前研究提供思路參考。由表4提示，體內藥物分析方法主要為液相—質譜聯用（HPLC-MS）和氣相—質譜聯用（GC-MS），少部分采用電化學方法進行檢測。電化學方法采用的是制備對特定藥物靈敏度極強的生物傳感器對樣品進行測定，但傳感器的制備過程較為繁瑣，目前并無工業化。采用質譜作為檢測器時，有著樣品用量少，檢出限低等優點。所以目前應用較為廣泛的依舊是HPLC-MS和GC-MS。普拉格雷作為前體藥物，在體內發揮藥效的為其活性代謝產物，該分析方法通過改變流動相的不同比例可以分別對代謝產物進行檢測。同時采用短柱需要控制流速，適應較小的溶劑流速和樣品體積。

臨床前研究后，就進行后續的臨床研究，上市后的制劑，也需要進行質量研究。對于各種藥物劑型的含量測定和有關物質檢查，除在藥典中收載的方法外，還有很多其他的方法。部分方法可以用于藥物制劑和生物樣品，常用的方法有：伏安法、電化學方法以及色譜法等。

電化學方法根據電信號的不同，主要分為電位法、電導法、電解法和伏安法。運用較多的為伏安法，主要為電解池中待測物質溶液在電解過程中的電壓或電流參數的變化進行定性和定量分析。同時還存在與藥典不一致的反相高效液相法等，具體方法如表5所示。

三種藥物與P2Y12受體的結合是不可逆的，相對于可逆性的P2Y12受體拮抗劑，副作用更大。對吩噻吡啶類進行結構優化，能提高藥物的安全性和耐用性。而P2Y12受體可逆拮抗劑，安全性更高。

2.3 P2Y12受體可逆拮抗劑

替卡格雷與坎格雷洛以及依諾格雷均屬于新型的抗血小板聚集藥物，該類藥物無須肝臟代謝，可逆地與P2Y12受體結合，阻斷血小板的活化。替卡格雷和坎格雷洛存在相似的結構，都屬于環戊三唑吡啶類藥物。

替卡格雷有關物質和含量測定均采用高效液相色譜法。采用堿失活封端苯基硅基硅膠柱，檢測波長為242 nm，柱溫為40℃，流速為0.65 mL/min。緩沖溶液為156 g/L的磷酸二氫鈉溶液，磷酸調pH至3.0；流動相A：緩沖溶液：水：乙腈（1：89：10）流動相B：緩沖溶劑：水：乙腈（1：29：70）。洗脫程序為A：80%（0→2 min）；80%→25%（2→42 min）；25%（42→47 min）。其他測定方法如表6所示。

其中比較新穎的是采用核磁定量進行測定，其原理為對于確定的分子，其積分和摩爾濃度成正比。核磁定量內標物的選擇原則為：選擇合適的溶劑，溶解樣品和內標物；內標物和樣品峰以及溶劑峰之間互不影響；選擇合適的定量峰。替卡格雷選擇環丙沙星作為內標物，采用氟譜作為定量峰進行含量測定。核磁定量分析法操作方便，簡單，目前已廣泛應用于無對照品或對照品難以獲得的樣品的含量測定。

2.4 磷酸二酯酶抑制劑

磷酸二酯酶抑制劑抑制磷酸二酯酶的活性，使得蛋白磷酸化抑制鈣離子的釋放，同時減少環磷酸鳥苷的分解，從而達到抑制血小板聚集的作用。西洛他唑是喹啉類衍生物，1988年研發上市，其效果優于阿司匹林；雙嘧達莫1986年在美國上市，早期用于血管舒張，臨床應用顯示是較好的抗血小板聚集藥物。

由表7可知，西洛他唑的有關物質和含量測定均采用辛基硅烷鍵合硅膠柱，其中有關物質采用等度洗脫，含量測定采用定度洗脫。雙嘧達莫的含量測定方法采用滴定法，該方法的精密度和準確性較高，但專屬性和靈敏度較差。表8提示，西洛他唑和雙嘧達莫的體內藥物分析還是采用電化學法和液質聯用法，而制劑中的含量測定除了滴定法和高效液相法，還有分光光度法。分光光度法以朗伯比爾定律為基礎，物質的吸光度和物質的濃度以及液層厚度成正比。測定不同濃度下的吸光度做標準曲線，且吸光度值應該處于0.2～0.8之間，保證線性的相關性。該方法操作簡單快速，但由于其檢出限低，無法進行痕量化合物的測定。

3 總結與討論

本文通過對抗血小板藥物在各大藥典中的收載情況以及質量研究方法進行總結，同時匯總體內藥物分析方法和制劑藥物含量測定方法。文中各類藥物的體內藥物分析方法大多采用液相—質譜聯用以及電化學方法，此類方法檢測限低，適用于生物樣品中藥物的測定。而各類藥物制劑含量測定方法除藥典中收載的方法外，電化學法、核磁定量法和分光光度法也用于制劑含量測定。噻氯匹定、氯吡格雷以及普拉格雷這三類藥物為有著相同母核結構的P2Y12受體不可逆拮抗劑。為提高該類藥物的安全性和耐用性，有研究者對噻吩吡啶類藥物進行結構優化。同時近年來發現的磷酸二酯酶靶點為研究熱點。本文對比這兩類為主的抗血小板藥物藥典中檢測方法的異同，旨在為后續修飾后的噻吩吡啶類和磷酸二酯酶類藥物提供質量評價思路以及為藥代動力學的檢測提供方法參考。

目前，對于噻吩吡啶類藥物和磷酸二酯酶類藥物的研究已經較為全面，而其他類抗血小板藥物卻無質量相關的標準。如血小板GPⅡb/GPⅡa受體拮抗劑大多處于臨床階段，已上市的有阿昔單抗、依替巴肽 以及替羅非班[38-39]；TXA2受體拮抗劑主要有達唑氧苯、利多格雷、特魯曲班；此外還存在5-羥色胺阻斷劑沙格雷酯等[40]。這些藥物均未被國內外藥典收載。

期望越來越多研究人員對其他類抗血小板藥物進行質量控制研究，保障用藥安全性和質量可控性，為治療血栓和血栓栓塞提供更多用藥思路。

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