酵母水解物對克氏原螯蝦生長性能、消化、抗氧化和免疫能力的影響

李玉龍 付運銀 張 恒 方 劉 , 王 乾 阮國良 ,

(1.長江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院, 荊州 434025; 2.長江大學(xué)小龍蝦繁育與健康養(yǎng)殖創(chuàng)新技術(shù)研究中心, 荊州 434025;3.湖北省水產(chǎn)產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院, 荊州 434026)

克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)原產(chǎn)于美國南部和墨西哥北部, 20世紀(jì)30年代經(jīng)從日本傳入中國[1],因其肉質(zhì)鮮美, 營養(yǎng)價值高, 深受歡迎, 現(xiàn)已歸化為我國重要的淡水養(yǎng)殖蝦類[2]。我國的克氏原螯蝦養(yǎng)殖規(guī)模巨大, 2022年全國該蝦養(yǎng)殖的總面積和總產(chǎn)量分別達(dá)2800萬畝和289.07萬噸[3]。高密度的集約化水產(chǎn)養(yǎng)殖易導(dǎo)致養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境惡化和養(yǎng)殖病害頻發(fā), 在大規(guī)模養(yǎng)殖中, 日益嚴(yán)重的細(xì)菌性及病毒性病害問題給克氏原螯蝦的養(yǎng)殖業(yè)帶來重大損失[4]。目前, 對該蝦的以上病害尚缺乏非常有效的防控措施[5],主要以預(yù)防為主, 如通過營養(yǎng)調(diào)控提高蝦體的免疫力。因此, 尋求優(yōu)質(zhì)的功能性飼料添加劑對于克氏原螯蝦等水產(chǎn)動物的健康養(yǎng)殖具有非常重要的意義。

酵母水解物(Yeast hydrolysate, YHY)是用新鮮啤酒酵母為原料經(jīng)除雜、自溶、酶解、噴霧干燥等工藝精制而成的一種優(yōu)質(zhì)功能性蛋白原[6,7], 其富含蛋白質(zhì)、核苷酸、小肽、維生素、生物酶、酵母多糖、游離氨基酸及B族維生素[8—10]。YHY作為一種綠色、安全和高效的優(yōu)質(zhì)飼料添加劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域已有廣泛的運用, 其可顯著改善和提高水產(chǎn)動物的生長性能、非特異性免疫力和抗氧化能力[9,11—15]。研究表明, 飼料中添加1.0%的YHY可以顯著提高日本沼蝦(Macrobrachium nipponense)的生長并增強其抗氧化能力[15]; 凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)飼料中YHY的適量添加, 顯著提高了該蝦的生長和飼料的轉(zhuǎn)化效率[9,14]、免疫酶(如超氧化物歧化酶、酚氧化酶和溶菌酶等)活性及耐低氧、耐低溫和抗病能力[16,17]。為此, 本實驗通過在基礎(chǔ)飼料中添加不同水平的YHY, 分析其對克氏原螯蝦幼蝦生長、消化、抗氧化和非特異性免疫的影響, 旨在為促進(jìn)該蝦的飼料添加劑配方和健康養(yǎng)殖提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 養(yǎng)殖管理

實驗用克氏原螯蝦購自湖北潛江市某養(yǎng)殖基地的同一批幼苗。濕法運輸至室內(nèi)克氏原螯蝦系統(tǒng)實驗基地。購回蝦后添加適量的維生素C于暫養(yǎng)缸中, 降低幼蝦應(yīng)激反應(yīng)。每天飽食投喂基礎(chǔ)飼料,暫養(yǎng)2周。正式實驗前禁食24h, 選用規(guī)格一致、健康和活力正常(6.43±0.55) g的克氏原螯蝦300尾, 隨機分為5組, 每組3個重復(fù)。養(yǎng)殖密度20尾/缸, 放養(yǎng)于15個容積為84L水族箱(0.6m×0.4m×0.35m)組成的室內(nèi)養(yǎng)殖系統(tǒng)中, 水位15 cm。每日投喂2次(9:00和18:00), 投喂量為體重的3%, 自然光照, 溫度為(25±0.5)℃, pH 7.5, 溶解氧(6.5±0.5) mg/L, 實驗缸中放置足量遮蔽物和蝦爬架以減少蝦間打斗行為, 每天換水1/3—1/2, 不間斷增氧, 實驗用水為充分曝氣的自來水, 實驗期8周。

1.2 實驗飼料制作及分組

YHY購自河南賽傅生物科技有限公司, 由釀酒酵母為原料經(jīng)一系列復(fù)雜加工過程制成。其產(chǎn)品成分含量如下: 粗蛋白≥40.0%、氨基酸態(tài)氮≥2.0%、甘露寡糖≥5.0%、核酸≥7.0%、水分≤10.0%及灰分≤10.0%。本實驗共配制5組飼料, 基礎(chǔ)配方的原料配比及營養(yǎng)水平見表1, 在基礎(chǔ)飼料中分別添加0.5%、1%、2%和4%劑量的YHY。飼料原料經(jīng)粉碎機(皇代-800Y)粉碎, 過80目篩網(wǎng), 混合均勻, 然后將豆油、魚油及適量水均勻地灑在混合飼料中, 用手揉捏。經(jīng)飼料顆粒機(NBS-150)擠壓制成粒徑2.0 mm的飼料, 60℃烘12h, 冷卻, 密封袋分裝, 標(biāo)記, -20℃冰箱保存?zhèn)溆谩ｏ暳现谱骱?從5組飼料中隨機抽取樣品對其營養(yǎng)水平進(jìn)行測定。

表1 基礎(chǔ)配方的原料配比及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Tab.1 Ingredient and nutritional level of basic diet (dry matter basis)

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖實驗結(jié)束后, 禁食24h。對每缸克氏原螯蝦進(jìn)行計數(shù), 準(zhǔn)確稱量每尾蝦的體重, 并且用游標(biāo)卡尺精確測量每尾蝦的體長, 做好記錄, 用于生長性能指標(biāo)的計算。解剖前每組隨機選取12尾蝦, 用1 mL一次性無菌注射器從蝦的頭胸甲后緣插入, 從圍心腔中抽取血淋巴于1.5 mL離心管。每缸隨機解剖3尾蝦, 取性腺組織, 稱重, 用于檢測性腺指數(shù)。取0.1 g胃組織制作混樣, 每組4個重復(fù), 分裝于EP管中, -80℃冰箱保存, 用于評估其消化能力。剝?nèi)ジ我认俜Q重后, 每缸取3尾蝦肝胰腺0.1 g制為混樣, 每組4個重復(fù), 分裝于EP管中, -80℃冰箱保存,用于檢測其消化、抗氧化及免疫指標(biāo); 每組隨機取6尾全蝦和上述取樣蝦腹部肌肉, 分別放入相應(yīng)編號的封口袋中, -80℃冰箱保存, 用于體成分測定。

1.4 指標(biāo)測定

(1) 生長指標(biāo)的計算

增重率(WGR, %)=(W1-W0)/W0×100

特定生長率(SGR, %/d)=(lnW1-lnW0)/d×100

肝胰腺指數(shù)(HSI)=WH/W1×100

性腺指數(shù)(GSI)=WG/W1×100

肥滿度(CF, g/cm3)=W/L3×100

式中,N1為實驗結(jié)束后存活的蝦尾數(shù);N0為實驗前蝦的初始尾數(shù);W1為實驗結(jié)束后蝦的體重;W0為實驗前蝦的重量;WH為肝胰腺重量;WG為性腺重量;L0為蝦初體;L1為蝦末體長; d為養(yǎng)殖天數(shù)。

(2) 全蝦、肌肉及飼料營養(yǎng)成分測定

粗蛋白含量采用凱氏定氮法(GB/T6432-1994)測定, 粗脂肪含量采用索氏乙醚抽提法(GB/T6433-2006)測定, 粗灰分含量采用馬弗爐灼燒法(GB/T6438-1992)測定, 水分含量采用105℃恒溫烘干法(GB/T6435-2006)測定。

瘢痕子宮是產(chǎn)科臨床常見的問題，我國人口政策的調(diào)整（二胎政策的放開），我國剖宮產(chǎn)率逐年增加，美國數(shù)據(jù)也顯示剖宮產(chǎn)率增加，疤痕子宮再次妊娠的陰道分娩問題受到產(chǎn)科屆特別的關(guān)注和重視[1-4]。疤痕子宮因盆腔粘連再次行剖宮產(chǎn)術(shù)的困難及復(fù)雜程度明顯升高，容易引發(fā)兇險型前置胎盤甚至胎盤植入導(dǎo)致產(chǎn)后大出血、新生兒窒息、產(chǎn)褥感染等并發(fā)癥[5-7]。本課題通過建立適合我國國情的疤痕子宮再次妊娠經(jīng)陰道分娩的風(fēng)險評分制表，評估VBAC的分娩結(jié)局，做好VBAC管理和規(guī)范。

1.5 胃組織和肝胰腺消化酶活性的測定

稱取采集的胃組織和肝胰腺組織樣品, 通過添加9vol (V/W)的生理鹽水并使用勻漿器勻漿, 用高速冷凍離心機在4℃、4000 r/min的條件下離心15min,保留上清液, 制成10%的組織勻漿。測定指標(biāo)包括:胃組織和肝胰腺的淀粉酶、胃蛋白酶及脂肪酶活性; 肝胰腺的過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)等酶類的活性、總抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量。

將所采集血淋巴樣品在4℃冰箱靜置過夜后,用高速冷凍離心機在4℃、3500 r/min條件下離心10min制備血清, 檢測血清總蛋白(TP)和白蛋白(ALB)的含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的活性。肝胰腺、腸道和胃組織及血淋巴指標(biāo)測定所用試劑盒均購自南京建成生物科技有限公司, 具體測定方法參照試劑盒所附說明書。

1.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2019初步處理后使用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。在實驗數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布和方差齊性的基礎(chǔ)上, 進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)并用Duncan’s法進(jìn)行多重比較, 以P＜0.05表示差異顯著。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)表示,最后用Origin 2022b軟件繪圖。

2 結(jié)果

2.1 YHY對克氏原螯蝦生長性能的影響

由表2可知, 飼料中添加YHY可以改善克氏原螯蝦生長性能。增重率(WGR)、存活率(SR)、特定生長率(SGR)、肝胰腺指數(shù)(HSI)和性腺指數(shù)(GSI)隨著YHY添加量的升高呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。WGR和SGR在1%YHY添加組達(dá)到最大值,顯著高于其他組(P＜0.05)。SR、HSI和GSI在2%YHY添加組達(dá)到最大值且均顯著高于對照組和0.5%添加組(P＜0.05)。1%與2%YHY添加組的終末體重(FBW)和終末體長(FBL)無顯著性差異(P＞0.05), 但均顯著高于其他組(P＜0.05)。1%YHY添加組的肥滿度(CF)顯著高于0.5%添加組(P＜0.05), 其他組間的CF無顯著性差異(P＞0.05)。

表2 飼料中添加不同水平酵母水解物對克氏原螯蝦生長指標(biāo)的影響Tab.2 Effects of different levels of dietary yeast hydrolysate on growth performance of P.clarkii

2.2 YHY對克氏原螯蝦肌肉和體成分的影響

由表3可知, 飼料中添加YHY對克氏原螯蝦全蝦水分、粗脂肪和粗灰分無顯著影響(P＞0.05); 全蝦粗蛋白呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢, 在1.00%YHY添加組達(dá)到最大值, 且顯著高于其他組(P＜0.05)。

表3 飼料中添加不同水平酵母水解物對克氏原螯蝦肌肉和體成分的影響Tab.3 Effects of different levels of dietary yeast hydrolysate on muscle and whole body composition of P.clarkii

飼料中添加YHY對克氏原螯蝦肌肉水分和灰分無顯著影響(P＞0.05); 粗蛋白和粗脂肪均在2%YHY添加組達(dá)到最大值, 且粗脂肪含量顯著高于對照組(P＜0.05); 2%和4%YHY添加組粗蛋白含量顯著高于0.5%和1%添加組(P＜0.05), 但與對照組都無顯著性差異(P＞0.05)。

2.3 YHY對克氏原螯蝦胃和肝胰腺組織消化酶活性的影響

如圖1所示, 2%YHY添加組的胃組織淀粉酶活性達(dá)到最高值, 且2%和4%YHY添加組的胃組織淀粉酶活性顯著高于其他組(P＜0.05; 圖1A)。隨著飼料中YHY含量的升高, 胃組織蛋白酶活性和脂肪酶活性呈先升后降的趨勢, 2%YHY添加組的蛋白酶活性達(dá)到最大值, 顯著高于其他組(P＜0.05); 1%和2%YHY添加組的脂肪酶活性無顯著差異(P＞0.05),但均顯著高于其他組(P＜0.05; 圖1B和1C)。

圖1 飼料中添加不同水平酵母水解物對克氏原螯蝦胃組織消化酶活性的影響Fig.1 Effects of different levels of dietary yeast hydrolysate on digestive enzyme activities in gastric tissue of P.clarkii

如圖2所示, 酵母水解物添加組的肝胰腺組織淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性均呈現(xiàn)先升高后降低趨勢。肝胰腺淀粉酶和蛋白酶活性均在2%YHY添加組達(dá)到最大值(圖2A和2B), 脂肪酶活性在1%YHY添加組達(dá)到最大值, 但隨著YHY添加量的增加, 脂肪酶活性并無顯著差異(P＞0.05; 圖2C)。2%YHY添加組肝胰腺的淀粉酶活性顯著高于對照組和4%YHY添加組( P＜0.05; 圖2A), 蛋白酶活性顯著高于其他各組(P＜0.05;圖2B), 脂肪酶活性顯著高于對照組和0.5%YHY添加組(P＜0.05; 圖2C)。結(jié)果表明, YHY可提高克氏原螯蝦胃和肝胰腺組織的消化酶活性, 具有提高該蝦消化能力的作用。

圖2 飼料中添加不同水平酵母水解物對克氏原螯蝦肝胰腺消化酶活性的影響Fig.2 Effects of different levels of dietary yeast hydrolysate on digestive enzyme activities in hepatopancreas of P.clarkii

2.4 YHY對克氏原螯蝦肝胰腺抗氧化能力的影響

如圖3所示, 隨著飼料中YHY添加量的升高,克氏原螯蝦肝胰腺CAT、T-SOD和T-AOC活性均呈先增后降的趨勢, 且均在2%YHY添加組達(dá)到最大值。2%YHY添加組肝胰腺CAT和T-SOD活性顯著高于其他各組(P＜0.05; 圖3A和3B); 2%和4%添加組肝胰腺T-AOC能力均顯著高于其他組(P＜0.05;圖3C)。1%YHY添加組的肝胰腺GSH-PX活性顯著高于其他各組(P＜0.05), 2%與4%YHY添加組肝胰腺GSH-PX活性顯著高于對照組和0.50%添加組(P＜0.05; 圖3D)。隨著飼料中YHY添加量含量的升高, 肝胰腺MDA含量呈先降后增的趨勢, 2%YHY添加組肝胰腺MDA含量最低, 1%和2%YHY添加組肝胰腺MDA含量均顯著低于對照組和其他實驗組(P＜0.05; 圖3E)。結(jié)果表明, 飼料中適量添加YHY可以增強克氏原螯蝦肝胰腺抗氧化酶的活性, 降低與氧化損傷有關(guān)的MDA含量從而提高該蝦的抗氧化能力。

2.5 YHY對克氏原螯蝦血清生化指標(biāo)的影響

如圖4所示, 隨著飼料中YHY含量的升高, 克氏原螯蝦血清TP和ALB含量呈先增后降的趨勢, 均在2%添加組達(dá)到最大值, 且顯著高于其他組(P＜0.05;圖4A和4B)。血清ALT和AST活性隨著YHY含量的升高呈先降后升的趨勢, 均在2%添加組下降到最低值; 1%和2%YHY添加組血清ALT顯著低于其他組(P＜0.05), 2%YHY添加組血清AST活性顯著低于其他組(P＜0.05; 圖4C和4D)。結(jié)果表明, 飼料中添加YHY可改善克氏原螯蝦血清生化指標(biāo)。

圖4 飼料中添加不同水平酵母水解物對克氏原螯蝦血清生化指標(biāo)的影響Fig.4 Effects of different levels of dietary yeast hydrolysate on serum biochemical indices of P.clarkii

2.6 YHY對克氏原螯蝦肝胰腺免疫酶活性的影響

如圖5所示, 隨著飼料中YHY添加量的升高,克氏原螯蝦肝胰腺AKP、ACP和LZM活性均呈現(xiàn)先升高后下降趨勢, AKP與ACP活性均在2%YHY添加組達(dá)到最大值, 且AKP活性與1%添加組無顯著性差異(P＞0.05)但均顯著高于其他組(P＜0.05; 圖5A),ACP活性顯著高于其他組(P＜0.05; 圖5B)。肝胰腺LZM活性在1%添加組達(dá)到最大值且顯著高于其他組(P＜0.05), 此外, 2%和4%YHY添加組的肝胰腺LZM活性仍然顯著高于對照組和0.50%添加組(P＜0.05; 圖5C)。以上結(jié)果表明, 飼料中添加適量的YHY可以提高克氏原螯蝦肝胰腺免疫相關(guān)酶的活性, 從而增強該蝦的非特異性免疫能力。

圖5 飼料中添加不同水平酵母水解物對克氏原螯蝦肝胰腺免疫酶活性的影響Fig.5 Effects of different levels of dietary yeast hydrolysate on immunoenzymatic activities in hepatopancreas of P.clarkii

3 討論

3.1 YHY對克氏原螯蝦生長性能及體成分的影響

在動物生長過程中, SR、SGR和WGR等是評價養(yǎng)殖動物生長情況的重要參考指標(biāo), 也是最直觀的指標(biāo)。對本實驗的結(jié)果分析發(fā)現(xiàn), 飼料中添加2%YHY可以顯著提高克氏原螯蝦的SR、WGR和SGR指標(biāo), 說明YHY有利于該蝦的存活與生長。究其原因, 可能與YHY中所富含的氨基酸、核苷酸及甘露寡糖等營養(yǎng)物質(zhì)被機體消化吸收有關(guān), 這與在日本沼蝦幼蝦[15]和凡納濱對蝦[9]的研究結(jié)果相似。但YHY的最適添加量在不同物種甚至同一物種中存在一定差異。熊家等[14]研究發(fā)現(xiàn)飼料中添加5%的YHY可改善凡納濱對蝦的生長性能, 顯著提高該蝦的FBW、WGR和SGR且顯著降低其FCR, 而0.5%—2%添加量對其生長性能無顯著影響。時博等[7]研究發(fā)現(xiàn)飼料中添加5 g/kg的YHY對大口黑鱸(Micropterus salmoides)的SGR、SR等生長指標(biāo)無顯著影響。由此可見, YHY在水產(chǎn)動物中的最適添加水平存在較大差異, 可能與養(yǎng)殖模式、養(yǎng)殖動物種類、生長階段及飼料配方等因素有關(guān)。

粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分等物質(zhì)是評價肌肉化學(xué)品質(zhì)的重要參考指標(biāo)[18], 且蛋白質(zhì)作為六大營養(yǎng)素之首, 其含量高低也是評價肌肉品質(zhì)和營養(yǎng)價值的重要指標(biāo)[19]。在本實驗中, YHY添加組中全蝦的粗蛋白含量均有所提高, 在1%添加組達(dá)到最大值, 顯著高于其他組, 而粗脂肪含量無顯著變化;肌肉中粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量均在2%添加組達(dá)到最大值, 且粗脂肪含量顯著高于對照組。全蝦粗蛋白含量的提高表明飼料中添加YHY可能促進(jìn)了克氏原螯蝦蛋白質(zhì)的沉積, 這可能與YHY中所含小肽的高消化吸收率有關(guān), 而肌肉中粗脂肪含量的變化,可能與肌肉中脂肪的合成和沉積速率或者生長速率的變化有關(guān), 具體機制有待進(jìn)一步研究。熊家等[14]對凡納濱對蝦的研究發(fā)現(xiàn), 5%YHY組的全蝦粗蛋白含量顯著增高; 在飼料中添加1.88 g/kg以上的YHY可顯著增加大口黑鱸肝臟粗蛋白質(zhì)含量[20]。然而,飼料中添加釀酒酵母對歐洲鰉(Huso huso)的體組分無顯著影響[21]。曾本和等[22]的研究發(fā)現(xiàn), 飼料中添加適宜YHY可分別顯著提高和降低草魚(Ctenopharyngodon idellus)魚體的粗蛋白與粗脂肪含量;在飼料中添加YHY可以顯著提高青魚(Mylopharyngodon piceus)幼魚肌肉中粗灰分和全魚中粗脂肪含量[23]。以上研究結(jié)果的差異可能與物種、生長階段和食性等多種因素的不同有關(guān)。

3.2 YHY對克氏原螯蝦消化酶活性的影響

消化酶活性大小可用來衡量動物對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力。蝦類的生長與其消化酶活性緊密相關(guān)[24,25], 與此同時, 食物營養(yǎng)素的質(zhì)和量又是影響甲殼類動物消化酶活性的關(guān)鍵因素[26]。本實驗發(fā)現(xiàn), 2%YHY添加組的克氏原螯蝦胃和肝胰腺組織的淀粉酶和蛋白酶活性最高, 1%YHY添加組的脂肪酶活性最高但與2%YHY添加組無顯著差異;1%— 4%YHY添加組克氏原螯蝦胃和肝胰腺組織中的3種消化酶活性均顯著高于對照組。這些結(jié)果表明YHY可提高該蝦的消化酶活性, 與熊家等[14]在凡納濱對蝦中的研究結(jié)果類似。這種消化酶活性促進(jìn)作用可能與YHY對機體所需氨基酸、核苷酸、甘露寡糖和營養(yǎng)小肽等的營養(yǎng)補充有關(guān), 進(jìn)而促進(jìn)其對飼料營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收和利用[27—29]。朱波等[30]的研究表明, 飼料中添加0.05%的甘露寡糖可以提高草魚增重率, 增強腸道消化酶活性, 提高機體非特異性免疫力。因此, 在飼料中添加1%—2%YHY可增強克氏原螯蝦的消化吸收能力進(jìn)而有利于其生長。

3.3 YHY對克氏原螯蝦肝胰腺抗氧化指標(biāo)的影響

水生動物的抗氧化能力可用于反映其健康狀況[12], MDA是由脂質(zhì)過氧化物分解產(chǎn)生的毒性物質(zhì)且其含量可反映機體的氧化損傷程度, 而CAT、SOD、GSH-PX及T-AOC等常被用于反映機體的抗氧化能力與機體健康程度[15,31]。SOD、CAT和GSHPX可以有效地清除氧自由基, 減少機體氧化損傷,提高機體免疫力[32,33]。本實驗結(jié)果顯示, 隨著YHY添加量的增加克氏原螯蝦肝胰腺MDA含量呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢, CAT、T-AOC和T-SOD活性均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢, 且均在2%添加組達(dá)到最小值或者最大值, 與對照組差異顯著; YHY添加組GSH-PX活性均顯著上升, 且在1%添加組達(dá)到最大值。這表明飼料中添加YHY可以增強克氏原螯蝦的抗氧化能力。與本實驗結(jié)果相似的是, 飼料中添加2%的YHY可以顯著提高日本沼蝦肝胰腺TAOC和SOD活性, 增強該蝦的抗氧化能力[15]; 飼料中添加1%的YHY可顯著提高大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼魚的T-AOC, 且2%的添加量可降低其肝臟的MDA含量[6]。此外, 在中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)[34]與凡納濱對蝦[35]等甲殼類及建鯉(Cyprinuscarpiovar.Jian)[36]、異育銀鯽(Carassiusauratus gibelio)[37]、羅非魚(Oreochromis niloticus)[11]、齊口裂腹魚(Schizothoraxprenanti)[38]、大口黑鱸[12]等魚類中也發(fā)現(xiàn)YHY可提高機體的抗氧化能力。其原因可能是YHY經(jīng)破壁處理, 釋放酵母細(xì)胞內(nèi)容物,使其中β-葡聚糖、小肽、核苷酸和維生素等免疫生物活性物質(zhì)的功效性得到最大利用, 從而增強機的抗氧化損傷能力[39—41]。

3.4 YHY對克氏原螯蝦血清生化指標(biāo)的影響

水產(chǎn)動物血液生化組成與機體生理健康、物質(zhì)代謝、營養(yǎng)及疾病狀況密切相關(guān)[42—44]。血清中的酶活力水平可以反映蛋白、肽類及氨基酸等物質(zhì)的吸收代謝狀況, TP由ALB和球蛋白組成, 是反映機體蛋白質(zhì)代謝和肝臟功能的重要指標(biāo)[45], 血清TP含量增加可以促進(jìn)機體蛋白質(zhì)沉積, 促進(jìn)生長;ALB作為營養(yǎng)物質(zhì)的載體, 與機體生長變化密切相關(guān)[46]。因此, TP和ALB指標(biāo)的變化都可直觀反映出機體的生長、代謝及免疫狀況[45,47]。本研究結(jié)果顯示, YHY添加組血清TP和ALB含量均顯著高于對照組, 且在2%YHY添加組達(dá)到最大值, 說明飼料中添加YHY可以促進(jìn)機體蛋白質(zhì)合成, 增強機體免疫能力。類似的研究表明, 飼料中添加5%YHY顯著提高凡納濱對蝦血清TP含量[43]; 0.2%—0.6%蜜糖YHY和0.6%啤酒YHY可提升異育銀鯽的蛋白合成能力, 促進(jìn)機體消化吸收蛋白質(zhì)[48]。ALT和AST作為參與動物機體蛋白質(zhì)代謝的重要氨基酸轉(zhuǎn)移酶是反映肝臟功能的重要指標(biāo)[47]。正常狀態(tài)下血清中相關(guān)轉(zhuǎn)氨酶活性處于較低水平, 肝臟細(xì)胞受損導(dǎo)致其細(xì)胞膜通透性變強時, ALT和AST才會大量滲透到血液[49,50], 故血清AST和ALT活性可反映出肝細(xì)胞受損狀況。在本實驗中, YHY可以顯著降低血清中AST和ALT活性且在添加量為2%時達(dá)到最低值, 說明YHY的添加有利于促進(jìn)克氏原螯蝦肝胰腺的健康。杜瑞玉等[20]和易婉婷等[31]研究發(fā)現(xiàn), 飼料中添加YHY可以大口黑鱸的降低血清AST活性;5%YHY的飼料中添加可顯著降低凡納濱對蝦的血清AST和ALT活性[43]。因此, 飼料中添加YHY對克氏原螯蝦有肝保護(hù)作用, 有助于維持其機體正常的肝胰腺功能。

3.5 YHY對克氏原螯蝦非特異性免疫能力的影響

克氏原螯蝦屬于淡水甲殼類動物, 主要依靠先天性免疫系統(tǒng)進(jìn)行防御[51,52]。AKP和ACP作為代謝調(diào)節(jié)酶, 在甲殼動物的非特異性免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[53,54]。LZM是由巨噬細(xì)胞分泌的堿性蛋白, 在免疫過程中催化細(xì)菌細(xì)胞壁的水解及誘導(dǎo)合成和分泌免疫因子[55], 在先天免疫中具有非常重要的作用。本實驗結(jié)果顯示, 添加YHY可以顯著提高克氏原螯蝦肝胰腺免疫酶活性, 且其AKP和ACP活性均在2%添加組達(dá)到最大值, LZM活性在1%添加組達(dá)到最大值。相關(guān)研究結(jié)果顯示, 添加1%的YHY可提高凡納濱對蝦的血清PO、NOS和LZM活性[43], 添加5%的YHY可提高日本沼蝦肝胰腺NO含量和NOS活性, 增強蝦的非特異性免疫性能[15]。此外, YHY的飼料添加可以提高齊口裂腹魚的血清LZM、SOD和ACP活性[38]及大口黑鱸肝臟的ALP、ACP和SOD活性[56]; 飼料中添加1.0%—2.0%的YHY可顯著增強吉富羅非魚(Oreochromis niloticus)的抗無乳鏈球菌感染能力[57]。因此, 飼料中添加YHY可改善克氏原螯蝦的非特異性免疫功能, 這可能與YHY中所含酵母細(xì)胞壁、核苷酸、小肽和β-葡聚糖等的抗菌及免疫增強作用有關(guān)。

4 結(jié)論

在本實驗條件下, 飼料中添加酵母水解物可提高或改善克氏原螯蝦的生長性能、肌肉粗蛋白和粗脂肪含量、消化酶活性及抗氧化與非特異性免疫能力, 且2.00%的添加量對該蝦的上述促進(jìn)效果最佳。