國際FAPAS乳粉中沙門氏菌能力驗證結果分析

秦婧 石菲

作者簡介：秦婧（1989—），女，陜西西安人，碩士，工程師。研究方向：食品微生物檢測與研究。

摘 要：目的：參加FAPAS乳粉中沙門氏菌能力驗證可維持實驗室檢驗能力，提高檢驗檢測機構競爭力。方法：依據FAPAS作業指導書及GB 4789.4—2016對乳粉中沙門氏菌進行檢測，同時加入標準菌株ATCC 14028作為陽性對照。結果：樣品M280d072-A檢出沙門氏菌；樣品M280d072-B未檢出沙門氏菌。結論：國際FAPAS乳粉中沙門氏菌檢測能力驗證結果評價為滿意。

關鍵詞：FAPAS；沙門氏菌；能力驗證

Analysis of FAPAS Salmonella Ability Verification Results in Milk Powder

QIN Jing， SHI Fei

（Shaanxi Institute of Product Quality Supervision and Inspection， Xian 710048， China）

Abstract： Objective： Participating in FAPAS Salmonella ability verification in milk power can maintain laboratory testing capacity and improve the competitiveness of testing institutions. Method： According to the instruction of FAPAS and GB 4789.4—2016， Salmonella in milk powder was detected and ATCC 14028 was added as a positive control. Result： The Salmonella was detected in sample M280d072-A; the Salmonella was undetected in sample M280d072-B. Conclusion： The results of the FAPAS test for Salmonella in milk powder were satisfactory.

Keywords： FAPAS; Salmonella; ability verification

沙門氏菌是一種常見的食源性致病菌，廣泛存在于自然界中，能引起人和動物急性腸胃炎、食物中毒、敗血癥等。世界各國都將沙門氏菌視為一項重要的食品安全指標，且普遍規定沙門氏菌不得檢出。《食品安全國家標準 預包裝食品中致病菌限量》

（GB 29921—2021）對沙門氏菌的要求十分嚴格，2021年新出臺的《食品安全國家標準 散裝即食食品中致病菌限量》（GB 31607—2021）對散裝即食食品沙門氏菌規定不得檢出。食品中沙門氏菌的檢驗是食品微生物檢驗中的一項常規檢驗，是每個檢驗檢測機構都應該具備的資質，是每個食品微生物檢驗員都應該具備的能力，同時對國民健康具有重要意義。中國合格評定國家認可委員會（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS）規定尋求并參加能力驗證是合格評定機構的責任和義務[1]。在食品分析領域，分析實驗室能力驗證（Food Analysis Performance Assessment Scheme，FAPAS）已發展成為享譽全球的國際評價體系[2]，我國已經有越來越多的檢驗檢測機構參與FAPAS能力驗證。為評估實驗室對食品中沙門氏菌的檢驗能力，本實驗室參加FAPAS于2022年11月組織的乳粉中沙門氏菌檢測能力驗證，依據的方法是《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》（GB 4789.4—2016）。

1 材料與方法

1.1 試劑

緩沖蛋白胨水（Buffered Peptone Water，BPW）、四硫磺酸鈉煌綠增菌液（Tetrathionate Broth Base，TTB）、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（Selenite Cystine Broth，SC）、亞硫酸鉍瓊脂（Bismuth Sulfite Agar，BS）、木糖賴氨酸脫氧膽鹽（Xylose Lysine Desoxycholate，XLD）瓊脂、沙門顯色培養基、營養瓊脂、沙門氏菌干制生化鑒定試劑盒等均來自北京陸橋技術股份有限責任公司。

1.2 儀器與設備

生化培養箱（上海博訊實業有限公司醫療設備廠，SPX-250B-Z）；二級生物安全柜（美國賽默飛世爾科技，1300SERIESA2）；Vitek 2 Compact全自動微生物生化鑒定儀（法國生物梅里埃股份有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 樣品的接收和確認

實驗室收到FAPAS乳粉中沙門氏菌能力驗證樣品2份，樣品編碼是M280d072-A、M280d072-B，樣品為25 g乳粉，塑料瓶包裝，外包裝完好，樣品性狀為白色粉末，且無結塊等異常現象，因此確認樣品完整。2份樣品標記為072A和072B，安排兩位檢驗員共同檢測，同時用實驗室標準菌株ATCC 14028做陽性對照。

1.3.2 樣品的前處理和預增菌

根據此次能力驗證作業指導書的說明，開啟樣品前應先將兩份樣品072A和072B置于室溫下

30 min。在P2生物安全實驗室的生物安全柜中以無菌操作開啟樣品，將樣品置于提前準備好的無菌均質袋中，先加入少量BPW充分沖洗塑料瓶內部，并將BPW吸出轉入之前的無菌均質袋中，最終使水化的BPW總量為225 mL。用均質器將樣品和BPW充分混勻1～2 min，即為預增菌液，并做好標記，分別標記為072A和072B。同時接種ATCC 14028做陽性對照，以未接種的BPW做空白對照，將預增菌液于（36±1）℃培養8～18 h。后續依據GB 4789.4—2016進行檢測分析。

1.3.3 選擇性增菌

將072A、072B、ATCC 14028、空白對照的預增菌液于（36±1）℃培養18 h后取出，混勻，移取1 mL，轉種于10 mL TTB內，于（42±1）℃培養18～24 h。同時，另取1 mL轉種于10 mL SC內，于（36±1）℃培養18～24 h。分別做好樣品標記，以上操作均在生物安全柜中進行。

1.3.4 分離

將所有TTB、SC選擇性增菌液于（36±1）℃培養24 h后取出，經混勻后，將每支TTB和SC分別劃線接種于BS瓊脂、XLD瓊脂和沙門顯色培養基上，并做好樣品標識。其中BS瓊脂于（36±1）℃培養48 h，XLD瓊脂和沙門顯色培養基于（36±1）℃培養24 h。

1.3.5 生化試驗

從072A、ATCC 14028的選擇性瓊脂平板上分別挑取可疑菌落接種營養瓊脂平板進行純培養，于（36±1）℃培養24 h。將培養好的純培養物接種至沙門氏菌干制生化鑒定試劑盒，同時采用Vitek2 Compact全自動微生物生化鑒定儀對純培養物進行鑒定。

2 結果與分析

2.1 選擇性增菌結果

1.3.3中培養后的TTB、SC培養物觀察情況如表1所示，兩名檢驗員檢測的結果一致。

2.2 分離結果

按1.3.4方法進行培養，結果見表2。TTB和SC培養結果相一致，其中072A和ATCC 14028的選擇性培養基上各有一種可疑菌落，需要進行后續生化試驗；072B的選擇性培養基未見菌落生長，判定M280d072B沙門氏菌未檢出（25 g乳粉）。兩名檢驗員檢測結果一致。

2.3 生化試驗結果

2.3.1 沙門氏菌干制生化鑒定試劑盒結果

沙門氏菌干制生化鑒定試劑盒鑒定結果見表3。依據GB 4789.4—2016中5.4.1～5.4.2對生化反應結果進行判定，樣品072A和ATCC 14028均為沙門氏菌屬，且兩名檢驗員檢測結果一致。

2.3.2 Vitek 2 Compact全自動微生物生化鑒定儀結果

經鑒定，發現樣品072A和ATCC 14028均為鼠傷寒沙門氏菌，且兩名檢驗員檢測結果一致。

2.4 結果報告

綜合生化試驗和Vitek 2 Compact全自動微生物生化鑒定儀的結果，樣品M280d072-A檢出沙門菌/

25 g，樣品M280d072-B未檢出沙門菌/25 g。

3 結論與討論

此次國際FAPAS乳粉中沙門氏菌能力驗證結果評價為滿意，表明該實驗室具備沙門氏菌檢測分析能力。BPW是一種廣泛性增菌液，也可作為稀釋液，具有修復細胞的作用，可復蘇沙門氏菌，也可用與單增李斯特氏菌的檢驗。TTB、SC是選擇性增菌液，其含有的選擇性抑制劑對不同沙門氏菌的選擇效果不同，因此在檢測過程中TTB和SC兩種增菌液需要同時使用，避免漏檢[3]。BS瓊脂選擇性比較強，對樣品中的雜菌有抑制作用，能更好地分離出目標菌[4]。XLD瓊脂選擇性較低，在日常檢驗中常遇到一些樣品在XLD瓊脂上為黃色菌落且不帶黑色中心，符合GB 4789.4—2016中沙門氏菌在XLD瓊脂上的菌落特征，但最終經生化試驗或Vitek生化鑒定儀鑒定并不是沙門氏菌屬。與BS瓊脂和XLD瓊脂不同的是，沙門顯色培養基在觀察菌落時更加直觀、容易辨認。對于本次能力驗證所采用的沙門顯色培養基，說明書上明確沙門氏菌典型菌落為紫紅色，其他為藍綠色、無色或不生長。也有研究表明科馬嘉顯色培養基比SS、XLD和HE的假陽性更少[5]。當然沙門顯色培養基單瓶凈含量小，且單價比其他幾種選擇性培養基要高。許多實驗室通常選擇性培養基選用BS瓊脂和XLD瓊脂，在必要時如高風險食品或能力驗證時再加入沙門顯色培養基。

基于本次試驗，將乳粉中沙門氏菌能力驗證中操作關鍵點總結如下。①準備工作。先確定檢驗人員，提前準備和檢查相關試劑、器具和設備。②樣品確認。實驗室收到FAPAS樣品時，應先對樣品進行確認，如仔細核對樣品信息、檢查樣品的外包裝是否完整、樣品性狀是否正常（顏色、有無結塊等）。③作業指導書和檢驗方案。收到樣品后，應先制定作業指導書和確定檢驗方法。檢驗方案的設計應包括檢驗人員、檢驗地點、時間安排、試劑配制、樣品前處理、預增菌、選擇性增菌、分離及鑒定等操作關鍵點，以及突發狀況的應對預案。④試劑配制。TTB增菌液經121 ℃、20 min高壓滅菌后，應立即放入冷水中冷卻，在臨用前以無菌操作加入碘液和煌綠，然后進行分裝。BS瓊脂平板、XLD瓊脂平板及沙門顯色平板均不需要高壓滅菌，在制備過程中不宜過分加熱，否則會降低其選擇性，BS和XLD兩種瓊脂平板應于使用的前一天配制。兩種瓊脂平板應貯于室溫暗處，BS瓊脂平板應在48 h內使用，否則容易影響分離鑒定結果。制備好的沙門顯色平板應于2～

8 ℃冰箱冷藏保存一周。⑤混勻的重要性和必要性。在所有食品微生物檢驗過程中，每個步驟應使用均質機和混勻器進行均質混勻。⑥樣品的前處理過程控制。整個檢測過程應在P2生物安全實驗室中的生物安全柜中進行。樣品由冷藏室中取出后應先在室溫下靜置30 min使其復蘇；兩名檢驗員共同確認樣品的性狀正常后，以無菌操作開啟樣品。⑦檢驗過程控制。每個步驟務必做好樣品標識避免混淆，且應有實驗室質量監督員在旁指導監督。操作完成后，應對生物安全柜和實驗室進行徹底清理消毒，避免造成陽性污染。⑧結果分析。每個步驟樣品和陽性對照培養好后，注意觀察反應現象。

參考文獻

[1]中國合格評定國家認可委員會.能力驗證規則：CNAS—RL02：2016[EB/OL].（2016-04-15）[2023-08-21].https：//www.docin.com/p-1699040362.html.

[2]陳萬勝，馬莉，亓瀟.國際FAPAS乳粉中沙門菌屬能力驗證的關鍵點[J].河南預防醫學雜志，2020，31（12）：900-903.

[3]王萍，董貴軍，喬勇升，等.顯色培養基上沙門氏菌及干擾菌的分離鑒定[J].食品研究與開發，2017，38（12）：158-161.

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[5]陳茂義，胡婕，劉建昭，等.科瑪嘉顯色培養基和XLD?SS?HE分離食品中沙門菌效果比較[J].公共衛生與預防醫學，2008，19（4）：12-14.