子癇前期病人長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19和長(zhǎng)鏈非編碼RNA HAND2-AS1表達(dá)水平與胰島素抵抗的相關(guān)性研究

蔣天從，劉志明，谷孝月，郭婉茹，石沖，戚桂杰

作者單位：唐山市婦幼保健院產(chǎn)前診斷科、唐山市出生缺陷篩查與診斷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 唐山063000

子癇前期是發(fā)生于妊娠20周之后的血壓升高、蛋白尿及代謝紊亂現(xiàn)象，易導(dǎo)致更嚴(yán)重的子癇，會(huì)造成不良母嬰結(jié)局，現(xiàn)有治療方法一般為盡量控制病情以延長(zhǎng)孕周，提高胎兒存活率［1-3］。胰島素抵抗（IR）是代謝綜合征的病理學(xué)基礎(chǔ)，可引發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂，參與子癇前期的發(fā)病，合并IR者發(fā)生子癇前期的風(fēng)險(xiǎn)高于正常孕婦，即IR 可能是子癇前期的發(fā)病基礎(chǔ)之一［4-5］。血管內(nèi)皮損傷也是子癇前期的誘發(fā)因素之一［6］。多種長(zhǎng)鏈非編碼RNA（LncRNA）被發(fā)現(xiàn)與血管內(nèi)皮損傷密切相關(guān)［7-9］，LncRNA H19在妊娠期疾病中表達(dá)異常［10］；LncRNA H19可調(diào)控氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡［11］，其在子癇前期疾病中的表達(dá)以及與IR 的關(guān)系有待研究。LncRNA HAND2-AS1在子癇前期血清內(nèi)高表達(dá)，且與血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷相關(guān)［12］。本研究通過(guò)分析子癇前期病人血清及胎盤(pán)組織中LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1水平以及IR水平的變化，初步分析其參與子癇前期的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2021 年1—12 月在唐山市婦幼保健院建卡的子癇前期孕婦105 例作為研究對(duì)象，其中輕度子癇前期孕婦67 例，重度子癇前期孕婦38 例。診斷標(biāo)準(zhǔn)以及子癇前期嚴(yán)重程度參照2020 年妊娠期高血壓疾病診治指南［13］。納入標(biāo)準(zhǔn)：?jiǎn)翁ィ粺o(wú)孕前高血壓；初次妊娠。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并心、肺、腎等功能障礙；多囊卵巢綜合征。隨機(jī)選取同期體檢健康孕婦97 例作為對(duì)照組。收集所有孕婦年齡、身體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、孕周、收縮壓、舒張壓、24 h尿蛋白等一般資料。

1.2 標(biāo)本采集抽取子癇前期孕婦以及正常孕婦空腹靜脈血，離心后分離血清，-80 ℃保存?zhèn)溆谩４袐D胎盤(pán)娩出后，取胎盤(pán)組織生理鹽水漂洗，液氮冷凍，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 孕婦血清、胎盤(pán)組織LncRNA H19與LncRNA HAND2-AS1水平測(cè)定通過(guò)Trizol試劑提取孕婦血清以及胎盤(pán)組織總RNA，將一定量RNA 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，通過(guò)SYBR Green PCR 試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）測(cè)定，擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)處理2 min，（95 ℃ 10 s，55 ℃ 15 s，72 ℃ 10 s）×40 次。通過(guò)2-ΔΔCt法定量LncRNA H19 與LncRNA HAND2-AS1 水平，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）作為二者內(nèi)參對(duì)照。引物5"-3"序列：LncRNA H19 正向ATCGGTGCCTCAGCGTTCGG，反 向CTGTCCTCGCCGTCACACCG；LncRNA HAND2-AS1 正 向TGTAGTGTCGCTGGTATCGC，反 向GAGTCACAGGCAGTCGTAGA；GAPDH 正向GGATGCAGGGATGATGTTC，反向TGCACCACCAACTGCTTA。

1.4 IR測(cè)定檢測(cè)孕婦空腹胰島素（FINS）、空腹血糖（FBG）水平，計(jì)算穩(wěn)態(tài)模型的IR 指數(shù)（HOMA-IR）=FINS×FBG∕22.5，用來(lái)評(píng)估個(gè)體胰島素抵抗水平，隨胰島素抵抗水平的升高，HOMA-IR升高［14］。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 25.0 分析，本研究計(jì)量資料（年齡、BMI、孕周、收縮壓、舒張壓、24 h 尿 蛋 白、FBG、FINS、HOMI-IR、LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1）數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布，采用±s描述，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)（對(duì)照組與子癇前期組、輕度子癇前期組與重度子癇前期組）；Pearson 法分析子癇前期孕婦血清、胎盤(pán)組織LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1水平與HOMI-IR相關(guān)性。以雙側(cè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組與子癇前期孕婦一般資料比較對(duì)照組與子癇前期組年齡、BMI、孕周比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；子癇前期組病人收縮壓、舒張壓高于對(duì)照組（P＜0.05），且重度子癇前期病人收縮壓、舒張壓高于輕度子癇前期病人（P＜0.05），孕周低于輕度子癇前期組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 子癇前期孕婦105例與體檢健康孕婦97例一般資料比較∕ ± s

表1 子癇前期孕婦105例與體檢健康孕婦97例一般資料比較∕ ± s

注：BMI為身體質(zhì)量指數(shù)。①為子癇前期組與對(duì)照組比較。②為重度與輕度比較。

分組對(duì)照組子癇前期組輕度重度t，P值①t，P值②舒張壓∕mmHg 83.76±8.68 105.71±5.52 103.93±5.41 108.85±5.58 21.61，＜0.001 4.43，＜0.001例數(shù)97 67 38年齡∕歲29.72±2.85 29.79±2.99 30.82±3.01 29.64±2.93 0.17，0.865 1.95，0.054 BMI∕（kg∕m2）25.24±2.88 25.46±2.70 25.52±2.60 25.36±2.61 0.56，0.576 0.30，0.763孕周∕周36.72±2.96 36.56±2.87 37.30±3.94 35.28±1.84 0.39，0.697 2.98，0.001收縮壓∕mmHg 111.65±8.72 163.72±9.17 151.14±9.06 175.32±9.31 41.28，＜0.001 13.01，＜0.001

2.2 對(duì)照組與子癇前期孕婦24 h 尿蛋白以及胰島素抵抗相關(guān)指標(biāo)比較與對(duì)照組相比，子癇前期組孕婦24 h尿蛋白、FBG、FINS、HOMI-IR水平升高（P＜0.05），且重度子癇前期孕婦24 h 尿蛋白、FBG、FINS、HOMI-IR 水平高于輕度子癇前期孕婦（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 體檢健康孕婦97例與子癇前期孕婦105例的24 h尿蛋白、FBG、FINS、HOMI-IR水平比較∕ ± s

表2 體檢健康孕婦97例與子癇前期孕婦105例的24 h尿蛋白、FBG、FINS、HOMI-IR水平比較∕ ± s

注：FBG 為空腹血糖，F(xiàn)INS為空腹胰島素，HOMI-IR 為穩(wěn)態(tài)模型的IR指數(shù)。①為子癇前期組與對(duì)照組比較。②為重度與輕度比較。

例數(shù)97 67 38 24 h尿蛋白∕mg 90.46±19.65 359.55±14.35 341.41±13.43 391.55±15.52 111.74，＜0.001 17.37，＜0.001 FBG∕（mmol∕L）4.22±0.70 5.84±0.97 5.24±0.85 6.90±1.15 13.52，＜0.001 8.44，＜0.001分組對(duì)照組子癇前期組輕度重度t，P值①t，P值②FINS∕（mU∕L）7.52±1.25 13.37±2.23 13.05±2.17 13.97±2.32 22.74，＜0.001 2.04，0.044 HOMI-IR 1.41±0.23 3.47±0.57 3.03±0.50 4.27±0.71 33.18，＜0.001 10.45，＜0.001

2.3 對(duì)照組與子癇前期孕婦血清、胎盤(pán)組織LncRNA H19 與LncRNA HAND2-AS1 水平比較與對(duì)照組相比，子癇前期組孕婦血清、胎盤(pán)組織LncRNA H19 與LncRNA HAND2-AS1 水平升高（P＜0.05），且重度子癇前期孕婦血清、胎盤(pán)組織LncRNA H19 與LncRNA HAND2-AS1 水平高于輕度子癇前期孕婦（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 體檢健康孕婦97例與子癇前期孕婦105例的血清、胎盤(pán)組織lncRNA H19、lncRNA HAND2-AS1水平比較∕ ± s

表3 體檢健康孕婦97例與子癇前期孕婦105例的血清、胎盤(pán)組織lncRNA H19、lncRNA HAND2-AS1水平比較∕ ± s

注：LncRNA H19為長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19，LncRNA HAND2-AS1為長(zhǎng)鏈非編碼RNA HAND2-AS1。①為子癇前期組與對(duì)照組比較。②為重度組與輕度組比較。

分組對(duì)照組子癇前期組輕度重度t，P值①例數(shù)97 LncRNA HAND2-AS1血清1.01±0.15 1.98±0.33 1.63±0.27 2.59±0.43 26.53，＜0.001 14.05，＜0.001 LncRNA H19血清1.01±0.15 2.52±1.42 2.34±0.39 2.84±0.47 10.42，＜0.001 5.86，＜0.001胎盤(pán)組織1.02±0.17 2.87±0.47 2.49±0.41 3.56±0.59 36.61，＜0.001 10.92，＜0.001 67 38 t，P值②胎盤(pán)組織1.02±0.17 3.75±0.62 3.45±0.57 4.28±0.71 41.93，＜0.001 6.55，＜0.001

2.4 子癇前期病人血清、胎盤(pán)組織間LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1 水平相關(guān)性相關(guān)性分析結(jié)果顯示，子癇前期病人血清與胎盤(pán)組織間LncRNA H19 水平呈正相關(guān)（r=0.55，P＜0.001），血清與胎盤(pán)組織間LncRNA HAND2-AS1 水平呈正相關(guān)性（r=0.65，P＜0.001）。

2.5 子癇前期病人血清、胎盤(pán)組織LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1 水 平 與HOMI-IR 相 關(guān) 性子癇前期孕婦血清、胎盤(pán)組織LncRNA H19 水平分別與HOMI-IR 呈正相關(guān)（r=0.53、0.59，P＜0.001）；血清、胎盤(pán)組織LncRNA HAND2-AS1 水平分別與HOMI-IR呈正相關(guān)（r=0.60、0.61，P＜0.001）。

3 討論

子癇前期可造成嚴(yán)重的母嬰不良結(jié)局，其發(fā)病機(jī)制仍未完全清晰。其中IR 在子癇前期臨床表現(xiàn)出現(xiàn)之前就可被檢測(cè)到，參與子癇前期的發(fā)展［15］。IR 是一種代謝綜合征，孕婦的高營(yíng)養(yǎng)需求會(huì)促使胰島素儲(chǔ)備功能發(fā)生改變，胎盤(pán)分泌一系列拮抗胰島素激素，是孕婦的生理適應(yīng)性反應(yīng)，但I(xiàn)R 也會(huì)引發(fā)子癇前期等妊娠期代謝綜合征［16］。研究顯示，子癇前期病人IR 水平高于正常孕婦［17］。IR 的變化與子癇前期的發(fā)展存在必要聯(lián)系，因此探求子癇前期病人IR 相關(guān)指標(biāo)有助于及時(shí)確定子癇前期并行預(yù)防性治療。

血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是子癇前期的重要發(fā)病機(jī)制，細(xì)胞毒性物質(zhì)可引起血管內(nèi)皮損傷，導(dǎo)致血壓升高，從而引發(fā)一系列病理變化。LncRNA 在表觀遺傳調(diào)控、細(xì)胞周期調(diào)控等生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用，是遺傳學(xué)研究熱點(diǎn)。多種LncRNA 在子癇前期的血管內(nèi)皮損傷中發(fā)揮調(diào)控作用。LncRNA H19 可調(diào)控ox-LDL 誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，參與對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖與凋亡的調(diào)控［18］，促進(jìn)血管新生［19］。劉明嫦［10］研究顯示，LncRNA H19 可通過(guò)介導(dǎo)miR-Let7e-5p 靶向MMP9 抑制滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲力與遷移力，導(dǎo)致病人發(fā)生妊娠期高血壓疾病。本研究中，子癇前期孕婦血清、胎盤(pán)組織LncRNA H19 水平顯著高于正常妊娠孕婦，且重度子癇前期病人血清、胎盤(pán)組織LncRNA H19 水平高于輕度子癇前期病人，提示LncRNA H19 可能參與子癇前期進(jìn)程。血管內(nèi)皮損傷也是IR 的病理基礎(chǔ)之一。胰島素可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞釋放一氧化氮，胰島素抵抗時(shí)，血管內(nèi)皮功能下降，表現(xiàn)為一氧化氮含量下降，胰島素抵抗時(shí)，血液中游離脂肪酸含量升高，抑制內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性，一氧化氮合成減少，血管內(nèi)氧自由基增多，氧自由基滅活血液中一氧化氮，血管依賴(lài)性舒張下降，胰島素信號(hào)通路異常也可導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷［20］。馮姍姍等［21］研究顯示，LncRNA H19 在2 型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病人中與IR 密切相關(guān)，其可能成為判定病情的生物標(biāo)志物。本研究中，子癇前期病人血清和胎盤(pán)組織LncRNA H19 均與HOMI-IR 呈正相關(guān)，即LncRNA H19 可能影響子癇前期病人的IR，LncRNA H19 可能通過(guò)影響血管內(nèi)皮損傷參與子癇前期進(jìn)展。

LncRNA HAND2-AS1 位于人染色體4q33-34上，與HAND2 為頭對(duì)頭方向，在癌細(xì)胞的增殖遷移中發(fā)揮重要作用［22］。滋養(yǎng)細(xì)胞具有癌細(xì)胞特質(zhì)，滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲不足是子癇前期的主要表現(xiàn)之一，導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞侵入螺旋小動(dòng)脈不全，導(dǎo)致其未發(fā)生重鑄而異常狹窄，胎盤(pán)灌注減少與缺氧。吳莉莉等［12］研究顯示，LncRNA HAND2-AS1 在子癇前期胎盤(pán)中表達(dá)升高，在血管內(nèi)皮細(xì)胞中敲低LncRNA HAND2-AS1 表達(dá)可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移以及血管形成，可能是造成子癇前期血管內(nèi)皮損傷的因素。本研究中子癇前期病人血清LncRNA HAND2-AS1水平顯著高于妊娠正常孕婦，提示LncRNA HAND2-AS1 與子癇前期的發(fā)生相關(guān)，重度子癇前期病人與輕度子癇前期病人血清LncRNA HAND2-AS1 存在差異，進(jìn)一步說(shuō)明LncRNA HAND2-AS1 與子癇前期的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。子癇前期病人血清、胎盤(pán)組織LncRNA HAND2-AS1 均與HOMI-IR 呈正相關(guān)，LncRNA HAND2-AS1 可能影響血管內(nèi)皮細(xì)胞、IR 與子癇前期建立聯(lián)系，血管內(nèi)皮損傷可能是三者間相關(guān)性的內(nèi)在聯(lián)系。

綜上所述，子癇前期病人LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1 高表達(dá)，二者與IR 密切相關(guān)，可能通過(guò)影響IR參與子癇前期發(fā)生發(fā)展。