人乳頭瘤病毒感染情況、陰道微環境指標與宮頸病變的相關性分析*

張林光,劉亞麗,董 濤

秦皇島市第一醫院體檢中心,河北秦皇島 066000

在過去的30年,由于國家宮頸癌篩查計劃的引入,高資源國家宮頸癌發病率一直在不斷下降。相比之下,在資源匱乏的國家,由于缺乏完善的篩查計劃,以及早期篩查覆蓋率較低,宮頸癌仍然是一個嚴重的健康問題。目前,我國宮頸癌的防治工作面臨嚴峻挑戰,篩查覆蓋率也處于較低水平[1]。宮頸癌的主要原因被認為是人乳頭瘤病毒(HPV)持續感染,在已經鑒定出的200多種HPV基因型中只有一小部分致癌或可能致癌,包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型。根據HPV的感染型別和數目,可將其分為單一感染和多重感染。不同人感染HPV后的反應情況不同,大多數感染是短暫的,可以在免疫系統的攻擊下自行消散,而少數患者會出現HPV持續性感染狀態,且隨著宮頸病變嚴重程度增加HPV轉陰的概率越低[2]。陰道是與外界相通的開放性通道,正常情況下乳酸桿菌作為優勢菌寄居其中,陰道微環境失調會使優勢菌群大量減少,導致宮頸生理及病理變化,因而,陰道微環境與宮頸病變的發生和發展可能存在密切關系[3-5]。本研究從HPV感染情況和陰道微環境改變2個方面對宮頸病變進行研究,現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2022年1月至2023年4月本院收治的307例宮頸病變患者作為研究對象,按照其病理檢查和液基細胞學檢查(TCT)結果分為低級別上皮內瘤變(LSIL)組169例、高級別上皮內瘤變(HSIL)組97例和宮頸癌組(SCC)41例;另選取同期本院200例TCT結果正常無宮頸病變的健康體檢者作為對照組。納入標準:(1)年齡20～70歲,均有性生活史且處于非孕期;(2)24 h內無性交、盆浴和陰道放藥史;(3)無其他惡性腫瘤;(4)具備完整的病歷資料且可供查閱。排除標準:(1)伴有嚴重肝、腎功能障礙;(2)合并其他婦科疾病;(3)孕期或哺乳期女性。所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。本研究經本院醫學倫理委員會審核批準(2023KZ054)。

1.2方法

1.2.1陰道微環境檢測 檢測方法:(1)采集標本,暴露宮頸,采用聚維酮碘消毒外陰,以干棉簽從陰道上1/3側壁刮取分泌物,置于試管內;(2)將試劑盒(青島華晶生物技術有限公司)于2～8 ℃環境取出,待恢復至室溫后將反應板置于卡片盒中;(3)取樣品管,加稀釋液6～8滴(約300 μL),充分涮洗后輕輕捏壓試管壁,進而將棉簽拭子吸附的液體盡量擠出,棄棉簽,得樣品液,將其按順序放置標本盤中,按儀器操作規則上機檢測。檢測指標:(1)干化學檢測,包括酸堿度(pH,范圍為3.8～5.0,顏色由橘黃色、綠色至藍色逐漸加深)、過氧化氫(H2O2,陰性為紅色或紫紅色,陽性為無色或近無色,弱陽性為淡粉色)、白細胞酯酶(LE,陰性為無色,陽性為藍色或深藍色,弱陽性為淺藍色);(2)有形成分檢測,包括乳酸桿菌樣菌、上皮細胞、白細胞、雜菌。評判標準:pH≤4.5為正常,>4.5為異常;H2O2陽性為正常,陰性為異常;LE陰性或弱陽性為正常,陽性為異常;陰道清潔度Ⅰ°～Ⅱ°為正常,Ⅲ°～Ⅳ°為異常(Ⅰ°:乳酸桿菌樣菌++++,上皮細胞++++,白細胞0～5/HP,雜菌陰性;Ⅱ°:乳酸桿菌樣菌++,上皮細胞++,白細胞5～15/HP,雜菌陰性;Ⅲ°:乳酸桿菌樣菌陰性,上皮細胞陰性,白細胞15～30/HP,雜菌++;Ⅳ°:乳酸桿菌樣菌陰性,上皮細胞陰性,白細胞>30/HP,雜菌++++)。評判標準參考《全國臨床檢驗操作規程》第4版中的相關標準。

1.2.2HPV分型檢測 (1)采集標本,充分暴露宮頸,將標本刷在子宮頸和外口順時針旋轉15～20周,取材后置入細胞保存液瓶中,送檢進行宮頸HPV檢測;(2)采用PCR體外擴增和DNA反向點雜交相結合的基因檢測技術,依據雜交信號判斷是否有HPV基因存在。試劑盒購自艾康生物技術(杭州)有限公司,能夠檢測25種HPV基因型,包括15種高危型:HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、69、73型;3種疑似高危型:HPV26、53、66型;7種低危型:6、11、40、43、44、81、83型。

1.3統計學處理 采用SPSS19.0統計軟件進行數據分析處理。計數資料以例數或百分率表示,組間比較采用χ2檢驗;采用Spearman相關分析宮頸病變嚴重程度與年齡的相關性;采用多因素Logistic回歸分析發生宮頸病變的影響因素。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1各組年齡分布情況比較 各組年齡分布情況比較,差異均有統計學意義(P<0.05),對照組>30～40歲年齡段分布最高(40.00%),LSIL組>30～40年齡段患病率最高(34.91%),HSIL組>40～50歲年齡段患病率最高(31.96%),SCC組>40～50歲年齡段患病率最高(34.15%)。見表1。

表1 各組年齡分布情況比較[n(%)]

2.2宮頸病變嚴重程度與年齡的相關性 Spearman相關分析結果顯示,宮頸病變嚴重程度與年齡呈正相關(r=0.306,P<0.05)。

2.3HPV感染情況比較 在所研究樣本中,HPV感染型別分布以高危型為主,其中前4位分別是HPV16、52、58、53型。HPV多重感染包括高危型與高危型混合感染、高危型與低危型混合感染和低危型與低危型混合感染,其中以高危型混合其他型別感染為主。HSIL組HPV多重感染率為37.11%(36/97),SCC組為34.15%(14/41),LSIL組為24.85%(42/169),對照組為10.50%(21/200),各組HPV多重感染率比較,差異有統計學意義(χ2=8.542,P=0.036)。LSIL組、HSIL組和SCC組HPV多重感染率均高于對照組,HSIL組和SCC組均高于LSIL組,差異均有統計學意義(P<0.05);SCC組HPV多重感染率與HSIL組比較,差異無統計學意義(P>0.05)。

2.4各組陰道微環境指標異常分布情況比較 陰道pH、H2O2、LE異常比例均為SCC組>HSIL組>LSIL組>對照組,且SCC組、LSIL組和HSIL組與對照組比較,差異均有統計學意義(P<0.05)。陰道清潔度異常比例為SCC組>HSIL組>LSIL組>對照組,LSIL組陰道清潔度異常比例與對照組比較,差異無統計學意義(P>0.05);HSIL和SCC組陰道清潔度異常比例與對照組比較,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組陰道微環境指標異常分布情況比較[n(%)]

2.5發生宮頸病變的多因素Logistic回歸分析 以是否發生宮頸病變(未發生=0,發生=1)作為因變量,以pH(≤4.5=0,>4.5=1)、H2O2(陰性=0,陽性=1)、LE(陰性或弱陽性=0,陽性=1)、陰道清潔度(Ⅰ°～Ⅱ°=0,Ⅲ°～Ⅳ°=1)作為自變量,進行多因素Logistic回歸分析,結果顯示,pH>4.5、H2O2陰性、LE陽性、陰道清潔度為Ⅲ°～Ⅳ°為發生宮頸病變的危險因素(P<0.05)。見表3。

3 討 論

近年來,我國采取了各項措施積極推進宮頸癌的篩查和預防,但并未使其發病率和病死率降到預期,且年齡分布也更趨于年輕化[6],所以,對影響其發生和發展因素的研究顯得尤為重要。本研究以307例宮頸病變患者作為研究對象,從年齡、HPV感染情況、陰道微環境改變3個方面進行分析,研究結果顯示,不同級別宮頸病變分布在不同年齡段,且通過Spearman相關分析可以看出,隨著年齡增長宮頸病變嚴重程度有增加趨勢。MARK等[7]研究結果表明,宮頸惡性病變患者年齡高峰期一般被認為是35～55歲。在DUAN等[8]的研究中,被確診為HPV相關的宮頸癌女性,有51.1%處于40～54歲,與本研究結果基本一致。

HPV感染在宮頸腫瘤及其前驅病變的病因學中起核心作用。本研究結果顯示,HPV感染型別分布以高危型為主,尤其以16、52、58、53型多見。國際癌癥研究協會的研究結果顯示,世界范圍內最常見的HPV感染亞型為16、18型[9],而我國以16、18、52、58、39型常見[10],其中長江以北地區的宮頸病變患者以HPV16、58、52型感染較常見[11],與本研究結果一致。有學者認為,HPV多重感染與宮頸病變進展有關[12-15],但也有學者指出二者相關性不明顯[16]。本研究結果顯示,HSIL組和SCC組HPV多重感染率均高于LSIL組和對照組,但這HSIL組和SCC組之間差異不明顯,可能需要擴大樣本量進一步分析。

本研究結果顯示,LSIL組、HSIL組和SCC組陰道pH、H2O2、LE及清潔度異常比例均高于對照組,差異均有統計學意義(P<0.05),與安娜等[17]研究結果一致。多因素Logistic回歸分析結果顯示,pH>4.5、H2O2陰性、LE陽性、陰道清潔度為Ⅲ°～Ⅳ°為發生宮頸病變的危險因素(P<0.05)。正常情況下陰道微環境呈酸性,pH為3.8～4.4,pH升高會促進雜菌繁殖,隨著陰道自凈能力變差,陰道清潔度變差,提升了HPV的易感性;同樣,在正常情況下乳酸桿菌與雜菌競爭營養與黏附作用,當陰道微生物群發生紊亂時也會使酸性環境發生改變,pH升高。H2O2情況與朱若曦等[18]研究結果一致,原因可能為乳酸桿菌為陰道內環境的優勢菌群,可分泌H2O2等抑制雜菌生長,H2O2水平正常往往提示陰道內乳酸桿菌數量和活力處于正常狀態,相反則可能提示菌群失調[19],通過檢測陰道微環境中H2O2可以反映乳酸桿菌的數量和功能。有研究表明,HPV感染者LE陽性率高于HPV陰性者[20]。LE為白細胞的細胞內酶,正常機體LE呈陰性,當有炎癥性改變時在吞噬病原微生物過程中導致白細胞發生破壞從而釋放LE。因此,陰道微環境改變不僅能增加HPV感染的風險,而且在感染后發展為宮頸癌的過程中起到推波助瀾的作用。

本研究將宮頸病變按病變嚴重程度分為LSIL、HSIL、SCC 3個組,以無宮頸病變的健康人群作為對照組,更細致、全面地分析了宮頸病變中HPV感染情況差異與陰道微環境的改變,期待為疾病的預防和臨床治療提供依據。