宮頸癌組織IGHG1、TRIM14表達及其臨床意義

王 微,胡美麗,張雪芹,王紅紅,付琳琳,許 輝

(1.保定市婦幼保健院,河北 保定071000;2.青島市西海岸新區(qū)中心醫(yī)院,山東 青島 266555)

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤。近年來,宮頸癌發(fā)病率和死亡率逐年上升,且患病人群趨于年輕化,直接影響了婦女的身心健康[1-2]。宮頸癌疫苗的上市一定程度上降低了宮頸癌的發(fā)病率,但HPV感染篩查率仍然較低,宮頸癌患者存活率沒有得到有效提高[3]。宮頸癌患者預后較差,術后易復發(fā),因此,尋找準確評估宮頸癌患者預后的生物標志物對提高宮頸癌防治能力具有重要意義[4]。免疫球蛋白G1重鏈恒定區(qū)(immunoglobulin G1 heavy chain constant region,IGHG1)是免疫球蛋白IgG的亞型之一,研究發(fā)現(xiàn)其參與多種腫瘤的發(fā)生與發(fā)展,與腫瘤細胞的增殖、遷移、侵襲和上皮間質轉化等過程密切相關,與腫瘤來源的IgG呈正相關[5-6]。三結構域蛋白14(tripartite motif-containing 14,TRIM14)是一種與感染和免疫調節(jié)相關的蛋白質,近期研究發(fā)現(xiàn)其在多種腫瘤組織中異常表達,參與惡性腫瘤的遷移、侵襲、血管生成等惡性生物學行為[7-8]。但IGHG1、TRIM14蛋白在宮頸癌組織中的表達和臨床意義還尚未見相關研究。因此,本研究通過檢測宮頸癌組織IGHG1、TRIM14蛋白表達水平,分析兩者的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2019年3月至2020年3月保定市婦幼保健院收治的新診斷的82例宮頸癌患者作為研究對象,患者年齡25～78歲,平均(58.50±5.34)歲。研究對象納入標準:①經(jīng)婦科檢查,影像學和宮頸組織病理學檢查等初次確診為宮頸癌;②均擬進行宮頸癌根治性切除術;③外科手術切除前未經(jīng)過任何形式的抗腫瘤治療;④根據(jù)FIGO的分期標準[9]顯示病情已進入臨床分期Ⅰ～Ⅲ期;⑤有完整的臨床病理資料;⑥患者本人及家屬知曉并同意,本人自愿簽署同意書。排除標準:①伴有其他婦科疾病者;②合并其他惡性腫瘤者;③合并嚴重感染者;④隨訪時間不足1個月或院內死亡者;⑤妊娠或哺乳期婦女;⑥伴有心、肝、腎等重要器官嚴重功能障礙者;⑦精神狀態(tài)異常者;⑧合并自身免疫性疾病者。本研究符合相應人體實驗倫理原則和規(guī)范,已得到我院的倫理委員會批準(2020-A109)。

1.2 研究方法

1.2.1 主要試劑與儀器

二步法試劑盒、DAB顯色試劑盒、山羊血清購自北京中杉金橋生物技術有限公司;兔抗人IGHG1、TRIM14抗體購自美國Abcam公司。

1.2.2 一般資料的收集

收集所有研究對象的臨床資料,包括年齡、腫瘤直徑、腫瘤病理類型、腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴轉移、生育、絕經(jīng)等資料。

1.2.3 組織樣本的采集與儲存

所有宮頸癌患者入院后均在術中取部分腫瘤組織與癌旁組織(≥腫瘤邊緣5cm),于-80℃凍存,待測。

1.2.4 免疫組化法檢測宮頸癌腫瘤組織與癌旁組織IGHG1、TRIM14蛋白表達

取樣本制備組織切片,之后進行脫蠟、水化、抗原修復,除去內源性過氧化物酶,在室溫下用山羊血清封閉30min。之后加入IGHG1(1∶200)、TRIM14(1∶200)一抗孵育過夜。次日加入二抗室溫下繼續(xù)孵育2h,之后PBS洗滌,加入DAB顯色液顯色3min,加入自來水終止顯色。經(jīng)蘇木精復染、脫水、透明,用中性樹膠進行封片。顯微鏡下觀察IGHG1、TRIM14蛋白的表達情況。若呈陽性表達,則細胞質或細胞核被染成棕黃色,若為陰性表達,則為藍色。光鏡下隨機選取5個視野,以陽性細胞百分數(shù)評價IGHG1、TRIM14蛋白的表達情況。

1.2.5 隨訪

所有宮頸癌患者術后通過電話或門診接受3年的規(guī)律隨訪,每月隨訪1次,統(tǒng)計患者3年的生存情況,隨訪截止到2023年3月。并依據(jù)患者存活情況分為預后良好組(存活時間≥3年)與預后不良組(存活時間<3年)[10]。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 癌旁組織與腫瘤組織IGHG1、TRIM14蛋白表達比較

如表1和圖1、2所示,與癌旁組織相比,宮頸癌患者的腫瘤組織中IGHG1、TRIM14蛋白表達水平均顯著升高,且具有顯著性差異(P<0.05)。

圖1 免疫組化法檢測癌旁組織與宮頸癌腫瘤組織中IGHG1蛋白表達(×400)

圖2 免疫組化法檢測癌旁組織與宮頸癌腫瘤組織中TRIM14蛋白表達(×400)

表1 癌旁組織與腫瘤組織中IGHG1、TRIM14蛋白表達水平比較

2.2 IGHG1、TRIM14蛋白表達水平與患者臨床病理特征的關系

如表2所示,IGHG1、TRIM14蛋白表達水平與患者年齡、腫瘤直徑、腫瘤病理類型、絕經(jīng)、生育情況等無關(P>0.05);與TNM分期、腫瘤分化程度、淋巴轉移有關(P<0.05)。

表2 IGHG1、TRIM14蛋白表達水平與患者臨床病理特征的關系

2.3 預后良好組與預后不良組腫瘤組織IGHG1、TRIM14蛋白表達的比較

如表3和圖3、4所示,預后不良的發(fā)生率為30.49%(25/82)。與預后良好組相比,預后不良組患者腫瘤組織中IGHG1、TRIM14蛋白表達水平顯著升高(P<0.05)。

圖3 免疫組化法檢測預后良好組與預后不良組腫瘤組織中IGHG1蛋白表達(×400)

圖4 免疫組化法檢測預后良好組與預后不良組腫瘤組織中TRIM14蛋白表達(×400)

表3 預后良好組與預后不良組腫瘤組織中IGHG1、TRIM14蛋白表達水平比較

2.4 多因素Logistic回歸分析宮頸癌患者預后的影響因素

以患者3年內是否死亡為因變量,以IGHG1、TRIM14蛋白表達水平為自變量進行多因素Logistic回歸分析,結果顯示,IGHG1、TRIM14是宮頸癌患者發(fā)生不良預后的危險因素(P<0.05),見表4、5。

表4 變量賦值方式

表5 多因素Logistic回歸分析宮頸癌患者預后的影響因素

2.5 IGHG1、TRIM14蛋白表達水平對宮頸癌患者預后的價值分析

如表6和圖5所示,IGHG1、TRIM14蛋白表達水平與二者聯(lián)合預測宮頸癌患者預后的AUC分別為0.947、0.793與0.957,二者聯(lián)合優(yōu)于TRIM14蛋白單獨預測(Z二者聯(lián)合-TRIM14=2.383,P=0.017),與IGHG1蛋白表達水平單獨預測預后的AUC相比無顯著性差異(Z二者聯(lián)合-IGHG1=1.089,P=0.276)。

圖5 腫瘤組織IGHG1、TRIM14蛋白表達水平預測宮頸癌患者預后的ROC曲線

表6 腫瘤組織IGHG1、TRIM14蛋白表達水平對宮頸癌患者預后的價值分析

3 討論

宮頸癌是婦科常見的三大惡性腫瘤之一,全球每年的宮頸癌病例高達50萬,中國確診人數(shù)占全球的25%,嚴重威脅著女性的生命健康[11]。宮頸癌通常在中晚期被確診,5年生存率為66%,晚期的存活率僅為17%[12]。宮頸癌患者臨床結局差異較大,若不及時進行干預,患者發(fā)生不良預后的可能性將會增加,對提高患者存活率帶來不利影響。因此,尋找分子標志物來準確評估宮頸癌患者的預后具有重要的臨床意義。

3.1 IGHG1在宮頸癌中的表達

IgG存在于多種上皮來源的腫瘤細胞如肺癌、肝癌、乳腺癌等中,而IGHG1是位于14號染色體的一種蛋白質編碼基因,是IgG的一種亞型[13]。有證據(jù)表明,IGHG1在許多癌細胞中異常表達,且其異常表達與腫瘤的發(fā)生發(fā)展息息相關[14]。Li等[15]研究發(fā)現(xiàn)IGHG1在胃癌組織和細胞中表達明顯升高,且IGHG1能作為癌基因促進胃癌細胞增殖、遷移和化療耐藥。Jin等[16]研究發(fā)現(xiàn)沉默IGHG1減弱了乳腺癌細胞的活力、侵襲、上皮間質轉化,增強了其凋亡的能力,IGHG1能通過激活AKT途徑促進乳腺癌的惡性發(fā)展。吳遙西等[17]研究發(fā)現(xiàn)沉默IGHG1基因后,膀胱癌EJ細胞的增殖和遷移水平降低,細胞凋亡率增加。本研究結果顯示,與癌旁組織相比,宮頸癌患者腫瘤組織IGHG1蛋白表達顯著升高;對宮頸癌患者進行預后價值分析結果顯示,預后不良組宮頸癌患者腫瘤組織IGHG1蛋白表達顯著高于預后良好組宮頸癌患者。對臨床病理特征進行比較發(fā)現(xiàn),IGHG1蛋白表達水平與患者與TNM分期、腫瘤分化程度、淋巴結轉移有關。這些結果提示IGHG1可能參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展,對宮頸癌的進展具有促進作用,且其水平升高可提示患者發(fā)生不良預后的風險增加。

3.2 TRIM14在宮頸癌中的表達水平及臨床意義

TRIM14是TRIM的家族成員,位于染色體9q22,已有大量研究證明其在肝癌、結腸癌、乳腺癌等腫瘤組織中表達上調,促進腫瘤增殖、遷移、侵襲、耐藥等一系列惡性生物學行為[18]。Hu等[19]研究發(fā)現(xiàn)TRIM14在乳腺癌組織和細胞系中表達上調,沉默TRIM14的表達可抑制細胞增殖,促進細胞凋亡,說明TRIM14能作為乳腺癌癌基因促進腫瘤進展。Chen等[20]研究發(fā)現(xiàn)TRIM14在結直腸癌中表達顯著上調,且與患者的不良預后呈正相關,能夠促進結直腸癌細胞的增殖、遷移、侵襲等過程。余道武等[21]研究發(fā)現(xiàn)胰腺癌組織中TRIM14的表達異常升高,且與患者的臨床病理特征與預后相關,可以作為預后的評估指標。本研究結果顯示,與癌旁組織相比,宮頸癌患者腫瘤組織TRIM14蛋白表達水平顯著升高;與預后良好組相比,預后不良組宮頸癌患者腫瘤組織TRIM14蛋白表達水平顯著升高,且其表達與TNM分期、腫瘤分化程度、淋巴結轉移有關。這些結果說明TRIM14與宮頸癌的病情進展有密切關系,且水平升高提示病情嚴重,預后較差。

本研究ROC曲線分析顯示,腫瘤組織IGHG1與TRIM14蛋白表達水平聯(lián)合評估宮頸癌患者預后的AUC為0.957,優(yōu)于TRIM14單獨預測宮頸癌患者預后的AUC。多因素Logistic回歸分析結果顯示,IGHG1與TRIM14是宮頸癌患者發(fā)生不良預后的危險因素。這些結果說明IGHG1與TRIM14蛋白表達水平對宮頸癌患者預后預測具有一定價值。

綜上所述,宮頸癌患者腫瘤組織中IGHG1和TRIM14蛋白高表達,其與宮頸癌患者預后有關,可能是宮頸癌預后評估的生物標志物。然而,本研究還存在不足之處,IGHG1和TRIM14對宮頸癌病情進展的影響機制還尚未明確,還需進一步研究。