潤(rùn)腸顆粒對(duì)小鼠便秘的改善作用及機(jī)制 Δ

黃夢(mèng)琴，王雪松，甘雨涵，盧詩(shī)勤，鄧琪琪，朱 青 ，郭 姣（廣東藥科大學(xué)中醫(yī)藥研究院/廣東省代謝病中西醫(yī)結(jié)合研究中心/糖脂代謝病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省代謝性疾病中醫(yī)藥防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510006）

便秘是胃腸道疾病中最常見(jiàn)的類(lèi)型，其主要癥狀為大便秘結(jié)不通、排便時(shí)間延長(zhǎng)和排便困難。胃腸動(dòng)力不足及腸道水分和潤(rùn)滑性黏液分泌紊亂導(dǎo)致的腸道蠕動(dòng)減弱，是便秘發(fā)生的主要原因。便秘不僅給患者的身體和精神帶來(lái)困擾，還嚴(yán)重影響患者的日常生活和健康。中藥可通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)和多機(jī)制治療便秘等癥，且副作用小，近年來(lái)已被廣泛應(yīng)用于便秘的治療。

潤(rùn)腸顆粒是廣東藥科大學(xué)中醫(yī)藥研究院的專(zhuān)利復(fù)方中藥制劑，具有益氣養(yǎng)陰的功效，臨床主要用于行氣潤(rùn)腸通便。該藥由白術(shù)、枳實(shí)、肉蓯蓉、厚樸、火麻仁、當(dāng)歸、黃芪、西洋參8 味中藥組成[1]，其中白術(shù)和枳實(shí)能夠健脾理氣，促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，提高腸道的運(yùn)動(dòng)功能；肉蓯蓉、厚樸、火麻仁、當(dāng)歸具有潤(rùn)腸通便的作用；黃芪具有益氣補(bǔ)中的作用；西洋參具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰和清熱生津的功效。然而，潤(rùn)腸顆粒治療便秘的具體作用機(jī)制尚未闡明。基于此，本研究利用洛哌丁胺誘導(dǎo)便秘小鼠模型，探討潤(rùn)腸顆粒對(duì)便秘的改善作用并探究其潛在作用機(jī)制，旨在為闡明潤(rùn)腸顆粒的藥效和作用機(jī)制提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括ASP300S型組織脫水機(jī)、RM2235 型石蠟切片機(jī)（德國(guó)Leica 公司），YB-7LF 型石蠟包埋機(jī)（湖北省亞光醫(yī)用電子技術(shù)有限公司），BX53型光學(xué)顯微鏡（日本Olympus 公司），5804R 型冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司），SM i3x型多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Molecular Devices公司），Light Cycler 480 Ⅱ型實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）儀（美國(guó)Roche 公司），Universal Hood Ⅱ型高靈敏度化學(xué)發(fā)光成像儀（美國(guó)Bio-Rad公司）。

1.2 主要藥品與試劑

潤(rùn)腸顆粒（規(guī)格10 g/袋，批號(hào)分別為201001、201002、201003）來(lái)源于廣東藥科大學(xué)中醫(yī)藥研究院；鹽酸洛哌丁胺膠囊（規(guī)格2 mg，批號(hào)KLJOBJ7）購(gòu)自西安楊森制藥有限公司；枸櫞酸莫沙必利片（規(guī)格0.005 g，批號(hào)6600C）購(gòu)自住友制藥（蘇州）有限公司；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑（批號(hào)1014A21）購(gòu)自北京雷根生物技術(shù)有限公司；阿爾新藍(lán)染色試劑盒（貨號(hào)G8015-100ml）購(gòu)自廣州捷倍斯生物科技公司；兔黏蛋白2（mucin 2，MUC2）單克隆抗體和兔重組Tubulin 單克隆抗體（貨號(hào)分別為ab272692、ab176560）均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；兔干細(xì)胞因子（stem cell factor，SCF）、酪氨酸激酶受體c-kit 多克隆抗體和兔甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）單克隆抗體以及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG（H+L）抗體（貨號(hào)分別為AF4113、AF6153、AF7021、S0001）均購(gòu)自江蘇親科生物研究中心有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性C57BL/6J小鼠，6～8周齡，體重（20±2）g，購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（粵）2022-0002。本實(shí)驗(yàn)方案由廣東藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物護(hù)理和使用倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號(hào)gdpulacspf2022056。小鼠在光照周期12 h、溫度（22±2）℃、相對(duì)濕度（50±10）%的環(huán)境下飼養(yǎng)。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

將小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型組，潤(rùn)腸顆粒低劑量組（5 g/kg）、潤(rùn)腸顆粒高劑量組（10 g/kg）和莫沙必利組（0.003 g/kg，陽(yáng)性對(duì)照），每組6 只。正常對(duì)照組小鼠灌胃純水，其余4組小鼠灌胃洛哌丁胺（0.004 g/kg）造模，每天9：00和18：00各灌胃1次，持續(xù)灌胃3 d后開(kāi)始藥物治療，期間造模條件不變[2]。每天上午洛哌丁胺造模結(jié)束1 h后，正常對(duì)照組和模型組小鼠灌胃純水，各藥物組小鼠灌胃相應(yīng)藥物，給藥劑量按照前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置，連續(xù)給藥7 d。

2.2 小鼠糞便含水量測(cè)定

各組小鼠于給藥第7天后，單獨(dú)放于代謝籠中，自由飲食飲水，收集3 h內(nèi)各組小鼠的糞便，以新鮮的糞便質(zhì)量作為糞便濕重；隨后將糞便放入60 ℃的烘箱中烘干12 h，以此時(shí)稱(chēng)定的糞便質(zhì)量作為糞便干重；計(jì)算糞便含水量：糞便含水量＝（糞便濕重－糞便干重）/糞便濕重×100%[3]。

2.3 小鼠腸道推進(jìn)率測(cè)定

將阿拉伯樹(shù)膠100 g倒入燒杯中，加入純水800 mL，加熱并攪拌，煮沸至透明后，加入活性炭粉末50 g，煮沸后冷卻至室溫，重復(fù)3次，加純水定容到1 000 mL，混勻，制得墨汁，備用。在第7天測(cè)定小鼠糞便含水量后，將小鼠禁食不禁水16 h，即第8天上午，正常對(duì)照組小鼠灌胃純水，其余4組小鼠灌胃洛哌丁胺（0.004 g/kg）。30 min后，潤(rùn)腸顆粒低、高劑量組小鼠分別按5、10 g/kg灌胃含潤(rùn)腸顆粒的墨汁，莫沙必利組小鼠按0.003 g/kg 灌胃含枸櫞酸莫沙必利片的墨汁，正常對(duì)照組和模型組小鼠灌胃純墨汁。25 min 后立即處死小鼠，取出腸道，并將腸系膜分離干凈，緩慢拉直腸道，以此時(shí)測(cè)量的腸道長(zhǎng)度作為“腸道總長(zhǎng)度”，以從幽門(mén)的位置到墨汁的前沿位置作為“墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度”，計(jì)算腸道推進(jìn)率：腸道推進(jìn)率＝墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度（cm）/腸道總長(zhǎng)度（cm）×100%[4]。

2.4 小鼠結(jié)腸和回腸組織結(jié)構(gòu)觀察

小鼠取材后，立即將其結(jié)腸和回腸組織沖洗干凈，取每只小鼠相同位置的一段結(jié)腸和回腸放入包埋盒，置于4%多聚甲醛中24 h，乙醇脫水、包埋、切片，將厚度為4 μm 的石蠟切片進(jìn)行HE 染色，中性樹(shù)脂封片后，置于顯微鏡下觀察小鼠結(jié)腸和回腸組織結(jié)構(gòu)變化。

2.5 小鼠結(jié)腸黏液分泌量觀察

取厚度為4 μm的小鼠結(jié)腸組織石蠟切片進(jìn)行阿爾新藍(lán)染色，然后置于顯微鏡下觀察小鼠結(jié)腸黏液分泌量（結(jié)腸切片中的藍(lán)色部分為小鼠結(jié)腸黏液）。

2.6 小鼠結(jié)腸組織中c-kit蛋白表達(dá)檢測(cè)

取厚度為4 μm的小鼠結(jié)腸組織石蠟切片，烤片、脫蠟、水化和抗原修復(fù)后，用5%山羊血清室溫封閉30 min；加入c-kit 抗體（稀釋比例為1∶500），于4 ℃孵育過(guò)夜；用0.02%磷酸鹽緩沖液洗3 次后，再加入二抗（稀釋比例為1∶500），室溫孵育1 h。用DAB 顯色，封片并于顯微鏡下拍照觀察，使用Image-Pro Plus軟件計(jì)算5個(gè)視野中c-kit陽(yáng)性染色的面積。

2.7 小鼠結(jié)腸組織中炎癥因子和促進(jìn)腸道運(yùn)動(dòng)相關(guān)因子mRNA表達(dá)檢測(cè)

取小鼠結(jié)腸組織適量，采用Trizol 法提取RNA，檢測(cè)樣品RNA的濃度，按照EZBioscience試劑盒說(shuō)明書(shū)將RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，用實(shí)時(shí)定量PCR 儀以GAPDH 為內(nèi)參，檢測(cè)炎癥因子[腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）、IL-1β、誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）]、促進(jìn)腸道運(yùn)動(dòng)相關(guān)因子[神經(jīng)型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase，nNOS）、平滑肌肌球蛋白輕鏈激酶（smooth muscle myosin light chain kinase，smMLCK）、5-羥色胺受體4（5-hydroxytryptamine 4 receptor，5-HT4R）、MUC2、SCF、c-kit]mRNA表達(dá)水平，采用2－ΔΔCt法進(jìn)行相對(duì)定量分析。引物由北京擎科生物科技股份有限公司合成，具體序列及產(chǎn)物長(zhǎng)度見(jiàn)表1。

表1 引物序列及產(chǎn)物長(zhǎng)度

2.8 小鼠結(jié)腸組織中MUC2和SCF蛋白表達(dá)檢測(cè)

取小鼠結(jié)腸組織適量，加入裂解液勻漿處理，使用BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒檢測(cè)上清液中蛋白濃度并制備蛋白樣品。取蛋白樣品20 μg，電泳、轉(zhuǎn)膜，用5%脫脂牛奶室溫封閉1 h，加入MUC2、SCF、GAPDH、Tubulin抗體（稀釋比例分別為1∶2 000、1∶1 000、1∶3 000、1∶3 000），于4 ℃過(guò)夜；用TBST 緩沖液洗3 次，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG（H+L）抗體（稀釋比例為1∶3 000），室溫孵育1 h；用ECL顯影，曝光并拍照保存。使用Image J 軟件進(jìn)行分析，以MUC2 蛋白與內(nèi)參蛋白Tubulin、SCF 蛋白與內(nèi)參蛋白GAPDH 的灰度值比值分別計(jì)算MUC2和SCF蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有數(shù)據(jù)均用±s表示，若方差齊，采用單因素方差分析和SNK-q檢驗(yàn)；若方差不齊，采用秩和檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 潤(rùn)腸顆粒對(duì)便秘小鼠糞便含水量和腸道推進(jìn)率的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠糞便質(zhì)地堅(jiān)硬干枯，糞便含水量和腸道推進(jìn)率均顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，潤(rùn)腸顆粒低、高劑量組和莫沙必利組小鼠糞便質(zhì)地蓬松，糞便含水量和腸道推進(jìn)率均顯著增加（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠糞便含水量和腸道推進(jìn)率的比較（±s，n＝6）

表2 各組小鼠糞便含水量和腸道推進(jìn)率的比較（±s，n＝6）

a：與正常對(duì)照組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.01。

組別正常對(duì)照組模型組潤(rùn)腸顆粒低劑量組潤(rùn)腸顆粒高劑量組莫沙必利組糞便含水量/%57.47±7.85 33.05±4.35a 55.81±7.56b 53.49±6.65b 52.03±4.50b腸道推進(jìn)率/%72.99±10.18 35.26±7.23a 71.59±9.72b 73.30±8.74b 71.31±16.77b

3.2 潤(rùn)腸顆粒對(duì)便秘小鼠結(jié)腸和回腸組織結(jié)構(gòu)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織出現(xiàn)損傷，炎癥細(xì)胞明顯浸潤(rùn)，杯狀細(xì)胞數(shù)量顯著減少，回腸絨毛結(jié)構(gòu)出現(xiàn)斷裂。與模型組比較，潤(rùn)腸顆粒低、高劑量組和莫沙必利組小鼠結(jié)腸組織損傷均減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)均減少，杯狀細(xì)胞數(shù)量均增加，回腸絨毛結(jié)構(gòu)斷裂均明顯改善。結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2（潤(rùn)腸顆粒低劑量組圖略）。

圖1 各組小鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)的顯微圖（HE染色）

圖2 各組小鼠回腸組織結(jié)構(gòu)的顯微圖（HE染色）

3.3 潤(rùn)腸顆粒對(duì)便秘小鼠結(jié)腸黏液分泌量的影響

正常對(duì)照組、模型組、潤(rùn)腸顆粒低劑量組、潤(rùn)腸顆粒高劑量組和莫沙必利組小鼠結(jié)腸黏液分泌量分別為0.10±0.01、0.04±0.02、0.07±0.01、0.09±0.01、0.06±0.01（n＝6）。與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠結(jié)腸黏液分泌量顯著減少（P＜0.01）。與模型組比較，潤(rùn)腸顆粒高劑量組小鼠結(jié)腸黏液分泌量顯著增加（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)圖3（潤(rùn)腸顆粒低劑量組圖略）。

圖3 各組小鼠結(jié)腸黏液的染色圖（阿爾新藍(lán)染色）

3.4 潤(rùn)腸顆粒對(duì)便秘小鼠結(jié)腸組織中c-kit蛋白表達(dá)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織中c-kit蛋白表達(dá)水平降低。與模型組比較，潤(rùn)腸顆粒低、高劑量組和莫沙必利組小鼠結(jié)腸組織中c-kit 蛋白表達(dá)水平均增加。結(jié)果見(jiàn)圖4（潤(rùn)腸顆粒低劑量組圖略）。

圖4 各組小鼠結(jié)腸組織中c-kit 蛋白表達(dá)的免疫組化圖

3.5 潤(rùn)腸顆粒對(duì)便秘小鼠結(jié)腸組織中炎癥因子mRNA表達(dá)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織中TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS mRNA 相對(duì)表達(dá)量均顯著增加（P＜0.01）。與模型組比較，潤(rùn)腸顆粒低、高劑量組和莫沙必利組小鼠結(jié)腸組織中TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著降低（P＜0.05 或P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠結(jié)腸組織中炎癥因子mRNA 表達(dá)水平比較（±s，n＝6）

表3 各組小鼠結(jié)腸組織中炎癥因子mRNA 表達(dá)水平比較（±s，n＝6）

a：與正常對(duì)照組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與模型組比較，P＜0.01。

iNOS 1.00±0.28 3.65±0.91a 1.21±0.62c 1.05±0.27c 0.95±0.29c組別正常對(duì)照組模型組潤(rùn)腸顆粒低劑量組潤(rùn)腸顆粒高劑量組莫沙必利組TNF-α 1.00±0.38 3.90±1.56a 2.01±0.35b 1.53±0.27c 2.14±0.63c IL-6 1.00±0.60 5.38±3.09a 1.79±1.34b 1.79±0.80b 1.49±0.69c IL-1β 1.00±0.42 3.74±1.66a 0.61±0.17c 1.79±0.72b 1.68±0.54c

3.6 潤(rùn)腸顆粒對(duì)便秘小鼠結(jié)腸組織中促進(jìn)腸道運(yùn)動(dòng)相關(guān)因子mRNA表達(dá)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織中nNOS、smMLCK、5-HT4R、MUC2、SCF、c-kit mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，潤(rùn)腸顆粒低、高劑量組和莫沙必利組小鼠結(jié)腸組織中nNOS（潤(rùn)腸顆粒低劑量組除外）、smMLCK、5-HT4R、MUC2、SCF（潤(rùn)腸顆粒低劑量組除外）、c-kit mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著增加（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 各組小鼠結(jié)腸組織中促進(jìn)腸道運(yùn)動(dòng)相關(guān)因子mRNA表達(dá)水平比較（±s，n＝6）

表4 各組小鼠結(jié)腸組織中促進(jìn)腸道運(yùn)動(dòng)相關(guān)因子mRNA表達(dá)水平比較（±s，n＝6）

a：與正常對(duì)照組比較，P＜0.01；b：與正常對(duì)照組比較，P＜0.05；c：與模型組比較，P＜0.05；d：與模型組比較，P＜0.01。

組別正常對(duì)照組模型組潤(rùn)腸顆粒低劑量組潤(rùn)腸顆粒高劑量組莫沙必利組nNOS 1.00±0.20 0.07±0.03a 0.71±0.36 0.90±0.33d 0.98±0.44d smMLCK 1.00±0.22 0.36±0.13a 0.91±0.27c 1.00±0.19c 1.03±0.14c 5-HT4R 1.00±0.23 0.12±0.09a 0.92±0.23d 1.05±0.23d 1.17±0.39d MUC2 1.00±0.29 0.43±0.17b 1.03±0.25c 1.06±0.37d 0.99±0.23c SCF 1.00±0.25 0.40±0.24b 0.80±0.10 1.06±0.29c 1.04±0.42c c-kit 1.00±0.31 0.16±0.08a 0.98±0.28d 1.23±0.34d 1.26±0.52d

3.7 潤(rùn)腸顆粒對(duì)便秘小鼠結(jié)腸組織中MUC2和SCF蛋白表達(dá)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織中MUC2和SCF 蛋白相對(duì)表達(dá)量均顯著降低（P＜0.05 或P＜0.01）。與模型組比較，潤(rùn)腸顆粒低、高劑量組和莫沙必利組小鼠結(jié)腸組織中MUC2 和SCF 蛋白相對(duì)表達(dá)量均顯著增加（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)圖5、圖6。

圖5 各組小鼠結(jié)腸組織中MUC2 和SCF 蛋白表達(dá)的電泳圖

圖6 各組小鼠結(jié)腸組織中MUC2 和SCF 蛋白表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果

4 討論

中醫(yī)認(rèn)為腸道傳導(dǎo)失司和腸道失于濡潤(rùn)都將導(dǎo)致便秘。洛哌丁胺是一類(lèi)μ阿片受體激動(dòng)劑，其能夠通過(guò)抑制腸道水分的分泌和結(jié)腸的蠕動(dòng)，從而延長(zhǎng)糞便排空時(shí)間，并延緩腸道的運(yùn)輸[5]，已被廣泛用于誘導(dǎo)便秘模型。莫沙必利能夠改善胃腸動(dòng)力，臨床上常用于治療便秘，本研究將其作為治療便秘的陽(yáng)性對(duì)照藥[6]。本研究結(jié)果顯示，潤(rùn)腸顆粒能改善便秘小鼠的糞便質(zhì)地，提高糞便含水量和腸道推進(jìn)率，且高劑量潤(rùn)腸顆粒的作用與莫沙必利相似。這表明潤(rùn)腸顆粒能夠促進(jìn)小鼠糞便軟化和腸道蠕動(dòng)，用于便秘小鼠的療效與莫沙必利相當(dāng)。

結(jié)腸外黏液層內(nèi)平坦的管腔表面能夠保護(hù)腸上皮細(xì)胞免受細(xì)菌侵害，抑制炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，防止腸道發(fā)生感染[7]。本研究結(jié)果顯示，潤(rùn)腸顆粒能夠減少小鼠結(jié)腸炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，降低炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS mRNA相對(duì)表達(dá)量。這表明潤(rùn)腸顆?？赏ㄟ^(guò)減輕便秘小鼠結(jié)腸炎癥，降低腸道通透性，而保護(hù)腸道屏障。結(jié)腸的黏液分泌是影響排便的重要因素。在腸黏膜中，MUC2是杯狀細(xì)胞分泌最多的黏液蛋白，其能夠使腸上皮細(xì)胞免受細(xì)菌攻擊，保護(hù)腸黏膜[8]。本研究結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織中MUC2 mRNA和蛋白表達(dá)均受到抑制，而潤(rùn)腸顆粒可阻止這種抑制作用，能使MUC2的表達(dá)恢復(fù)到正常水平。這提示潤(rùn)腸顆?？赡芡ㄟ^(guò)潤(rùn)滑腸黏膜，減少腸道刺激和摩擦，而促進(jìn)腸黏膜細(xì)胞產(chǎn)生更多的MUC2蛋白。

腸道傳輸收縮節(jié)律異常在便秘的發(fā)生機(jī)制中具有關(guān)鍵作用[9]。nNOS 缺陷的小鼠已被證明可表現(xiàn)出運(yùn)動(dòng)功能障礙和消化道功能、結(jié)腸功能紊亂[10]。smMLCK是控制平滑肌收縮起始的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶，降低腸道smMLCK活性，會(huì)導(dǎo)致以弱蠕動(dòng)為特征的腸道運(yùn)動(dòng)障礙[11]。5-羥色胺是一類(lèi)對(duì)腸道運(yùn)動(dòng)具有重要作用的神經(jīng)遞質(zhì)，其能參與消化道功能的調(diào)節(jié)，5-HT4R 能夠驅(qū)動(dòng)腸道對(duì)5-羥色胺產(chǎn)生蠕動(dòng)反應(yīng)[12]。本研究結(jié)果顯示，潤(rùn)腸顆粒能夠上調(diào)便秘小鼠結(jié)腸組織中nNOS、smMLCK、5-HT4R mRNA相對(duì)表達(dá)量，這表明潤(rùn)腸顆?？稍鰪?qiáng)腸道運(yùn)動(dòng)功能。Cajal 間質(zhì)細(xì)胞（interstitial cells of Cajal，ICC）作為胃腸道的起搏細(xì)胞，對(duì)于正常的腸道運(yùn)動(dòng)至關(guān)重要。SCF/c-kit信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)ICC的發(fā)展具有重要作用[13]。本研究結(jié)果顯示，潤(rùn)腸顆粒能夠上調(diào)便秘小鼠結(jié)腸組織中SCF 和c-kit mRNA 相對(duì)表達(dá)量。這提示潤(rùn)腸顆粒改善便秘的作用機(jī)制可能是通過(guò)激活SCF/c-kit信號(hào)通路，增加ICC 的表達(dá)，來(lái)促進(jìn)便秘小鼠腸道運(yùn)動(dòng)，改善腸道運(yùn)動(dòng)障礙。

綜上所述，潤(rùn)腸顆粒具有潤(rùn)腸通便的作用，能夠改善小鼠便秘，其潤(rùn)腸機(jī)制可能與促進(jìn)結(jié)腸黏液分泌和MUC2表達(dá)有關(guān)，其通便機(jī)制可能與激活SCF/c-kit信號(hào)通路有關(guān)。