老年腦卒中后認知障礙伴失眠患者的血清代謝組學

朱明錦 張永樂 張軍芳 方誠冰 張永華

(浙江省立同德醫(yī)院 1康復醫(yī)學科,浙江 杭州 310012;2檢驗科;3杭州市中醫(yī)院)

我國腦卒中的發(fā)病率高,尤其易在老年人群中發(fā)生,有些患者在腦卒中事件發(fā)生中除了肢體偏癱,還可能繼發(fā)認知功能障礙和睡眠障礙。高齡、多種血管危險因素、關(guān)鍵部位梗死、腦局部代謝與血流動力學改變等多種機制可能參與腦卒中后認知障礙、睡眠障礙的發(fā)病過程〔1〕。代謝組學是繼基因組學、轉(zhuǎn)錄組學、蛋白質(zhì)組學后一個重要的組學,可以用來研究生物或細胞中的內(nèi)源性代謝物的變化規(guī)律,對特定生物樣品中的小分子代謝物進行定量評估,從而在代謝特征和疾病表型之間建立聯(lián)系〔2〕,分析導致疾病發(fā)生發(fā)展的機制,其已經(jīng)被廣泛應用于生物、醫(yī)藥、環(huán)境等領(lǐng)域〔3〕。在過去幾年,代謝組學在預測疾病風險、早期診斷及評估、生物標志及機制等方面顯示出了其優(yōu)勢〔4～7〕。腦卒中的發(fā)生存在腦血管和腦實質(zhì)的損傷,其損傷過程可能由炎癥反應、脂質(zhì)代謝紊亂、糖代謝紊亂引起,針對腦卒中疾病的研究,代謝組學在生物標記方面更有優(yōu)勢,因為其能夠檢測易穿過血腦屏障的小分子代謝物〔8〕。有學者通過代謝組學分析腦卒中患者與健康個體之間的血漿和尿液代謝物,發(fā)現(xiàn)兩組存在明顯差異,這些差異代謝產(chǎn)物與無氧糖酵解、高同型半胱氨酸血癥有關(guān)〔9〕。有學者研究了腦卒中后認知障礙患者和腦卒中非認知障礙患者血清代謝組學差異,找出了3種血清代謝產(chǎn)物(谷氨酰胺、犬尿氨酸和溶血卵磷脂)作為腦卒中后認知障礙的候選生物標志物〔10〕。有研究通過代謝組學研究發(fā)現(xiàn),睡眠限制患者脂質(zhì)代謝水平發(fā)生顯著變化〔11〕,推測出線粒體脂肪酸氧化受到急性睡眠限制的影響〔12〕。因此,本研究擬通過血清代謝組學方法探討缺血性腦卒中后認知障礙伴失眠患者與單純老年腦卒中患者存在的差異代謝物表達,從而進一步發(fā)現(xiàn)其可能存在的信號通路,為藥物干預靶點提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1研究對象 于2018年8月至2020年12月就診于浙江省立同德醫(yī)院康復醫(yī)學科門診及住院患者18例〔9例腦卒中后認知障礙伴失眠為T組,9例單純腦卒中(C)組〕。收集年齡、性別、病程、合并疾病匹配的兩組患者。該項目通過醫(yī)院倫理會員會審批。

1.2納入與排除標準 觀察組納入標準:(1) 符合腦卒中的診斷:參考2005年《中國腦血管病防治指南》〔13〕腦卒中診斷標準,經(jīng)頭顱CT或磁共振成像(MRI)確診的腦梗死患者;(2) 符合腦卒中后認知功能障礙的診斷:診斷標準參考2017年《卒中后認知障礙管理專家共識》〔14〕:腦卒中發(fā)生6個月內(nèi),認知篩查中執(zhí)行功能/注意力、記憶、語言能力、視空間能力4個領(lǐng)域至少1個認知域受損。Hachinski缺血指數(shù)量表總分≥7分;(3) 符合失眠診斷:參考《精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊(第五版)》〔15〕(DSM-5)的失眠診斷部分和2017年《中國成人失眠癥診斷與治療指南》〔16〕:包括入睡困難、睡眠維持困難、比期望的起床時間更早醒來、在適當?shù)臅r間不愿意上床睡覺,包括急性或短期失眠;(4) 年齡60～85歲;(5) 意識清楚,能自我表達,無明顯語言理解障礙,能完成大部分量表測評;(6) 患者或其法定委托人知情同意。觀察組排除標準:(1) 腦卒中后伴有意識不清或病情嚴重以致不能配合相關(guān)檢查的患者;(2) 嚴重的精神障礙或既往有精神疾病病史;(3) 伴有完全失語、嚴重認知功能障礙等不能配合檢查的患者;(4) 合并有嚴重的其他軀體疾病不能配合檢查或評估的患者;(5) 發(fā)病前已經(jīng)在治療睡眠障礙、認知障礙(例如阿爾茨海默病)的患者。對照組納入標準:符合腦梗死診斷,腦卒中事件發(fā)生在6個月內(nèi),但不伴有認知障礙和睡眠障礙者;排除標準同觀察組。

1.3研究方法 選取年齡、性別、病程、合并疾病匹配患者,-80 ℃保存血清樣本,采用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)進行血清非靶向代謝組學研究。

1.3.1血清標本采集 患者于夜間10點后禁食,保持情緒穩(wěn)定,于晨起空腹采集肘正中靜脈血5 ml,送至醫(yī)院生物樣本室進行標本離心分離操作,3 000 r/min離心5 min,收集上清液放入-80 ℃深低溫冰箱凍存?zhèn)浯x組學檢測。

1.3.2代謝組學檢測 將-80 ℃下保存的樣本取出,室溫解凍,吸取100 μl血清與300 μl的甲醇-乙腈混合震蕩,4 ℃下離心,取上清液,-80 ℃下保存,待進行LC-MS分析。分析儀器為Nexera UPLC超高效液相儀(日本島津)串聯(lián)QE高分辨質(zhì)譜儀(美國賽默飛世爾科技)組成的液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)。色譜條件:色譜柱為ACQUITY UPLC HSS T3 (100 mm×2.1 mm,1.8 μm;美國沃特世);流動相:A-水(含0.1%甲酸),B-乙腈(含0.1%甲酸);流速:0.35 ml/min;柱溫:45 ℃。洗脫梯度見表1。質(zhì)譜條件:電噴霧,樣品質(zhì)譜信號采集分別采用正負離子掃描模式。掃描范圍質(zhì)荷比(m/z):125-1000;毛細管溫度(℃):320;分辨率(全掃描):70 000;霧化氣壓(V):正離子3 500、負離子-3 000;鞘氣流速(Arb):正離子40、負離子35;輔助氣流速(Arb):正離子10、負離子8。

表1 流動相洗脫梯度(%)

1.3.3基線資料比較 血清代謝組學結(jié)果發(fā)現(xiàn)每組各有一個樣本分析結(jié)果離群嚴重,影響模型穩(wěn)定性,經(jīng)分析核查仍無法明確離群原因,故剔除該兩個樣本,因此,T組和C組每組各8例納入代謝組學分析。兩組年齡、性別、病程等一般情況無統(tǒng)計學差異(P>0.05),見表2。

表2 兩組基線資料比較〔n(%),n=8〕

1.4數(shù)據(jù)處理 UNIFI1.8.1軟件采集原始數(shù)據(jù);原始數(shù)據(jù)經(jīng)代謝組學處理軟件Progenesis QI v2.3軟件進行基線過濾、峰識別、積分、保留時間校正、峰對齊和歸一化,其主要參數(shù)為:precursor tolerance:5 ppm;product tolerance:10 ppm;product ion threshold:5%。化合物的鑒定基于精確質(zhì)量數(shù)、二級碎片及同位素分布,通過使用 The Human Metabolome Database(HMDB)和Lipidmaps(v2.3)及Metabolite Link(Metlin)等數(shù)據(jù)庫進行定性。對提取到的數(shù)據(jù),刪除組內(nèi)缺失值均(0值)>50%的離子峰,并將0值以最小值的一半替換,并根據(jù)化合物定性結(jié)果打分,對定性得到的化合物進行篩選,篩選標準為30分,30分以下視為定性結(jié)果不準確并刪除。最后將正負離子數(shù)據(jù)合并成一個數(shù)據(jù)矩陣表,進行分析。

1.5統(tǒng)計學方法 采用SPSS24.0軟件進行t檢驗及χ2檢驗,R語言ropls包進行多元統(tǒng)計學分析與單變量統(tǒng)計學分析。

1.5.1多元統(tǒng)計分析 運用主成分分析(PCA)、偏最小二乘法-判別分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法判別分析(OPLS-DA)進行分析,根據(jù)OPLS-DA模型得到變量權(quán)重(VIP)值,其中VIP>1為潛在的生物標志物。將 VIP值>1且P<0.05 的代謝物定義為顯著差異代謝物。

1.5.2單變量分析 包括單變量的描述和統(tǒng)計推斷兩個方面,用t檢驗和變異倍數(shù)分析比較各組之間的差異代謝產(chǎn)物。

1.5.3代謝通路富集分析 應用 KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)數(shù)據(jù)庫(https://www.kegg.jp/)進行通路富集分析,得到與差異代謝物相關(guān)的重要通路。

2 結(jié) 果

2.1質(zhì)量控制 質(zhì)控樣本(QC)的PCA,經(jīng)7次循環(huán)交叉驗證得到的PCA模型圖,QC樣本緊密聚集在一起,表明此實驗穩(wěn)定性和重復性較好,見圖1。

圖1 QC樣本PCA

2.2兩組PCA比較 PCA是一種非監(jiān)督分析,對代謝物進行PCA,反映樣本組間和組內(nèi)的變異度,觀察樣本間的總體分布趨勢。腦卒中T組和C組的PCA模型顯示兩組樣本存在分離趨勢(R2X=0.515),每個點代表一個樣本。PCA表明兩組樣本之間存在代謝差異,見圖2。

圖2 兩組PCA比較

2.3兩組PLS-DA比較 PLS-DA是一種有監(jiān)督的多元統(tǒng)計方法,驗證PCA模型可靠性。PLS-DA可使組間區(qū)分最大化。兩組樣本間存在顯著代謝差異(模型參數(shù)具有3個主成成分,R2X=0.412,R2Y=0.997,Q2=0.729),參數(shù)接近1 表示模型擬合數(shù)據(jù)效果好,故此模型預測能力較好,可以利用該數(shù)據(jù)進行分析,見圖3。

圖3 兩組PLS-DA比較

2.4OPLS-DA OPLS-DA是在PLS-DA基礎(chǔ)上進行的衍生算法,提高了模型的解析能力和有效性,最大化地凸顯模型內(nèi)部不同組別間的差異。OPLS-DA分析結(jié)果得到1個主成成分和2個正交成分,參數(shù)R2X=0.412,R2Y=0.997,Q2=0.806,提示兩組間存在差異,見圖4。為防止模型過擬合,采用7次循環(huán)交互驗證和200次響應排序檢驗的方法來考察模型質(zhì)量,結(jié)果顯示該模型穩(wěn)定性好(R2=0.92,Q2=-0.289),見圖5。

圖4 兩組OPLS-DA比較

圖5 200次響應排序檢驗

2.5單變量統(tǒng)計分析 利用火山圖對P值和差異倍數(shù)(FC)值進行可視化,篩選出所有差異代謝物,如圖6所示,其中紅色圓點代表在顯著上調(diào)的差異代謝產(chǎn)物,藍色圓點代表顯著下調(diào)的差異代謝物,灰色點代表不顯著的差異代謝產(chǎn)物。

圖6 兩組差異代謝物火山圖

2.6兩組差異的代謝標志物及其代謝通路 將兩組共篩選出差異代謝產(chǎn)物606種,因兩組差異代謝物多,故增加差異倍數(shù)以做進一步篩選,選擇FC>1.2和FC<0.83,以篩選出差異更顯著的代謝產(chǎn)物,得到差異代謝產(chǎn)物394種。再根據(jù)KEGG數(shù)據(jù)庫對兩組差異代謝產(chǎn)物進行富集通路分析,一共篩選出37種富集到通路的差異代謝物,其中有11種代謝產(chǎn)物為工業(yè)或食品添加劑和藥物成分,予排除,故有26種差異代謝物,見表3。

表3 兩組差異性代謝產(chǎn)物比較

3 討 論

越來越多的研究表明,心腦血管疾病的發(fā)生與代謝紊亂密切相關(guān),代謝組學已成為心腦血管疾病研究的有力工具,生物標志物的發(fā)現(xiàn)有助于心腦血管疾病的早期診斷和風險預測〔17,18〕。

氨基酸為蛋白質(zhì)最基本的組成單位,參與體內(nèi)多種活性物質(zhì)的合成與代謝,氨基酸是人體內(nèi)某些激素和低分子量含氮物質(zhì)合成的關(guān)鍵前體,具有重大的生物學意義。在正常生理狀態(tài)下,人體內(nèi)氨基酸處于動態(tài)平衡,病理狀態(tài)時會出現(xiàn)失衡〔19〕。研究表明,老年癡呆患者大腦中的氨基酸水平和相關(guān)化合物的代謝狀態(tài)發(fā)生異常,使突觸傳遞功能降低,而造成認知功能損害和記憶力下降〔20〕。本研究顯示,兩組與氨基酸代謝有關(guān)的代謝產(chǎn)物有半胱氨酸硫酸酯和左旋精氨酸。半胱氨酸硫酸酯在腦卒中后認知障礙伴失眠組中表達增高,半胱氨酸硫酸酯參與半胱氨酸和蛋氨酸代謝,其含量增高與腦損傷和精神發(fā)育遲滯有關(guān)〔21〕。研究證實同型半胱氨酸升高與機體衰老相關(guān),是心血管病和神經(jīng)退行性疾病的危險因素〔22〕,且與血管性癡呆等認知功能障礙有關(guān)〔23,24〕。因此,本研究受試者半胱氨酸硫酸酯含量升高導致認知、睡眠障礙是因為直接作用,還是因為間接存在和同型半胱氨酸之間的聯(lián)系而介導神經(jīng)元細胞損傷值得研究。左旋精氨酸在一氧化氮(NO)合酶(NOS)催化下產(chǎn)生NO,即左旋精氨酸是NO合成的前體,NO在大腦中可作為神經(jīng)遞質(zhì),參與疼痛及認知記憶等功能〔25〕。非靶向代謝組學研究表明,左旋精氨酸/NO代謝途徑是AD病變的途徑之一〔26〕。血管內(nèi)皮NO缺乏會加速淀粉樣β肽形成,降低突觸可塑性,激活小膠質(zhì)細胞和引發(fā)神經(jīng)炎性反應而導致神經(jīng)退行性病變〔27〕。本研究發(fā)現(xiàn),單純老年腦卒中患者代謝產(chǎn)物中精氨酸含量減少,可能由于單純腦卒中患者大腦中誘導型iNOS活性增強而增加了精氨酸的利用率。

脂類代謝是代謝組學的一個重要分支,是動植物代謝中的第一大類,參與生物體物質(zhì)運輸、信息傳導、能量傳遞及代謝調(diào)控等重要功能。許多疾病與脂代謝異常有關(guān),如代謝綜合征、神經(jīng)退行性疾病、癌癥等〔28〕。對真核生物來說,至少有4種脂代謝組學網(wǎng)絡(luò)在大多數(shù)脂類中是必不可少的,包括鞘脂代謝、甘油磷脂代謝、甘油脂類代謝和脂肪酸代謝〔29〕。

人體中最重要的兩種多不飽和酸是二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA),已被證實對炎癥、心腦血管疾病有積極作用〔30〕,有臨床研究發(fā)現(xiàn)其能改善輕度認知障礙患者的大腦區(qū)域灌注,延緩癡呆進展〔31〕。二十二碳二烯酸也是一種多不飽和脂肪酸,但是本研究結(jié)果顯示腦卒中后認知障礙伴失眠患者血清代謝產(chǎn)物中二十二碳二烯酸表達增高,不能解釋其優(yōu)勢,可能對認知和睡眠方面起積極意義的主要是DHA和EPA,故需進一步研究。類花生酸(8-HETE),又稱類二十烷酸,是由含二十個碳的多不飽和脂肪酸(花生四烯酸)衍生而來的具有生物活性的脂類物質(zhì),可抑制炎癥反應〔32〕。本研究顯示,類花生酸在腦卒中后認知障礙伴失眠組的表達高,可能是因為腦卒中后認知、失眠障礙者存在炎性狀態(tài),類花生酸聚集而起到調(diào)節(jié)炎癥反應的作用。6-酮-前列腺素F1α是一組有20個碳原子組成的不飽和脂肪酸,是花生四烯酸代謝過程中的重要成分,與血栓素B2一起參與血栓形成過程,腦梗死患者血栓素B2/前列腺素F1α比例升高,與其體內(nèi)脂質(zhì)紊亂有關(guān)〔33〕。和其他兩種不飽和脂肪酸一樣,本研究顯示,6-酮-前列腺素F1α含量在腦卒中后認知障礙伴失眠組高,因此不飽和脂肪酸可能并未在腦卒中后認知障礙、失眠障礙起到保護作用。二十二烷酸和棕櫚酸是飽和脂肪酸,飽和脂肪酸的過多攝入,如棕櫚油和棕櫚酸會導致肥胖、糖尿病、心血管疾病和癌癥〔34,35〕。高熱量、高飽和脂肪酸飲食會顯著增加老年AD風險〔36〕。本研究顯示,二十二烷酸和棕櫚酸兩種飽和脂肪酸在腦卒中后認知障礙伴失眠組表達上調(diào),飽和脂肪酸含量過高可能不利于腦卒中患者認知和睡眠狀態(tài)。

鞘脂類包含鞘磷脂、神經(jīng)酰胺類、腦苷類等,在細胞生物反應過程中起關(guān)鍵作用,對維持細胞膜的完整性及在信號傳遞通路中有重要意義〔37〕。神經(jīng)酰胺是參與動脈粥樣硬化的病理生理過程中關(guān)鍵的活性信號分子,介導細胞脂毒性反應,破壞內(nèi)皮細胞功能,參與激活血小板引起血栓,可預測不良心血管事件〔38〕,神經(jīng)酰胺還參與多種代謝綜合征的發(fā)生,如脂肪肝〔39〕、肥胖〔40〕、胰島素抵抗〔41〕。神經(jīng)鞘氨醇磷酸膽堿是高密度脂蛋白的重要組成部分,對調(diào)節(jié)心臟和血管的病理過程中具有一定作用〔42〕。神經(jīng)鞘氨醇可被鞘氨醇激酶催化生成1-磷酸神經(jīng)鞘氨醇(S1P),S1P通路在減輕腦神經(jīng)炎癥反應、調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細胞功能中發(fā)揮作用〔43〕,二氫神經(jīng)鞘氨醇是神經(jīng)鞘氨醇的前體。S1P和神經(jīng)酰胺在參與神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)元的生存和死亡調(diào)控過程中,兩者功能在多方面互相拮抗,本研究代謝組學結(jié)果顯示,腦卒中后認知障礙伴失眠組的神經(jīng)酰胺表達低,S1P相關(guān)的二氫神經(jīng)鞘氨醇表達高,這與相關(guān)研究〔44〕關(guān)于癡呆和衰老中鞘脂表達趨勢的描述相左,故需要研究。

常見的甘油磷脂有磷脂酰膽堿(PC),磷脂酰乙醇胺(PE),磷脂酸(PA),磷脂酰絲氨酸(PS),磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰甘油(PG)和雙磷脂酰甘油(DPG,又稱心磷脂)〔45〕。其中PC和PE是細胞膜中最豐富的脂質(zhì),占總磷脂種類的一半以上,在維持細胞膜結(jié)構(gòu)和功能過程中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)女性睡眠剝奪期間的血漿代謝產(chǎn)物變化中,減少最顯著的是PC〔46〕。血漿PC的基線水平越高,老年人的認知表現(xiàn)下降越慢〔47〕。PE是哺乳動物發(fā)育所需的多功能磷脂,影響許多膜蛋白的穩(wěn)定性和功能,其水平升高可增加γ-分泌酶活性和Aβ的產(chǎn)生,可能導致AD發(fā)生,但具體調(diào)節(jié)機制尚不清楚〔48〕。本研究血清代謝組學結(jié)果顯示,6種PC在認知障礙伴失眠組下調(diào),與文獻關(guān)于認知障礙的研究一致〔49〕,PC俗稱卵磷脂,對人體有益,腦卒中后伴有認知和睡眠障礙者,可能與PC水平降低有關(guān)。其中1種PC〔22:4(7Z,10Z,13Z,16Z)/22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)〕在不伴有認知睡眠障礙者含量上調(diào),其原因尚不能解釋,可能因為本研究對象包含失眠癥狀,有代謝組學研究發(fā)現(xiàn)睡眠剝奪患者主要表現(xiàn)為PC含量上調(diào)為主〔50〕,故需要研究。本研究代謝組學結(jié)果顯示腦卒中后認知障礙伴失眠組的1種PE表達升高,而另1種表達下降,有研究調(diào)查了腦脊液PE濃度與認知障礙程度的相關(guān)性,無論縱向還是橫向比較,均未發(fā)現(xiàn)有顯著相關(guān)性〔51〕,因此,不能認為PE是腦卒中后認知障礙的危險因素。

本研究結(jié)果顯示,兩組還有5種差異代謝產(chǎn)物:次黃嘌呤、尿苷二磷酸葡萄糖、異丙腎上腺素、睪酮和左旋肉堿。次黃嘌呤是核苷代謝產(chǎn)物,在缺血缺氧狀態(tài)下可誘導三磷酸腺苷(ATP)分解產(chǎn)生肌苷和次黃嘌呤,如心肌缺血缺氧發(fā)作時,ATP大量消耗分解供能,次黃嘌呤為小分子易物質(zhì)擴散入血,出現(xiàn)急性期次黃嘌呤濃度升高〔52〕。研究表明,缺血缺氧的過程中ATP代謝在所有細胞中都普遍存在,不僅限于腦缺血、心臟缺血,ATP的代謝產(chǎn)物腺苷、肌苷和次黃嘌呤被釋放到中樞和外周血液、腦脊液和間質(zhì)液中,可作為體內(nèi)缺血的生物標志物進行檢測和定量〔53〕。但也有研究認為缺血性腦卒中患者急性期血清次黃嘌呤水平較正常組水平降低〔54〕。本研究提示,腦卒中后認知障礙伴失眠組較單純腦卒中組大腦中缺血缺氧程度可能更嚴重。

有研究表明,尿苷二磷酸葡萄糖能改善因缺血誘導的大鼠腦白質(zhì)病變,可促進神經(jīng)細胞的增殖和分化成熟,并促進軸突生長〔55〕。本研究發(fā)現(xiàn),腦卒中后認知障礙伴失眠組尿苷二磷酸葡萄糖含量水平顯著低于對照組,可能因為認知障礙與腦白質(zhì)病變有關(guān)〔56〕,而尿苷二磷酸葡萄糖缺乏可能加重血管性認知障礙程度。睪酮是由男性睪丸或女性卵巢分泌的一種類固醇激素,大型的前瞻性隊列研究發(fā)現(xiàn)較低的循環(huán)睪酮預示著較高心血管事件及腦卒中發(fā)生率〔57〕。學者發(fā)現(xiàn),睪酮水平下降可能是老年認知功能障礙的獨立危險因素〔58〕,但Kaufman等〔59〕的系統(tǒng)綜述研究表明睪酮水平對老年男性認知功能下降的影響有限。睪酮水平降低與睡眠呼吸暫停有關(guān)〔60〕,但失眠與睪酮水平無關(guān)〔61〕。本研究顯示,腦卒中后認知障礙伴失眠組睪酮偏高,可能與樣本量不足有關(guān),不能認為睪酮在兩組的差異有臨床意義。左旋肉堿是脂肪酸β-氧化代謝過程中重要的物質(zhì),實驗研究證實左旋肉堿及其乙酰化衍生物在腦損傷模型中能改善能量代謝,減少氧化應激,起到神經(jīng)保護作用〔62〕。Chen等〔63〕的系統(tǒng)綜述提示,暫不認可左旋肉堿對健康成人認知增強的有效性或安全性。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),左旋肉堿含量在腦卒中后認知障礙伴失眠患者組升高,可能的原因是在腦卒中后失眠患者能量消耗偏高,需要更多的左旋肉堿參與脂肪酸代謝,但仍需要研究證實。異丙腎上腺素是一種β-腎上腺素能受體激動劑,能夠通過炎癥反應、氧化應激,誘發(fā)凋亡自噬作用于心肌組織,可以引起心肌損傷,常被用來做誘發(fā)動物心肌損傷的模型〔64〕,本研究兩組均未使用異丙腎上腺素藥物,其差異是否由人體自身分泌所致尚不可知,故暫不能解釋兩組差異的原因。

本研究存在不足之處,首先在于樣本量不足,老年患者合并基礎(chǔ)疾病多,體質(zhì)不盡相同,且腦卒中病情輕重、病程長短等因素可能對代謝組學研究結(jié)果產(chǎn)生偏倚。有研究提出,在涉及腦卒中患者的代謝分析中,由于疾病嚴重程度、發(fā)病時間、種族、飲食、年齡和其他患者特征的限制,其代謝物上調(diào)或下調(diào)模式存在差異,此外,詳細的病因評估對于標準化也是必要的〔65〕。本文只研究了腦卒中后認知障礙組和單純腦卒中組,還欠缺一個健康對照組,樣本量偏少可能會導致研究結(jié)果偏倚。腦卒中患者常伴有多種慢性疾病,如糖尿病、冠心病、高脂血癥等,可能會導致基線不均衡,故本研究采用匹配對照設(shè)計,使兩組基線盡量均衡,需要進一步研究來證實。