血清miR-505和miR-15與潰瘍性結腸炎內鏡下活動度的關系

胡何英，翟慧敏，劉亞楠

（青島市城陽區人民醫院 消化內科，山東 青島 266109）

潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種腸道黏膜損傷的慢性炎性疾病，病程較長，且易反復發作，隨著病程的延長，可增加癌變風險，故早期評估病情對患者具有重要意義[1]。內鏡檢查是臨床評估UC患者病情的重要手段，不同分級的內鏡下活動度存在一定差異，是臨床診斷UC 病情的重要參考指標[2]。但是，結腸鏡檢查會增加患者痛苦和經濟負擔，且部分患者有結腸鏡檢查禁忌證等，內鏡檢查應用受限[3]。尋找一種簡便、安全和有效的血清學指標，來評估患者內鏡活動度，具有重要意義[4]。有研究[5]表明，miRNA 與炎性腸病密切相關，血清miR-505 在UC患者黏膜組織中異常表達，但關于miR-505與UC患者內鏡下活動度關系的研究較少。UC 作為一種炎性疾病，炎癥反應在其發病和發展中起到重要作用，而miR-15與炎癥反應的發生和發展關系密切。因此，推測miR-15與UC的發生和發展有關，但關于miR-15與病情嚴重程度的關系，研究報道較少[6]。基于此，本研究通過檢測患者血清miR-505 和miR-15 水平變化情況，分析其表達與UC 患者內鏡活動度的關系，旨在為UC患者病情評估提供指導依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選 取本院2020 年8 月—2022 年5 月收治的98 例UC 患者作為觀察組，選取同期80 例腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）患者作為對照組，回顧性分析患者的臨床資料。兩組患者性別、年齡和體重指數（body mass index，BMI）等一般資料比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。

表1 兩組患者一般資料比較Table 1 Comparison of general data between the two groups

納入標準：1）符合《中國炎癥性腸病組織病理診斷共識意見》[7]中UC診斷標準，IBS參考2016年羅馬Ⅳ標準[8]；2）年齡＞18歲；3）臨床資料和內鏡資料完整；4）患者知情且簽署知情同意書。排除標準：1）合并惡性腫瘤、感染性疾病和血液系統疾病等；2）合并其他腸道疾病；3）合并嚴重肝、腎功能異常者；4）合并嚴重外傷或既往有手術史者；5）近3個月內服用過影響研究的相關藥物者。

1.2 方法

取患者空腹靜脈血約5 mL，以4 000 r/min 離心10 min，取上清液，使用美國Thermo 公司的TRIzol試劑盒（批號：1405266），提取總RNA，使用美國Thermo 公司TaqManTMMicroRNA 逆轉錄試劑盒（批號：1405137）進行逆轉錄，獲得cDNA，PCR擴增。反應條件為：95℃ 60 s 預變性，95℃ 15 s，15 s 退火，72℃ 45 s，共40個循環。miR-505 正向引物5’-CTACGTGGGTCACCCCCTA-3’，反向引物5’-CCAAAGGCGACCTCGTAG-3’。miR-15 上游引物5’-AAGGAGGGCAAGAACCACTC-3’，下游引物5’-AGCACACAGGCAAAGAAGTTG-3’。GAPDH上游引物5’-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3’，下游引物5’-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3’。以GAPDH 為內參，采用2-ΔΔCT計算miR-505 和miR-15的相對表達量。

1.3 觀察指標

1.3.1 內鏡活動度 采用改良Mayo評分進行評估。評分標準為：正常或無病變，改良Mayo評分為0分；紅斑、血管紋理較少和輕度易脆表示輕度病變，改良Mayo評分為1分；紅斑、血管紋理模糊不清和糜爛為中度病變，改良Mayo 評分為2 分；出現自發性出血和潰瘍為重度病變，改良Mayo 評分為3 分。臨床分期定義標準：改良Mayo 評分0 和1 分定義為愈合期，≥ 2 分定義為活動期。98 例UC 患者，愈合期53 例，活動期45例。

1.3.2 病變分型 參照蒙特利爾分型標準，分為E1 型34 例，E2 型36 例，E3 型28 例。分型標準為：病變僅位于直腸為E1 型；病變累及左半結腸和脾曲為E2型；病變累及脾曲和全結腸為E3型。

1.3.3 血清miR-505 和miR-15 水平 比較UC 患者和IBS患者、不同臨床分期UC患者、不同分型UC患者血清miR-505 和miR-15 水平，并繪制受試者操作特征曲線（receiver operator characteristic curve，ROC curve），探討血清miR-505和miR-15對UC患者內鏡活動度的評估價值。

1.4 統計學方法

應用SPSS 25.0 軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組比較采用方差分析；計數資料用例（%）表示，采用χ2檢驗；兩變量相關性分析采取Pearson直線分析法；根據血清miR-505 和miR-15 水平，繪制ROC curve，以探討其對UC患者內鏡活動度的評估價值。P＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者血清miR-505和miR-15水平比較

觀察組血清miR-505 水平低于對照組，miR-15水平高于對照組，差異均有統計學意義（P＜ 0.05）。見表2。

表2 兩組患者血清miR-505和miR-15水平比較（）Table 2 Comparison of serum miR-505 and miR-15 levels between the two groups（）

表2 兩組患者血清miR-505和miR-15水平比較（）Table 2 Comparison of serum miR-505 and miR-15 levels between the two groups（）

2.2 不同臨床分期的UC患者血清miR-505和miR-15水平比較

活動期UC 患者血清miR-505 水平低于愈合期患者，血清miR-15 水平高于愈合期患者（P＜ 0.05）。見表3。

表3 不同臨床分期UC患者血清miR-505和miR-15水平比較（）Table 3 Comparison of serum miR-505 and miR-15 levels in UC patients with different clinical stages（）

表3 不同臨床分期UC患者血清miR-505和miR-15水平比較（）Table 3 Comparison of serum miR-505 and miR-15 levels in UC patients with different clinical stages（）

2.3 不同分型UC 患者血清miR-505、miR-15 水平和改良Mayo評分比較

E3 型UC患者血清miR-505 水平低 于E2 型和E1型患者，血清miR-15 水平高于E2 型和E1 型患者，改良Mayo 評分高于E2 型和E1 型患者，差異均有統計學意義（P＜ 0.05）。見表4。

表4 不同分型UC患者血清miR-505、miR-15水平和改良Mayo評分比較（）Table 4 Comparison of serum miR-505，miR-15 levels and modified Mayo score in UC patients with different types（）

表4 不同分型UC患者血清miR-505、miR-15水平和改良Mayo評分比較（）Table 4 Comparison of serum miR-505，miR-15 levels and modified Mayo score in UC patients with different types（）

注：1）與E1型比較，差異有統計學意義（P ＜ 0.05）；2）與E2型比較，差異有統計學意義（P ＜ 0.05）。

2.4 UC 患者血清miR-505 和miR-15 水平與改良Mayo評分的關系

Pearson分析結果顯示，血清miR-505與改良Mayo評分呈負相關（r=-0.51，P＜ 0.05），血清miR-15與改良Mayo評分呈正相關（r=0.54，P＜ 0.05）。

2.5 血清miR-505和miR-15水平評估UC患者內鏡活動度的價值

ROC curve 結果顯示，miR-505 截斷值為0.93，評估UC 患者內鏡活動度的曲線下面積（area under the curve，AUC）為0.67（95%CI：0.659～0.785），敏感度和特異度分別為73.24%和68.55%；miR-15截斷值為0.85，評估UC 患者內鏡活動度的AUC 為0.69（95%CI：0.672～0.814），敏感度和特異度分別為76.38%和69.72%；兩者聯合評估UC患者內鏡活動度的AUC 為0.82（95%CI：0.809～0.912），敏感度和特異度分別為84.56%和68.49%。見圖1。

圖1 血清miR-505和miR-15水平評估UC患者內鏡活動度的ROC curveFig.1 ROC curve of serum miR-505 and miR-15 levels to assess endoscopic mobility in UC patients

2.6 典型病例

2.6.1 典型病例1 0分，健康人。見圖2。

圖2 典型病例1Fig.2 Typical case 1

2.6.2 典型病例2 患者 男，43 歲，改良Mayo 評分為1分，輕度潰瘍性結腸炎。見圖3。

圖3 典型病例2Fig.3 Typical case 2

2.6.3 典型病例3 患者 女，45 歲，改良Mayo 評分為1分，輕度潰瘍性結腸炎。見圖4。

圖4 典型病例3Fig.4 Typical case 3

2.6.4 典型病例4 患者 男，50 歲，改良Mayo 評分為2分，中度潰瘍性結腸炎。見圖5。

圖5 典型病例4Fig.5 Typical case 4

2.6.5 典型病例5 患者 男，46 歲，改良Mayo 評分為2分，中度潰瘍性結腸炎。見圖6。

圖6 典型病例5Fig.6 Typical case 5

2.6.6 典型病例6 患者 女，41 歲，改良Mayo 評分為3分，重度潰瘍性結腸炎。見圖7。

圖7 典型病例6Fig.7 Typical case 6

2.6.7 典型病例7 患者 女，43 歲，改良Mayo 評分為3分，重度潰瘍性結腸炎。見圖8。

圖8 典型病例7Fig.8 Typical case 7

3 討論

3.1 UC的臨床診斷

UC 一旦發生惡變，惡性程度較高，早期可發生遠處轉移。因此，早期了解UC 的進展情況，對于病情評估及對癥治療尤為重要[9]。內鏡檢查時，通過觀察腸黏膜情況進行病情評估，UC 的內鏡下病理特征為彌漫性縱行表淺潰瘍，且脆弱易出血，周圍組織可存在出血性水腫。miRNA 是一種非編碼小RNA，在細胞增殖、分化和凋亡等多種疾病的發生和發展中，發揮重要作用[10]。有研究[11]表明，UC 患者miRNA 呈異常表達，其表達與患者病情密切相關。miR-15 和miR-505在胃腸疾病中發揮重要作用[12]，為進一步探究其表達水平與UC 患者內鏡活動度的關系，本研究對此展開深入分析，發現血清miR-15 和miR-505 水平與UC 患者內鏡活動度密切相關，可作為病情評估的重要血清學指標。

3.2 血清miR-505和miR-15水平與UC發生和發展的關系

本研究結果顯示，UC 患者血清miR-505 水平較IBS 患者低，miR-15 水平較IBS 患者高，且不同臨床分期和不同分型的UC患者，血清miR-505和miR-15水平有明顯差異，提示：血清miR-505和miR-15水平與UC的發生和發展，密切相關。究其原因，可能為：miR-505 是一種非編碼小RNA，可通過調控NF-κB信號通路，調節炎癥反應，進而參與疾病發生發展過程[13]。miR-15 是一種功能性miRNA，在細胞分化方面發揮著重要的作用[14]。以往研究[15]證實，miR-15與多種炎性疾病關系密切，考慮與miR-15 可通過調控炎癥因子水平，參與UC 的發生發展過程有關。因此，探討血清miR-15和miR-505水平與UC患者內鏡活動度的關系，對于病情的評估具有重要意義。

3.3 血清miR-505、miR-15和改良Mayo評分對UC患者內鏡活動度的影響

血清miR-505 與改良Mayo 評分呈負相關，血清miR-15 與改良Mayo 評分呈正相關，提示：血清miR-505和miR-15水平與UC患者內鏡活動度密切相關。miR-505 是一種腫瘤抑制因子，高遷移率族box-1蛋白（high mobility group box-1 protein，HMGB1）是其靶基因[16]。由于HMGB1 是損傷相關分子，在自噬中具有重要作用[17]，而自噬是免疫防御系統的重要過程，故miR-505 可通過調控HMGB1，調節機體免疫應答反應[18]。炎性活動時，HMGB1 表達上調，激活HMGB1介導的自噬，進而加劇炎癥反應，參與疾病進展[19]。miR-505 過表達可下調HMGB1 表達，抑制自噬相關蛋白，抑制自噬過程，調節免疫應答，減輕炎癥反應，進而影響UC患者內鏡活動度[20]。miR-15 參與凋亡、細胞分化與周期調控和應激等重要細胞功能活動的調節[21]。miR-15 表達水平升高，可促進調節性T細胞分化，促進白細胞介素-10分泌，減弱巨噬細胞的抗炎作用，加劇UC 患者炎癥活動度[22]。故miR-15 可通過調控調節性T 細胞功能，影響炎癥因子分泌，進而影響UC患者內鏡活動度。

3.4 ROC curve 驗證血清miR-505 和miR-15 評估UC患者內鏡活動度的參考價值

ROC curve結果顯示，血清miR-505和miR-15評估UC 患者內鏡活動度，具有一定的參考價值，兩者聯合檢測，評估UC 患者內鏡活動度的價值更高。這主要是因為：聯合檢測彌補了單一檢測的不足，可更全面地了解UC 患者炎癥活動度情況，進而幫助病情評估[23]。檢測miR-505水平，可了解患者機體免疫防御系統情況，檢測miR-15 水平，可了解患者炎癥反應程度，兩者綜合檢測，可更好地評估患者炎癥活動情況，進而為UC 患者內鏡活動度的評估提供重要參考[24]。因此，血清miR-505 和miR-15，對于UC 患者內鏡活動度具有重要評估作用，可作為病情評估的重要血清學指標。

3.5 本研究的局限性

本研究為樣本較小的單中心研究，對患者數據納入可能考慮不全，還需進一步擴大樣本來證實血清miR-505 和miR-15 對UC 患者內鏡活動度的評估價值。

綜上所述，UC 患者血清miR-505 較IBS 患者降低，miR-15較IBS患者升高，其水平與患者病情和內鏡活動度密切相關，檢測血清miR-505 和miR-15 水平，可為UC 患者早期病情評估提供重要參考依據，值得臨床推廣使用。