Ang-2、miR-302b、IL-6在心肌梗死伴肺部感染患者早期診斷及心肌損傷評估中的價值

梁啟權,謝志輝,曾勝宏,鄧文森

(中山大學附屬第三醫院粵東醫院 1全科醫學科,廣東 梅州 514700;2.心血管內科;3.重癥醫學科)

近年來急性心肌梗死(AMI)發病率隨社會老齡化步伐推進呈遞增趨勢,起病急驟,病情兇險,發病后患者常需臥床干預,加之咳嗽反射減弱或消失,氣道纖毛清除病原菌能力下降,易引發肺部感染[1]。AMI伴肺部感染不僅可延長患者住院時間,亦增加了病死的風險,因此早期明確診斷至關重要。促血管生成素2(Ang-2)在急性肺損傷、急性呼吸窘迫綜合征患者中表達均高于健康體檢者,提示與急性呼吸系統疾病密切相關,但在AMI伴肺部感染患者中作用尚不明確[2-3]。微小RNA-302b(miR-302b)是診斷急性心力衰竭的潛在生物標志物,并能負性調節白細胞介素-1(IL-1)、白細胞介素-6(IL-6)等炎性因子,參與感染后炎性反應,故推測與肺部感染有關[4-5]。本研究探討Ang-2、miR-302b、IL-6在AMI伴肺部感染患者早期診斷及心肌損傷評估中價值。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2019年1月～2021年12月中山大學附屬第三醫院粵東醫院AMI伴肺部感染患者49例作為感染組,同期選取62例AMI患者作為未感染組。本次研究經過本院醫學倫理委員會同意。兩組性別、既往急性AMI發病史、年齡、體重指數(BMI)、合并疾病等資料比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較[n(%)]

1.2納入、排除標準:納入標準:均符合AMI診斷標準[6];肺部感染的診斷根據癥狀、肺部影像學檢查、病原學培養等確診;肝腎功能無明顯異常。排除標準:合并惡性腫瘤者;合并其他感染類疾病者;近期有外傷史者;合并神經系統疾病者;先天性心臟病者;嚴重凝血功能障礙者。

1.3方法

1.3.1血清Ang-2、miR-302b、IL-6檢測:入院時、入院48 h后、出院時分別采集肘部靜脈血5 ml,3 000 r/min離心10 min,分離血清。采用上海瑞番生物科技有限公司雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)試劑盒檢測血清Ang-2水平;采用艾美捷科技有限公司雙抗體夾心酶聯免疫吸附法試劑盒檢測血清IL-6水平;取200 μl外周血標本,加入裂解液(德國QIGEN公司)1 000 μl,室溫靜置15 min,應用RNA提取試劑盒(德國QIGEN公司)提取總RNA,PrimeScript miRNA cDNA合成試劑盒(日本Takara公司)反轉錄為cDNA,應用熒光定量PCR儀(美國Applied Biosytem公司,ABI 7500型)擴增,試劑均購于日本Takara公司,引物由北京擎科生物科技有限公司合成,均按照試劑盒說明書進行操作,反應條件95℃ 30 s,90℃ 5 s,65℃ 30 s,共40個循環。以U6作為內參,用2△t表示miR-302b。

1.3.2心肌酶譜指標檢測:采用全自動生化分析儀(美國雅培AEROSET型)及寧波瑞源生物科技有限公司酶偶聯法試劑盒檢測肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷草轉氨酸(AST)水平,采用化學發光免疫分析法檢測血清肌鈣蛋白(cTnI)水平,試劑盒購于基蛋生物科技股份有限公司。

1.3.3心肌損傷評估標準[7]:①12導聯心電圖提示異位心動過度、ST-T改變、竇性心動過緩或過度等心電異常現象;②超聲心動圖提示心功能下降或心臟增大。以上兩項中若存在1項異常即可判定心肌損傷。

1.4觀察指標:①比較兩組入院時、入院48 h、出院時Ang-2、miR-302b、IL-6水平;②分析Ang-2、miR-302b、IL-6診斷AMI伴肺部感染的截斷值、敏感度、特異度;③比較輕度、中重度心肌損傷患者入院時、入院48 h、出院時Ang-2、miR-302b、IL-6水平;④比較輕度、中重度心肌損傷患者入院時、入院48 h、出院時心肌酶譜指標:CK-MB、cTnI、AST水平;⑤分析Ang-2、miR-302b、IL-6與心肌酶譜指標相關性。

1.5統計學方法:采用SPSS22.0統計學軟件進行t及χ2檢驗,采用受試者工作特征(ROC)曲線及ROC下面積(AUC)分析Ang-2、miR-302b、IL-6診斷AMI伴肺部感染的價值,采用Pearson分析Ang-2、miR-302b、IL-6與心肌酶譜指標的相關性。

2 結果

2.1不同時間段Ang-2、miR-302b、IL-6水平:入院48 h后兩組血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平達到峰值,感染組血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平高于未感染組,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同時間段Ang-2、miR-302b、IL-6水平

2.2血各指標單一或聯合診斷AMI伴肺部感染價值:ROC顯示聯合診斷AMI伴肺部感染價值的AUC>入院48 h后Ang-2>入院48 h后miR-302b>入院48 h后IL-6。見表3,圖1。

圖1 血各指標單一與聯合診斷ROC曲線

表3 血各指標單一或聯合診斷AMI伴肺部感染價值

2.3輕度、中重度心肌損傷患者不同時間段血各指標:入院48 h后中重度心肌損傷及輕度損傷患者血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平達到峰值,中重度心肌損傷患者血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平高于輕度心肌損傷患者,差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 心肌損傷和輕度心肌損傷患者不同時間段血清學指標比較

2.4輕度、中重度心肌損傷患者不同時間段心肌酶譜指標:入院48 h后中重度心肌損傷及輕度心肌損傷患者血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平達到峰值,中重度心肌損傷患者血清CK-MB、cTnI、AST水平高于輕度心肌損傷患者,差異有統計學意義(P<0.05)。見表5。

表5 心肌損傷和輕度心肌損傷患者不同時間段心肌酶譜指標比較

2.5血各指標與心肌酶譜指標相關性比較:Ang-2、miR-302b、IL-6均與CK-MB、cTnI、AST呈正相關(P<0.05)。見表6。

表6 血各指標與心肌酶譜指標相關性

3 討論

約10%的AMI患者可發生肺部感染,肺部感染與心功能不全互為兇果,是造成AMI患者預后不良的重要原因,但AMI伴肺部感染時,可表現出與心功能不全的相似特征,臨床診斷困難,易漏診、誤診,因此加強對AMI伴肺部感染、心肌損傷的評估意義重大。

在肺部感染病程中,病原體-宿主相互作用可引起炎性反應和肺屏障功能障礙。Ang-2系血管生成素家族成員之一,能通過與酪氨酸激酶受體相互作用調節血管生成和血管重構[7]。根據Gutbier等[8]報道,在體外溶血素能增強內皮Ang-2的釋放,并增加內皮通透性,而Ang-2基因敲除小鼠的通氣和灌流肺對溶血素刺激的通透性降低,提示Ang-2在肺炎引起的炎性反應和通透性中起著重要作用。高水平Ang-2可減少微循環灌注,且能拮抗內皮細胞酪氨酸激酶受體,抑制促血管生成素與受體的結合,促進內皮細胞凋亡,增強中性粒細胞黏附,增加內皮細胞通透性,介導并加重肺部炎性反應,降低肺內皮屏障功能,故與AMI伴肺部感染有關[9-10]。進一步的ROC分析顯示,入院48 h后Ang-2診斷AMI伴肺部感染的AUC為0.816,呈現出較高的診斷價值,可為臨床提供客觀數據參考。CK-MB、cTnI、AST是臨床常用的心肌損傷指標,本研究發現,Ang-2均與CK-MB、cTnI、AST呈正相關,提示檢測Ang-2還能評估患者心肌損傷情況,為臨床決策、干預提供重要的參考信息。

miR-302b是miR-302/367家族中一個重要成員,定位于人染色體4q25上,可調控細胞損傷、壞死、凋亡,目前關于其研究多集中于惡性腫瘤領域,在AMI伴肺部感染領域的報道鮮見[11-12]。本研究結果提示miR-302b與AMI伴肺部感染有關。陳雪媛等[13-14]的報道采用miR-302模擬物上調miR-302的表達,發現流感病毒在細胞內復制和轉錄增多,而轉染miR-302抑制劑降低miR-302表達后,流感病毒復制、轉錄被抑制,提示miR-302參與宿主的抗病毒調控機制。故推測miR-302b在AMI伴肺部感染患者中呈高表達可能與病原菌入侵肺部后,激活了機體抗微生物調控機制有關,但由于這一觀點的新穎性,目前尚缺乏更多研究去論證,仍需后續研究的進一步驗證。且本研究提示IL-6還與心肌損傷有關,能輔助評估心肌損傷情況。

IL-6是趨化因子家族的細胞因子。本研究顯示,AMI伴肺部感染患者入院48 h后血清IL-6水平較高,診斷AMI伴肺部感染的AUC為0.706,截斷值>22.32 pg/ml,可為臨床診斷疾病提供量化參考。IL-6在壓縮性骨折術后肺部感染、慢性阻塞性肺疾病伴肺部感染患者中表達顯著高于未感染患者,均提示IL-6與肺部感染有關[15-16]。Chen等[17]研究指出,肺部感染時,IL-6水平可在早期即表現出顯著升高,本研究觀點與之相似。肺部感染后,在病原菌刺激下,巨噬細胞、淋巴細胞等被激活,合成IL-6,并促進激活的巨噬細胞分化,介導黏附分子黏附,因此在AMI伴肺部感染時呈現出較高水平,有助于疾病的診斷[18-19]。且本研究發現,IL-6均與CK-MB、cTnI、AST呈正相關,說明IL-6還與心肌損傷有關,能輔助評估心肌損傷情況。本研究不足之處在于,未分析血清Ang-2、miR-302b、IL-6鑒別心肌損傷的具體截斷值,在患者出現肺部感染相關癥狀時,仍需臨床進行專科心肌損傷的評估,以明確鑒別,為臨床提供更準確的參考信息。