東莞地區(qū)人群PHACTR1基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性

連新龍

(東莞市寮步醫(yī)院,廣東 東莞 523000)

中國的流行病學(xué)報告顯示,2020年因心血管疾病死亡的人數(shù)約400萬[1]。隨著社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展和生活習(xí)性改變,心血管疾病的危險因素,如高血壓、血脂異常、肥胖和糖尿病等在我國人群中的患病率均明顯增加[2-3]。而冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(CHD)是導(dǎo)致心源性猝死的主要疾病,包括心肌梗死、心絞痛和冠狀動脈硬化。如何減少CHD危險因素,降低其發(fā)病率和死亡率,已成為重大公共衛(wèi)生問題。近年來,由生物標(biāo)志物引領(lǐng)的個體診斷及治療逐漸興起,研究顯示,基因檢測后進(jìn)行干預(yù),可以明顯降低心臟病的發(fā)病率[4]。磷酸酶和肌動蛋白調(diào)節(jié)因子1(PHACTR1)基因位于染色體6p24位點,是PHACTR1-4家族的一種,可以通過增加低密度脂蛋白的氧化促進(jìn)動脈粥樣硬化(AS)的發(fā)生與發(fā)展[5]。AS是CHD發(fā)病的關(guān)鍵原因,因此PHACTR1基因可能與CHD發(fā)病相關(guān)。因此,本研究探討PHACTR1基因位點多態(tài)性與東莞地區(qū)人群中冠心病易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料:研究經(jīng)過東莞市寮步醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會同意,選取東莞地區(qū)的CHD患者50例為CHD組,同時選取50例在年齡、性別與之相匹配的正常患者作為對照組,兩組患者均為居住于東莞市10年以上人群,采集年齡、性別、體重、吸煙史、既往病史等相關(guān)信息。其中CHD組患者納入標(biāo)準(zhǔn)為:①行冠狀動脈造影術(shù)介入檢查結(jié)果明確診斷為CHD患者,②入選患者為東莞市地區(qū)漢族人,且彼此間無血緣關(guān)系,CHD組患者中有男34例,女16例,平均年齡(63.28±8.94)歲。對照組患者的納入標(biāo)準(zhǔn)為:①同期健康體檢排除CHD的患者,其中男28例,女22例,年齡(57.37±10.12)歲。

1.2方法

1.2.1CHD診斷方法:入選冠心病患者均以冠狀動脈血管造影(CAG)結(jié)果為診斷標(biāo)準(zhǔn)。方法:經(jīng)橈動脈或股動脈途徑,采用5F公用導(dǎo)管行選擇性左、右脈狀動脈造影。結(jié)果顯示,左冠狀動脈至少行4個及4個以上的體位投影,右冠狀動脈至少行2個以上的體位投影,以明確判斷冠狀動脈狹窄程度。CHD診斷標(biāo)準(zhǔn):造影示左主干、左前降支、左回旋支或右冠狀動脈至少有1支管腔直徑狹窄≥50%。

1.2.2PHACTR1基因多態(tài)性檢測:于CAG 前抽取所有受試者的外周靜脈血5 ml,采用蛋白酶K處理,使用常規(guī)苯酚氯仿法提取基因組DNA。對PHACTR1基因rs1223397位點、rs2026458位點、rs475543位點、rs693758位點、rs9349379位點和rs9472419位點的DNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物經(jīng)過2%瓊脂糖凝膠電泳后,割取大小一致的目的條帶,最后使用DP214-03回收試劑盒純化回收。在進(jìn)行Sanger測序?qū)嶒灪?使用測序儀(3730xl)進(jìn)行測序,測序結(jié)果使用DNA Sequencing analysis軟件和Sequencher 5.1軟件包進(jìn)行分析和對比。

1.3觀察指標(biāo):分別收集所有研究對象的年齡、性別、體重指數(shù)(BMI)、吸煙史、既往病史等相關(guān)信息。同時,所有研究對象還于清晨空腹采集外周血,運(yùn)用全自動生化儀測定低密度脂蛋白(LDL)、糖化血紅蛋白(HbA1c)等相關(guān)指標(biāo)。同時收集對所有研究對象的外周靜脈血樣本提取樣本DNA,選擇rs1223397位點、rs2026458位點、rs475543位點、rs693758位點、rs9349379位點和rs9472419位點,運(yùn)用檢測技術(shù)檢測6號染色體上常見單核普酸多態(tài)(SNPs)位點進(jìn)行檢測及基因分型。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析:本研究涉及的所有數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理。采用χ2、t檢驗或秩和檢驗。

2 結(jié)果

2.1基線資料比較:對兩組的基線資料進(jìn)行比較,見表1。發(fā)現(xiàn)CHD組的和對照組之間的性別和BMI等方面比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。而CHD組患者的年齡分布較大,吸煙史、LDL和HbA1c等方面進(jìn)行比較,CHD組患者顯著高于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表1 兩組一般資料比較

2.2基因型比較:對PHACTR1基因的多態(tài)性進(jìn)行檢測后發(fā)現(xiàn),在東莞地區(qū)人群中,PHACTR1基因rs1223397位點存在CC/GC/GG三種基因型、rs2026458位點存在CC/CT/TT三種基因型、rs475543位點存在AA/AG/GG三種基因型、rs693758位點存在AA/AG/GG三種基因型、rs9349379存在AA/GA/GG三種基因型、rs9472419存在CC/CT/TT三種基因型,具體分布頻率見表2。兩組間PHACTR1基因rs1223397位點、rs2026458位點、rs475543位點、rs693758位點、rs9349379位點和rs9472419位點的基因型進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩組PHACTR1基因不同位點基因型頻率比較(n,n=50)

3 討論

PHACTR1基因共包含20個外顯子和19個內(nèi)含子,可以編碼蛋白磷酸酶1(PP1)和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的肌動蛋白構(gòu)成的結(jié)合蛋白,具有遺傳多態(tài)性[6]。PHACTR1基因編碼蛋白在心臟和腦的內(nèi)皮細(xì)胞,特別是動脈內(nèi)皮細(xì)胞中高度表達(dá),在內(nèi)皮小管生成、運(yùn)動和凋亡的調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮重要作用[7-8]。PHACTR1蛋白由接近500個氨基酸組成,能夠有效抑制PP1的功能[9]。PP1受抑制后,可以限制一氧化氮合酶的去磷酸化過程,從而影響一氧化氮在內(nèi)皮細(xì)胞中的合成,而一氧化氮在心臟保護(hù)中起多種作用,如擴(kuò)張血管、抑制血小板、抗氧化、抗凝血和抗血栓等[10]。因此,PHACTR1基因在保護(hù)心臟中起重要作用。JARRAY等的研究也證實,PHACTR1 表達(dá)的下調(diào)會誘導(dǎo)AS過程中的關(guān)鍵成分激活,如氧化低密度脂蛋白受體、凝血酶、凝血酶受體1等促炎蛋白,同時,還可以誘導(dǎo)氨基脲敏感胺氧化酶(SSAO)和TGF-β誘導(dǎo)基因h3(βIG-H3)等AS生物標(biāo)記物的出現(xiàn),證實了PHACTR1蛋白在AS發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵作用[11]。

2009年,KATHIRESAN等首次報道PHACTR1基因多態(tài)性與冠心病的發(fā)生有關(guān)[12]。國內(nèi)學(xué)者Zhang等[13]也進(jìn)行了一項全基因組關(guān)聯(lián)研究,發(fā)現(xiàn)PHACTR1基因rs2026458位點與頸動脈和主動脈弓鈣化密切相關(guān),而rs9349379位點無明顯相關(guān)性。BEAUDOIN等的研究也證實,PHACTR1基因rs9349379位點的多態(tài)性與CHD和心肌梗死有關(guān)[14]。眾所周知,種群內(nèi)部遺傳變異也可能導(dǎo)致等位基因出現(xiàn)頻率差異和連鎖不平衡結(jié)構(gòu),VARGAS等的研究也證明,不同種族間,PHACTR1基因不同位點的多態(tài)性與CHD之間的相關(guān)性具有差異[15]。

綜上所述,東莞地區(qū)漢族人群PHACTR1基因rs1223397位點、rs2026458位點、rs475543位點、rs693758位點、rs9349379位點和rs9472419位點的多態(tài)性可能與CHD的發(fā)生無明顯相關(guān)性。但本研究是一項單中心小樣本研究,同時存在幸存者偏差,因CHD死亡的患者未能入組,因此,存在一定的局限性。但本研究可以作為今后多中心、大樣本、長時間隨訪研究的基礎(chǔ),為其提供一定的參考。