黃芪、木香微型飲片切制工藝優選

林桂梅 來有雪 鞠成國 侯 斌

1.遼寧中醫藥大學藥學院，遼寧 大連 116600；2.國家中醫藥管理局中藥炮制技術傳承基地(遼寧)，遼寧 大連 116600；3.大連市第六人民醫院，遼寧 大連 116600

黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch)Bge.的干燥根[1]。木香為菊科植物木香AucklandialappaDecne.的干燥根[1]。黃芪、木香雖均為根入藥，但性狀上有所區別，黃芪為長30～90 cm，直徑1～3.5 cm的根，木香則為長5～10 cm，但直徑為0.5～5cm的根。臨床上，黃芪、木香均需要切成厚片才能入藥，可以說中藥飲片是中藥最基本的入藥形式[2]。藥典對厚片的切制厚度規定為2～4 mm，但飲片廠生產中對其切制規格不易掌控，并且各地飲片切制方法不一，導致臨床上黃芪、木香切制質量差異較大，這些極大地制約了黃芪和木香飲片的臨床用藥。為了制出質優、型精的飲片，課題組提出微型飲片概念[3-6]。微型飲片較常規飲片粒徑細，比細粉粗，依然可以保持中藥材固有的藥效學基礎。以此為基礎，選取黃芪、木香藥材，以飲片粒徑、片厚、潤制時間和干燥方式為因素，以飲片的流動性、浸出物含量、指標性成分含量等為指標，對黃芪、木香微型飲片的切制工藝進行優化，為微型飲片的研究提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津LC-20AT液相色譜儀(SPD-M20A 檢測器，CAD檢測器，LC-20AB 泵，CTO-20A柱溫箱，SIL-20A自動進樣器，CBM-20A數據轉換模器)；島津 LC-Solution色譜數據工作站；METTLER AE240型十萬分之一分析天平(瑞士METTLER)；FA1004B電子天平(上海精密科學儀器有限公司)；KQ-250DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；YP5102型電子天平(上海光正醫療有限公司)。DHF-200手提式高速萬能打粉機(溫嶺市林大機械有限公司)；HITECH純水儀(上海和泰儀器有限公司)。

A.對照品；B.樣品；1.黃芪甲苷

A.對照品；B.樣品；1.毛蕊異黃酮葡萄糖苷

A.對照品；B.樣品；1.木香烴內酯；2.去氫木香內酯

1.2 試藥 黃芪藥材購自安徽亳州藥材市場，經遼寧中醫藥大學藥學院中藥鑒定教研室翟延君教授鑒定為蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根；木香藥材購自云南，經遼寧中醫藥大學藥學院中藥鑒定教研室翟延君教授鑒定為菊科植物木香AucklandialappaDecne.的干燥根。黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品(成都德思特生物技術有限公司，批號84687-43-4、20633-67-4)、木香烴內酯、去氫木香內酯對照品(上海永恒生物科技有限公司，批號553-21-9、20140421)，甲醇、乙腈(均為色譜純)，超純水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、木香烴內酯、去氫木香內酯含量測定

2.1.1 對照品溶液的制備 黃芪甲苷、毛蕊異黃酮：精密稱取黃芪甲苷、毛蕊異黃酮對照品適量，加甲醇分別制成每1 mL含黃芪甲苷0.505 mg、毛蕊異黃酮0.143 mg的溶液，即得。

木香烴內酯、去氫木香內酯：精密稱取木香烴內酯、去氫木香內酯對照品適量，加甲醇制成每 1 mL 含木香烴內酯0.208 mg、去氫木香內酯0.372 mg的混合對照品溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備[1]黃芪甲苷：取樣品中粉約4 g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40 mL，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4 h，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40 mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5 mL使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂(內徑為1.5 cm，柱高為12 cm)，以水50 mL洗滌，棄去水液，再用40%乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

木香烴內酯、去氫木香內酯：毛蕊異黃酮葡萄糖苷：取本品粉末(過四號篩)約1 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流4 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25 mL，回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

取樣品粉末(過四號篩)約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.1.3 測定條件[1]黃芪甲苷色譜柱：Diamonsil C18(5 μm，200 mm×4.6 mm)；流動相：乙腈-水(32∶8)；流速：1 mL/min；電霧式檢測器檢測；進樣量：10 μL。HPLC圖如圖1所示。

毛蕊異黃酮葡萄糖苷色譜柱：Diamonsil C18(5 μm，200 mm×4.6 mm)；流動相：乙腈(A)-0.2%甲酸水溶液(B)梯度洗脫；流速：1 mL/min；檢測波長：260 nm；進樣量：10 μL。梯度洗脫條件見表1，HPLC圖如圖2所示。

表1 毛蕊異黃酮葡萄糖苷梯度洗脫條件

木香烴內酯、去氫木香內酯[7]色譜柱：Diamonsil C18(5 μm，200 mm×4.6 mm)；流動相：甲醇-水(65∶35)；流速：1 mL/min；檢測波長：225 nm；進樣量：10 μL。HPLC圖如圖3所示。

2.1.4 方法學考察

2.1.4.1 線性范圍考察 精密吸取濃度為0.5050 mg/mL的黃芪甲苷對照品溶液1 μL、2 μL、4 μL、8 μL、10 μL、15 μL；精密吸取濃度為0.0480 mg/mL的毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品溶液1 μL、2 μL、4 μL、8 μL、10 μL、15 μL；精密吸取濃度為0.208 mg/mL的木香烴內酯對照品溶液1 μL、2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL；精密吸取濃度為0.372 mg/mL的去氫木香內酯對照品溶液1 μL、2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL，注入高效液相色譜儀中，測定峰面積。對照品進樣量(Y)為橫坐標，峰面積(X)為縱坐標繪制標準曲線，得線性回歸方程見表2。

表2 線性關系結果

2.1.4.2 精密度試驗 黃芪甲苷：精密吸取同一供試品溶液10 μL，按2.1.3項下操作，連續進樣6次，記錄色譜圖，測定供試品中黃芪甲苷峰面積的RSD為2.0%，結果表明儀器精密度良好。

毛蕊異黃酮葡萄糖苷：精密吸取同一供試品溶液10 μL，按2.1.3項下操作，連續進樣6次，記錄色譜圖，測定供試品中毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD為0.9%，結果表明儀器精密度良好。

木香烴內酯、去氫木香內酯：精密吸取同一供試品溶液10 μL，按2.1.3項下操作，連續進樣6次，記錄色譜圖，測定供試品中木香烴內酯、去氫木香內酯峰面積的RSD分別為2.0%、1.9%、結果表明儀器精密度良好。

2.1.4.3 穩定性試驗 黃芪甲苷：精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0 h、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h進樣分析，按2.1.3項下操作，測定色譜峰面積的RSD分別為2.0%，結果表明供試品溶液在24 h內穩定。

毛蕊異黃酮葡萄糖苷：精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0 h，1 h，2 h，4 h，8 h，24 h進樣分析，按2.1.3項下操作，測定色譜峰面積的RSD分別為2.0%，結果表明供試品溶液在24 h內穩定。

木香烴內酯、去氫木香內酯：精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0 h、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h進樣分析，按2.1.3項下操作，木香烴內酯、去氫木香內酯含量，測定色譜峰面積的RSD分別為1.7%、1.6%，結果表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.1.4.4 重復性試驗 黃芪甲苷：取同一樣品6份，按2.1.2及2.1.3項下操作，分別進樣10 μL，測定各樣品中黃芪甲苷的平均含量為0.041%，RSD為1.9%。

毛蕊異黃酮葡萄糖苷取同一樣品6份，按2.1.2及2.1.3項下操作，分別進樣10 μL，測定各樣品中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的平均含量為0.031%，RSD為1.7%。

木香烴內酯、去氫木香內酯：取同一樣品6份，按2.1.2及2.1.3項下操作，分別進樣10 μL，測定各樣品中木香烴內酯、去氫木香內酯的平均含量分別為2.32%、1.96%，RSD分別為1.8%、1.7%。

2.1.4.5 加樣回收率試驗 黃芪甲苷：取已知含量黃芪樣品6份，每份0.5 g，精密稱定，分別加入0.157 g/L的黃芪甲苷標準液10 mL，按照2.1.2黃芪項下操作，配制成6份加樣的供試品溶液，在上述色譜條件進樣分析，計算回收率，結果黃芪甲苷的加樣回收率為99.19%，RSD為2.4%。

毛蕊異黃酮葡萄糖苷：取已知含量的黃芪樣品6份，每份0.1 g，精密稱定，分別加入1.41 g/L的毛蕊異黃酮葡萄糖苷標準液2 mL，按照2.1.2黃芪項下操作，配制成6份加樣的供試品溶液，在上述色譜條件進樣分析，計算回收率，結果毛蕊異黃酮葡萄糖苷的加樣回收率為98.18%，RSD為1.7%。

木香烴內酯：取已知含量的木香樣品6份，每份0.1 g，精密稱定，分別加入0.102 g/L的木香烴內酯標準液2 mL，按照2.1.2木香項下操作，配制成6份加樣的供試品溶液，在上述色譜條件進樣分析，計算回收率，結果木香烴內酯的加樣回收率為98.32%，RSD為1.4%。

去氫木香內酯：取已知含量的木香樣品6份，每份0.1 g，精密稱定，分別加入1.261 g/L的去氫木香內酯標準液2 mL，按照2.1.2木香項下操作，配制成6份加樣的供試品溶液，在上述色譜條件進樣分析，計算回收率，結果去氫木香內酯的加樣回收率為99.12%，RSD為1.7%。

2.2 浸出物的含量測定[1]黃芪：取供試品4g，精密稱定，置250 mL錐形瓶中，精密加水100 mL，密塞，冷浸，前6 h內時時振搖，再靜置18 h，用干燥濾器迅速濾過，精密量取續濾液20 mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干后，105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，稱定重量。以干燥品計算水溶性浸出物含量。

木香：取供試品2 g，精密稱定，置250 mL錐形瓶中，精密加70%乙醇100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取續濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發皿，在水浴上蒸干后，105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，以干燥品計算醇溶性浸出物含量。

2.3 休止角的測定[8-10]傾斜法，于矩形盒內裝滿樣品飲片，松實程度適中，將盒逐漸傾斜至粉體開始流出為止，盒子傾斜的角度即為休止角。設傾斜角的高為H，傾斜角的底邊為L。按照下面公式計算休止角：tanθ=H/L，算出θ值即為休止角。

3 黃芪、木香微型飲片切制工藝優選[11-13]

3.1 試驗設計 根據預試驗結果，選取飲片粒徑(A)、片厚(B)、潤制時間(C)、干燥方式(D)四個因素，每個因素分別設3個水平，不考慮交互作用，選用L9(3)4正交表安排實驗，黃芪、木香微型飲片切制工藝因素水平安排分別見表2、表3，按2.1、2.2及2.3項下方法分別測定黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、木香烴內酯、去氫木香內酯含量，樣品浸出物含量及休止角。按照綜合加權評分法進行綜合評分與分析，黃芪微型飲片切制工藝中選擇黃芪甲苷權重系數為30，毛蕊異黃酮葡萄糖苷權重系數為30，醇溶性浸出物權重系數為30，休止角權重系數為10，綜合評分=30×黃芪甲苷/黃芪甲苷最大值+30×毛蕊異黃酮葡萄糖苷/毛蕊異黃酮葡萄糖苷最大值+30×浸出物/浸出物最大值+10×休止角最小值/休止角；木香微型飲片切制工藝中選擇木香烴內酯、去氫木香內酯含量總和權重系數為40，醇溶性浸出物權重系數為40，休止角權重系數為20，綜合評分=40×木香烴內酯、去氫木香內酯含量總和/木香烴內酯、去氫木香內酯含量總和最大值+40×浸出物/浸出物最大值+20×休止角/休止角最大值。

表3 因素水平表(黃芪)

3.2 正交實驗結果 試驗方法按正交表安排進行試驗，正交試驗測定數據和統計結果，黃芪分別見表4、表5，枳殼分別見表6、表7。

表4 因素水平表(木香)

表5 正交試驗設計及結果(黃芪)

表6 方差分析表(黃芪)

表7 正交試驗設計及結果(木香)

表8 方差分析表(木香)

3.3 綜合分析 在黃芪微型飲片切制工藝中，因素B對結果有顯著影響，而因素A、C、D對結果無顯著影響。極差分析認為各因素的主次順序是B>C>A>D，由此確定最佳的工藝條件為A3B3C1D2。在木香微型飲片切制工藝中，極差分析認為各因素的主次順序是A>D>B>C，由此確定最佳的工藝條件為A3B3C3D2。

4 討論

飲片的軟化方式極大地影響飲片的質量，一直有“三分刀功七分潤”的說法。大多數植物藥均需要軟化后切制，本實驗在正式實驗之前進行了泡潤軟化、蒸制軟化、減壓軟化、烘箱烘制軟化等多種軟化方法的預實驗，最終確定泡潤軟化的方法。實驗中考察微型飲片的流動性選取休止角作為一個檢測指標，也是為下一步尋找適合微型飲片加工設備，初步建立微型飲片切制工業生產線做準備。

微型飲片與傳統飲片相比，大大增加飲片與溶媒接觸面積，可提高有效成分煎出率。同時微型飲片還可避免藥材細粉在煎煮過程中出現粘鍋、煳化現象。結合木香自身的形狀和硬度，并且根據預實驗的結果，選取木香飲片的切制粒徑水平進行考察。通過前期的煎膏率實驗發現，木香微型飲片煎出的有效成分的含量均高于傳統飲片，有的甚至高出傳統飲片的三倍甚至更多。參考相關文獻和實驗結果，有理由認為由于飲片粒徑變小，相同質量的飲片與提取溶劑的接觸面積增大，所以有效成分的溶出更多。

實驗通過對木香微型飲片大小水平的考察發現，飲片在一定粒徑范圍內，浸出物含量及有效成分會隨著粒徑的減小而增加。有研究[14-18]發現如果飲片過小，煎煮過程中易出現糊鍋及不易過濾的情況。微型飲片在外形上較傳統飲片粒徑小，比細粉粗。這可以保證微型飲片仍然保有傳統飲片的藥效前提下，盡量提高飲片利用率。

黃芪作為臨床常用大宗中藥材之一，其藥用歷史已有2000年之久，但隨著日益增長的市場需求，黃芪野生資源幾近枯竭，栽培品種因為生長環境等諸多限制，難以滿足市場需求[19]。那么在有限的黃芪藥材資源前提下，如何最大限度提高飲片利用率，成為目前亟需解決的問題。微型飲片以飲片的形制變革為外在形式，有效成分的提取更完全，煎出率更高為內在優勢，為提高黃芪飲片的利用率開辟了一條新的道路。

5 結論

通過正交設計，優選黃芪、木香微型飲片切制條件為潤制4 h，切制粒徑為7～8 mm，厚度為4 mm，采用陰干方法干燥。由黃芪、木香微型飲片切制工藝結果可見，微型飲片化大為小，增加了飲片的流動性，并且在保留藥材原有的藥效與性狀同時，更能提高藥材中有效成分的煎出率，這些為下一步實現智能調劑和智能煎煮提供參考。