IL-6 通過調(diào)控JAK2/STAT3 信號通路減輕急性肺損傷的機(jī)制研究

周斌 萬少兵 王瑛 余平 典萬康 周瑩 周琴

急性肺損傷（acute lung injury，ALI）指由各種直接或間接因素造成肺泡上皮細(xì)胞及彌漫性毛細(xì)血管內(nèi)皮損傷，臨床表現(xiàn)為低氧血癥及呼吸窘迫，嚴(yán)重時可導(dǎo)致急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）[1]。ARDS 的發(fā)病率高達(dá)40%[2]，盡管如今醫(yī)療水平不斷提高，但針對ARDS 的有效治療手段仍然十分缺乏。因此，探究ALI/ARDS 的發(fā)病機(jī)制和治療手段是肺部疾病的研究熱點(diǎn)之一。ALI 發(fā)病時肺部發(fā)生過度炎癥反應(yīng)，炎性因子被大量分泌，與效應(yīng)細(xì)胞相互作用，使肺部促炎與抗炎失衡，導(dǎo)致ALI 的持續(xù)發(fā)展[3]。IL-6 在免疫、炎癥、造血、腫瘤等方面具有重要作用，其通過酪氨酸蛋白激酶2（janus kinase 2，JAK2）/信號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducer and activator of transcription，STAT）3 信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞信號[4]。近年來，JAK2/STAT3 信號通路被報道參與多種疾病過程，且與呼吸系統(tǒng)疾病密切相關(guān)[5]。有研究顯示IL-6 可能是脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)激活STAT 過程中的關(guān)鍵因子[6]。筆者團(tuán)隊(duì)前期研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3（suppressor of cytokine signaling 3，SOCS3）通過調(diào)控JAK2/STAT3 信號通路改善ALI，且JAK2/STAT3 信號通路通過調(diào)控Th17/調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞平衡從而調(diào)控ALI[7-8]。但I(xiàn)L-6 能否通過調(diào)控JAK2/STAT3 信號通路改善ALI 尚未明確。本研究通過LPS 誘導(dǎo)人肺癌細(xì)胞A549 建立ALI 細(xì)胞模型，探討IL-6 通過調(diào)控JAK2/STAT3 信號通路減輕ALI 的機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞、試劑和儀器 人肺癌細(xì)胞A549 來自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫（貨號：TCHu150）；F12K 完全培養(yǎng)基（美國Gibco 公司，貨號：21127-022）；PBS（中國Solarbio 公司，貨號：P1010）；減血清培養(yǎng)基Opti-MEM（美國Gibco 公司，貨號：31985-062）；去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒（美國OMEGA，貨號：D6950-02）；Lipofectamine 2000（美國Invitrogen 公司，貨號：11668-027）；Trizol（美國Ambion 公司，貨號：15596026）；細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（cell counting kit-8, CCK-8）（中國Solarbio 公司，貨號：CA1210）；LPS（德國Sigma 公司，貨號：L2880）；AnnexinV-PE/7-AAD 凋亡檢測試劑盒（美國BD 公司，貨號：559763）；活性氧（reactive oxygen species，ROS）檢測試劑盒（中國Beyotime 公司，貨號：S0063）；TNF-α ELISA檢測試劑盒（中國Bioswamp 公司，貨號：HM10205）；IL-6 ELISA 檢測試劑盒（中國Bioswamp 公司，貨號：HM10001）；IL-1β ELISA 檢測試劑盒（中國Bioswamp公司，貨號：HM10206）；丙二醛（malondialdehyde，MDA）測定試劑盒（中國南京建成公司，貨號：A003-1-1）；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）測定試劑盒（中國南京建成公司，貨號：A001-3-2）；RIPA（強(qiáng)）組織細(xì)胞快速裂解液（中國Solarbio公司，貨號：R0010）；BCA蛋白濃度測定試劑盒（中國Solarbio 公司，貨號：PC0020）；JAK2、STAT3、磷酸化JAK2（phosphorylated JAK2，p-JAK2）、磷酸化STAT3（phosphorylated STAT3，p-STAT3）、GAPDH 一抗及羊抗兔二抗（中國貝茵萊公司，貨號：PAB47912、PAB46077、ab32101、ab32143、PAB36269、SAB43714）。DMIL LED 倒置熒光顯微鏡（德國Leica 公司）；T100-Thermal Cycler PCR 儀（美國Bio-Rad 公司）；CO2恒溫培養(yǎng)箱（美國Thermo 公司，貨號：311）；Universal HoodⅡ凝膠成像系統(tǒng)（美國Bio-Rad 公司）；CFX-Connect 96 熒光定量PCR 儀（美國Bio-Rad 公司）；Nano-300 超微量分光光度計(jì)（杭州奧盛公司）；AMR-100 酶標(biāo)儀（杭州奧盛公司）；NovoCyte流式細(xì)胞儀（中國艾森公司）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及ALI 細(xì)胞模型的建立 取A549 細(xì)胞接種于F12K 完全培養(yǎng)基中，置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)并進(jìn)行傳代培養(yǎng)。取培養(yǎng)的A549 細(xì)胞5×106/mL 接種于6 孔板，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，在F12K 完全培養(yǎng)基中加入10 μg/mL LPS，繼續(xù)在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，即建立ALI 細(xì)胞模型。

1.2.2 IL-6 基因過表達(dá)及干擾質(zhì)粒構(gòu)建 設(shè)計(jì)合成IL-6 目的基因序列和3 個IL-6 干擾序列即IL-6 shRNA1、IL-6 shRNA2 和IL-6 shRNA3，將IL-6 目的基因序列和IL-6 干擾序列酶切線性化，將雙酶切后目的片段與載體進(jìn)行連接。轉(zhuǎn)化后進(jìn)行菌落PCR 鑒定并測序，用去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒提取陽性菌落質(zhì)粒，質(zhì)粒用于后續(xù)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 IL-6 過表達(dá)實(shí)驗(yàn)分組：對照組、空載組、IL-6 過表達(dá)質(zhì)粒。IL-6 干擾實(shí)驗(yàn)分組：對照組、IL-6 shRNA1 組、IL-6 shRNA2 組、IL-6 shRNA3 組和陰性對照組。用減血清培養(yǎng)基Opti-MEM 稀釋各組質(zhì)粒DNA，和減血清培養(yǎng)基Opti-MEM 稀釋的Lipofectamine 2000 混勻，靜置20 min。將500 μL 復(fù)合物加到準(zhǔn)備好的含有細(xì)胞的培養(yǎng)板孔中，來回輕柔搖晃細(xì)胞培養(yǎng)板。將細(xì)胞板置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中，轉(zhuǎn)染4 h 后換新鮮培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h。收集細(xì)胞，Trizol 法提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以cDNA 為模板，進(jìn)行qRTPCR 擴(kuò)增。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）為內(nèi)參，用2-ΔΔCt法計(jì)算IL-6 相對表達(dá)水平，并比較3 個IL-6 干擾序列的干擾效率，篩選最佳干擾效率進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù) 將處于對數(shù)生長期的細(xì)胞分為空白對照組、LPS 組、LPS+IL-6 過表達(dá)組、LPS+IL-6干擾組和LPS+空載組。空白對照組細(xì)胞正常培養(yǎng)48 h；LPS 組LPS 處理細(xì)胞24 h 后繼續(xù)培養(yǎng)24 h；LPS+IL-6過表達(dá)組LPS 處理細(xì)胞24 h 后，IL-6 過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24 h；LPS+IL-6 干擾組LPS 處理細(xì)胞24 h 后，IL-6 干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24 h；LPS+空載組LPS 處理細(xì)胞24 h 后，空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24 h。收集細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 細(xì)胞增殖率檢測 采用CCK-8 法。收集細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，分于96 孔板，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜，使細(xì)胞貼壁。按照不同分組處理細(xì)胞。取出細(xì)胞培養(yǎng)板，向每孔加入CCK-8 溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。使用酶標(biāo)儀測量各孔450 nm 波長處的吸光度（optical density，OD）值。以對照組細(xì)胞增殖率為100%，計(jì)算各組細(xì)胞增殖率。細(xì)胞增殖率=OD實(shí)驗(yàn)組/OD對照組×100%。

1.2.6 細(xì)胞凋亡率檢測 采用流式細(xì)胞術(shù)。收集各組細(xì)胞，PBS 重懸細(xì)胞，用AnnexinV-PE/7-AAD 凋亡檢測試劑盒檢測，即加入Annexin V-PE 和7-AAD，輕輕混勻，4 ℃避光孵育30 min；加入PBS，使用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡，NovoExpress 分析軟件分析并計(jì)算細(xì)胞凋亡率。

1.2.7 細(xì)胞氧化應(yīng)激因子ROS、MDA、SOD 水平檢測采用試劑盒法。使用ROS 檢測試劑盒檢測ROS 水平，即用無血清培養(yǎng)液稀釋好的DHE 懸浮細(xì)胞并使細(xì)胞濃度為1×107/mL，37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20 min。洗滌并收集各組細(xì)胞，上流式細(xì)胞儀檢測ROS，NovoCyte分析軟件進(jìn)行分析。嚴(yán)格按照MDA 檢測試劑盒和SOD 檢測試劑盒說明書檢測MDA 和SOD 水平。

1.2.8 細(xì)胞上清液中炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β 水平檢測 采用ELISA 法。收集各組細(xì)胞，1 000 g 室溫離心15 min，取上清液。嚴(yán)格按照ELISA 檢測試劑盒說明書測定細(xì)胞上清液中各炎癥因子水平。

1.2.9 細(xì)胞中IL-6、JAK2、STAT3 mRNA 表達(dá)水平檢測 采用qRT-PCR 法。根據(jù)Trizol 法提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以cDNA 為模板，進(jìn)行qRT-PCR 擴(kuò)增。以GAPDH 為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算IL-6、JAK2 和STAT3 mRNA 相對表達(dá)水平。引物由武漢天一華煜基因科技有限公司合成，引物序列見表1。

表1 qRT-PCR 引物序列

1.2.10 細(xì)胞中JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3 蛋白表達(dá)水平檢測 采用Western blot 法。從培養(yǎng)箱中取出各組細(xì)胞，吸去培養(yǎng)液，適量預(yù)冷的1×PBS 洗滌2次。吸去PBS，按照每1×106個細(xì)胞加入含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解液200 μL，4 ℃充分裂解細(xì)胞，將細(xì)胞刮入1.5 mL EP 管中，在4 ℃12 000 g 離心10 min，取上清液，使用BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。制備SDS-PAGE 膠，上樣電泳并轉(zhuǎn)膜。5%脫脂奶粉室溫封閉4 ℃過夜，一抗與膜室溫孵育1 h。PBS 洗滌干凈后加入二抗，繼續(xù)室溫孵育1 h。PBS 洗滌后，顯色成影。通過TANON GIS軟件讀取相關(guān)條帶灰度值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)軟件。多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Duncan 檢驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IL-6 過表達(dá)及干擾轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證 與對照組和空載組比較，過表達(dá)IL-6 組IL-6 mRNA 表達(dá)水平升高（均P＜0.05），表明IL-6 過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成功，見圖1A。與對照組和陰性對照組比較，IL-6 干擾組即IL-6 shRNA1 組、IL-6 shRNA2 組、IL-6 shRNA3 組IL-6 mRNA 表達(dá)水平均降低（均P＜0.05），表明IL-6 干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成功，見圖1B。其中，3 條干擾質(zhì)粒中shRNA1 干擾效率最高，故后續(xù)干擾試驗(yàn)均選用shRNA1。

圖1 IL-6 過表達(dá)及干擾轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證（A：IL-6 過表達(dá)；B：IL-6 干擾）

2.2 IL-6 過表達(dá)及干擾處理對細(xì)胞IL-6 mRNA 表達(dá)的影響 與空白對照組比較，LPS 組和LPS+空載組IL-6 mRNA 表達(dá)水平均上升（均P＜0.05）；與LPS 組和LPS+空載組，LPS+IL-6 過表達(dá)組IL-6 mRNA 表達(dá)水平上升，LPS+IL-6 干擾組IL-6 mRNA 表達(dá)水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見圖2。

圖2 IL-6 過表達(dá)及干擾處理后細(xì)胞IL-6 mRNA 表達(dá)水平的比較

2.3 IL-6 過表達(dá)及干擾處理對細(xì)胞增殖的影響 與空白對照組，LPS 組和LPS+空載組細(xì)胞增殖率均下降（均P＜0.05）；與LPS 組和LPS+空載組比較，LPS+IL-6過表達(dá)組細(xì)胞增殖率下降，LPS+IL-6 干擾組細(xì)胞增殖率上升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見圖3。

圖3 IL-6 過表達(dá)及干擾處理后細(xì)胞增殖率的比較

2.4 IL-6 過表達(dá)及干擾處理對細(xì)胞凋亡的影響 與空白對照組，LPS 組和LPS+空載組細(xì)胞凋亡率均上升（均P＜0.05）；與LPS 組和LPS+空載組比較，LPS+IL-6 過表達(dá)組細(xì)胞凋亡率上升，LPS+IL-6 干擾組細(xì)胞凋亡率下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見圖4（插頁）。

圖4 IL-6 過表達(dá)及干擾處理后細(xì)胞凋亡率的比較（A：各組細(xì)胞流式圖；B：各組細(xì)胞凋亡率的比較）

2.5 IL-6 過表達(dá)及干擾處理對細(xì)胞氧化應(yīng)激因子ROS、MDA 和SOD 水平的影響 與空白對照組比較，LPS 組和LPS+空載組細(xì)胞ROS 和MDA 水平均上升，SOD 水平均下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。與LPS 組和LPS+空載組比較，LPS+IL-6 過表達(dá)組細(xì)胞ROS 和MDA 水平均上升，SOD 水平下降；LPS+IL-6 干擾組細(xì)胞ROS 和MDA 水平均下降，SOD水平上升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見圖5。

圖5 IL-6 過表達(dá)及干擾處理后細(xì)胞氧化應(yīng)激因子ROS、MDA 和SOD 水平的比較（A：各組細(xì)胞ROS 流式圖；B：各組細(xì)胞ROS 水平的比較；C：各組細(xì)胞MDA 水平的比較；D：各組細(xì)胞SOD 水平的比較）

2.6 IL-6 過表達(dá)及干擾處理對細(xì)胞炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β 水平的影響 與空白對照組比較，LPS 組和LPS+空載組細(xì)胞TNF-α、IL-6、IL-1β 水平均上升（均P＜0.05）；與LPS 組和LPS+空載組比較，LPS+IL-6過表達(dá)組細(xì)胞TNF-α、IL-6、IL-1β 水平均上升，LPS+IL-6 干擾組細(xì)胞TNF-α、IL-6、IL-1β 水平均下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見圖6。

圖6 IL-6 過表達(dá)及干擾處理后細(xì)胞炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β 水平的比較（A：各組細(xì)胞TNF-α 水平的比較；B：各組細(xì)胞IL-6的比較；C：各組細(xì)胞IL-1β 的比較）

2.7 IL-6 過表達(dá)及干擾處理對細(xì)胞JAK2、STAT3 mRNA 和蛋白表達(dá)水平的影響 與空白對照組比較，LPS 組和LPS+空載組細(xì)胞JAK2、STAT3 mRNA 及p-JAK2、p-STAT3 蛋白表達(dá)水平均上升（均P＜0.05）；與LPS 組和LPS+空載組比較，LPS+IL-6 過表達(dá)組細(xì)胞JAK2、STAT3 mRNA 及p-JAK2、p-STAT3 蛋白表達(dá)水平均上升，LPS+IL-6 干擾組細(xì)胞JAK2、STAT3 mRNA及p-JAK2、p-STAT3 蛋白表達(dá)水平均下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。此外，各組間游離的JAK2、STAT3 蛋白表達(dá)水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見圖7-8。

圖7 IL-6 過表達(dá)及干擾處理后細(xì)胞JAK2、STAT3 mRNA 表達(dá)水平的比較（A：各組細(xì)胞JAK2 mRNA 表達(dá)水平的比較；B：各組細(xì)胞STAT3 mRNA 表達(dá)水平的比較）

圖8 IL-6 過表達(dá)及干擾處理后細(xì)胞JAK2、STAT3 蛋白表達(dá)水平的比較（A：各組細(xì)胞JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3 蛋白表達(dá)的電泳圖；B：各組細(xì)胞p-JAK2 蛋白表達(dá)水平的比較；C：各組細(xì)胞JAK2 蛋白表達(dá)水平的比較；D：各組細(xì)胞p-STAT3 蛋白表達(dá)水平的比較；E：各組細(xì)胞STAT3 蛋白表達(dá)水平的比較）

3 討論

臨床上多種疾病均可能引起ALI。ALI 的主要病理生理特征為肺容積減少、肺泡-毛細(xì)血管膜通透性增加、肺順應(yīng)性降低等，臨床表現(xiàn)為呼吸窘迫、進(jìn)行性低氧血癥[9]。ALI 的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，目前主要認(rèn)為與氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)有關(guān)，但尚無明確的治療措施[10]。IL 是由白細(xì)胞產(chǎn)生又在白細(xì)胞間起調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子，目前已發(fā)現(xiàn)38 種IL 因子，功能復(fù)雜。其中IL-6 是一種多功能細(xì)胞因子，在免疫穩(wěn)態(tài)、造血、炎癥、發(fā)育和代謝中發(fā)揮重要作用[4]。研究表明，ALI 患者IL-6 蛋白表達(dá)水平高于健康者，且重度ALI 組患者IL-6 蛋白表達(dá)水平高于輕微-中度ALI 組患者[11]。IL-6 也可作為輸血所致ALI 的預(yù)測靶點(diǎn)之一[12]。本研究證明了，過表達(dá)IL-6 后，LPS 誘導(dǎo)的ALI 模型細(xì)胞增殖率下降，凋亡率上升，而干擾IL-6 則相反。結(jié)果表明IL-6 與ALI 關(guān)系密切，IL-6 低表達(dá)可對ALI 產(chǎn)生保護(hù)作用。

ROS 指泛含氧的化學(xué)物質(zhì)，具有很高的化學(xué)反應(yīng)活性。SOD 具有抗氧化作用，可清除對機(jī)體有害的超氧離子。MDA 是常見的膜脂過氧化指標(biāo)。當(dāng)組織、細(xì)胞中氧化應(yīng)激增加時，ROS 和MDA 被大量產(chǎn)生，SOD則會減少。IL-6、TNF-α 和IL-1β 是重要的促炎細(xì)胞因子，在膿毒癥誘導(dǎo)的ALI 中加速其進(jìn)展，形成肺水腫[13]。有研究表明，IL-6 與胰腺炎誘導(dǎo)的肺損傷中氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)關(guān)系密切[13-14]。本研究發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)IL-6 可以使LPS 誘導(dǎo)的ALI 模型細(xì)胞ROS 和MDA水平上升、SOD 水平下降，促炎因子IL-6、TNF-α 和IL-1β 水平上升，而干擾IL-6 則出現(xiàn)相反現(xiàn)象，表明IL-6 可以減輕LPS 誘導(dǎo)的ALI 模型細(xì)胞中的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)。

IL-6 的進(jìn)一步信號傳遞是由JAK/STAT 和絲裂原激活的蛋白激酶/磷脂酰肌醇-3-羥激酶兩種途徑進(jìn)行的[15]。JAK/STAT 是一種由細(xì)胞因子刺激的信號通路，參與機(jī)體多種生理過程，在先天免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)及抑制炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵作用，是許多疾病的研究靶點(diǎn)之一[16]。JAK 可激活STAT 的磷酸化，進(jìn)而調(diào)控下游基因的表達(dá)。研究表明，JAK2 參與細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，而STAT3 與細(xì)胞生長、分化和凋亡有關(guān)[17]。JAK2/STAT3 信號通路參與免疫反應(yīng)與炎癥因子的表達(dá)，可雙向調(diào)節(jié)以維持機(jī)體的免疫穩(wěn)定[18]。有研究發(fā)現(xiàn)，JAK2/STAT3 信號通路與呼吸系統(tǒng)疾病關(guān)系密切。SOCS3 可以通過抑制JAK2/STAT3 信號通路的激活，刺激抗炎因子、抑制炎性因子，保護(hù)細(xì)胞，抵抗大鼠嚴(yán)重急性胰腺炎引起的肺部炎癥[19]。Kim 等[20]發(fā)現(xiàn)，薄荷油可降低暴露于PM10 哮喘小鼠IL-6 的水平，且JAK2/STAT3 的磷酸化降低。研究發(fā)現(xiàn)烏司他丁可通過抑制JAK2/STAT3 信號通路保護(hù)膿毒癥誘導(dǎo)的ALI[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)IL-6 后，LPS 誘導(dǎo)的ALI 模型細(xì)胞中JAK2 和STAT3 mRNA 表達(dá)水平均上升；在蛋白水平檢測中發(fā)現(xiàn)，JAK2 和STAT3 蛋白磷酸化水平上升。而干擾IL-6 后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中JAK2 和STAT3 mRNA 表達(dá)水平和蛋白磷酸化水平均下降。這提示，IL-6 通過激活JAK2/STAT3 的磷酸化從而減輕LPS 誘導(dǎo)的ALI。

綜上所述，IL-6 可以通過JAK2/STAT3 信號通路降低LPS 誘導(dǎo)的ALI 模型細(xì)胞的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，從而提高細(xì)胞的增殖率并降低細(xì)胞的凋亡率，減輕細(xì)胞ALI，對細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用。本研究完善了IL-6 保護(hù)ALI 的機(jī)制研究，為ALI 的治療提供了一個新的治療靶點(diǎn)。