形態(tài)動(dòng)力學(xué)聯(lián)合減數(shù)分裂紡錘體觀測在卵裂期胚胎篩選中的應(yīng)用

鄭愛燕，蒲艷，孟慶霞，王瑋，廖桂芝，李紅，丁潔

(南京醫(yī)科大學(xué)姑蘇學(xué)院,南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院,蘇州市立醫(yī)院,蘇州 215002)

體外受精-胚胎移植技術(shù)(IVF-ET)助孕過程中,胚胎發(fā)育潛能是影響妊娠成功與否的關(guān)鍵因素之一,因此如何篩選一枚最佳發(fā)育潛能的胚胎成為亟待解決的問題。盡管囊胚移植的出現(xiàn)使胚胎種植率有了一定提升,但囊胚移植需延長胚胎的體外培養(yǎng),可能會(huì)增加產(chǎn)科并發(fā)癥發(fā)生,損害圍產(chǎn)期結(jié)局[1-2],另外囊胚移植也可能導(dǎo)致胎兒出生性別比升高[3]。因此,我們期望找到能在胚胎發(fā)育早期階段預(yù)測胚胎發(fā)育潛能的指標(biāo)和方法。

時(shí)差培養(yǎng)(Time-lapse)技術(shù)可以在維持胚胎培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定的條件下,連續(xù)觀察胚胎的整個(gè)發(fā)育狀態(tài),包括細(xì)胞分裂時(shí)間點(diǎn)和異常分裂行為。研究發(fā)現(xiàn)胚胎發(fā)育動(dòng)力學(xué)參數(shù)和特殊分裂方式可以影響胚胎發(fā)育潛能[4-6]。而紡錘體對卵母細(xì)胞染色體的分配、運(yùn)動(dòng)、平衡以及極體的排列有著至關(guān)重要的影響。紡錘體實(shí)時(shí)觀察儀的出現(xiàn),使人們可以進(jìn)行活體紡錘體觀測。研究發(fā)現(xiàn)減數(shù)分裂紡錘體(MS)存在與否會(huì)影響卵母細(xì)胞正常受精和胚胎發(fā)育及妊娠結(jié)局[7-9]。因此本研究擬結(jié)合早期胚胎發(fā)育形態(tài)動(dòng)力學(xué)參數(shù)和MS形態(tài),建立卵裂期胚胎篩選模型。

材料與方法

一、研究對象

回顧性分析2020年8月至2022年6月在蘇州市立醫(yī)院生殖與遺傳中心行ICSI,同時(shí)行卵母細(xì)胞MS觀測和胚胎實(shí)時(shí)觀測培養(yǎng)患者的臨床資料。這些患者的正常受精胚胎均于Time-lapse時(shí)差培養(yǎng)箱(Embryoscope Plus,Vitrolife,丹麥)進(jìn)行培養(yǎng)。納入標(biāo)準(zhǔn):患者該周期的全部正常受精胚胎均行全囊胚培養(yǎng)。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)獲卵數(shù)<5枚;(2)夫妻雙方任意一方有染色體異常;(3)女方為贈(zèng)卵周期;(4)子宮畸形,嚴(yán)重輸卵管積水等影響妊娠的因素。

本研究共納入46個(gè)周期,459枚成熟卵母細(xì)胞(MⅡ卵),行ICSI注射后最終獲得335枚卵裂期胚胎,均行囊胚培養(yǎng)。

二、研究方法

1.分組:根據(jù)ICSI注射時(shí)卵母細(xì)胞的MS形態(tài)分為MS正常組(239枚)和MS異常組(96枚);根據(jù)是否出現(xiàn)直接分裂(DC)分為無DC組(285枚)和DC組(50枚),其中DC組又分為DC1組(胚胎第1次卵裂時(shí)卵裂球一分為三,20枚)和DC2組(除第1次卵裂外,其余胚胎發(fā)育階段卵裂球一分為三,30枚);根據(jù)是否出現(xiàn)逆分裂(RC),分為RC組(9枚)和無RC組(326枚);根據(jù)傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)評(píng)分將D3胚胎分為D3優(yōu)質(zhì)胚胎組(209枚)和D3非優(yōu)質(zhì)胚胎組(126枚)后,對D3優(yōu)質(zhì)胚胎組和非優(yōu)質(zhì)胚胎組按照胚胎發(fā)育結(jié)局分別分組,形成可利用囊胚的為囊胚組(分別為166枚和31枚),未形成可利用囊胚而丟棄的為廢棄組(分別為43枚和95枚)。

2.促排卵與取卵:根據(jù)患者基本情況,進(jìn)行常規(guī)促排卵,當(dāng)B超提示3枚優(yōu)勢卵泡直徑達(dá)18 mm或4枚優(yōu)勢卵泡直徑達(dá)17 mm時(shí)注射HCG(艾澤,默克,德國)扳機(jī),扳機(jī)后36 h在陰道B超引導(dǎo)下取卵。獲得的卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(COCs)漂洗干凈后置于含G-IVF Plus(Vitrolife,瑞典)的4孔皿。2～4 h后用透明質(zhì)酸酶(Sage,美國)消化去除COCs周圍的顆粒細(xì)胞,將成熟卵母細(xì)胞(MⅡ卵)置于G1 Plus(Vitrolife,瑞典)中培養(yǎng)1～2 h等待授精。上述培養(yǎng)條件均為37℃、6.2%CO2、5%O2。

3.紡錘體觀測與ICSI:ICSI時(shí)將MⅡ卵置于紡錘體觀測專用玻璃皿(D910400,OLYMPUS,日本),利用紡錘體觀測系統(tǒng)(IX-ROBOPola system,OLYMPUS,日本)觀察MS形態(tài)。若呈現(xiàn)明亮的橢圓形則為正常MS,其余狀態(tài)均為異常MS,包括MS形態(tài)異常、亮度異常和未見MS。ICSI時(shí)將MS置于12點(diǎn)鐘方向后進(jìn)行注射,若未見MS,則將第一極體置于12點(diǎn)鐘方向后行注射。

4.胚胎培養(yǎng):ICSI后立即將卵母細(xì)胞按順序置于含G1 Plus的16孔培養(yǎng)皿(Vitrolife,丹麥),放入胚胎時(shí)差培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。于受精后第3天(D3)和第5天(D5)進(jìn)行G2 Plus(Vitrolife,瑞典)半量更換,培養(yǎng)至受精后第6天(D6)。培養(yǎng)條件為37℃、6.2%CO2、5%O2。

5.Time-lapse系統(tǒng)和胚胎評(píng)分:時(shí)差培養(yǎng)箱拍攝平面11層,時(shí)間間隔為10 min。利用Time-lapse圖像分析軟件收集胚胎發(fā)育資料[10],包括各個(gè)細(xì)胞分裂時(shí)間點(diǎn):原核形成(tPNa)、原核消失(tPNf)、2細(xì)胞(t2)、3細(xì)胞(t3)、4細(xì)胞(t4)、5細(xì)胞(t5)、8細(xì)胞(t8),以及特殊分裂模式:DC和RC。2細(xì)胞到3細(xì)胞的發(fā)育時(shí)間cc2=t3-t2,3細(xì)胞到5細(xì)胞的發(fā)育時(shí)間cc3=t5-t3,3細(xì)胞到4細(xì)胞的發(fā)育時(shí)間s2=t4-t3,5細(xì)胞到8細(xì)胞的發(fā)育時(shí)間s3=t8-t5。

D3胚胎卵裂球數(shù)目≥7,胚胎碎片≤20%,且卵裂球均勻者為形態(tài)學(xué)優(yōu)質(zhì)胚胎,此外為非優(yōu)質(zhì)胚胎。囊胚形態(tài)學(xué)評(píng)分采用Gardner評(píng)分體系[11],可利用囊胚為囊胚腔擴(kuò)張≥3期,內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞數(shù)≥B級(jí),滋養(yǎng)層細(xì)胞數(shù)≥C級(jí)。囊胚形成率=可用囊胚數(shù)/卵裂胚胎數(shù)×100%。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

一、納入患者基本情況

本研究共納入46個(gè)周期,459枚成熟卵母細(xì)胞,行ICSI注射后最終獲得335枚卵裂胚胎。納入患者平均年齡為(35.1±4.9)歲,體質(zhì)量指數(shù)(BMI)為(21.3±4.0)kg/m2,不孕年限為(3.4±2.7)年,FSH為(8.0±2.7)U/L,E2為(51.9±26.2)pmol/L、LH為(5.0±3.7)U/L,抗苗勒管激素(AMH)為(4.8±4.1)ng/ml,獲卵數(shù)為(12.4±5.7)枚,成熟卵數(shù)為(10.4±4.7)枚,正常受精數(shù)為(7.7±4.5)枚,形成可利用囊胚數(shù)為(4.4±3.7)枚。

二、MS形態(tài)對囊胚形成的影響

MS正常組囊胚形成率為63.6%,顯著高于MS異常組(46.9%)(P<0.05)(表1)。

表1 MS形態(tài)對囊胚形成的影響(%)

三、胚胎異常分裂模式對囊胚形成的影響

DC1組的囊胚形成率顯著低于DC2組和無DC組(P<0.05);與無RC組比較,RC組的囊胚形率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

表2 異常分裂模式對囊胚形成的影響(%)

四、胚胎形態(tài)學(xué)評(píng)分對囊胚形成的影響

D3形態(tài)學(xué)優(yōu)質(zhì)胚胎的囊胚形成率顯著高于D3形態(tài)學(xué)非優(yōu)質(zhì)胚胎(P<0.05)(表3)。D3形態(tài)學(xué)非優(yōu)質(zhì)胚胎中,卵裂球數(shù)≥6個(gè)的胚胎其囊胚形成率顯著高于卵裂球數(shù)<6個(gè)的胚胎(P<0.05)(表4)。

表3 傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)評(píng)分對囊胚形成的影響(%)

表4 D3非優(yōu)質(zhì)胚胎的卵裂球數(shù)對囊胚形成的影響(%)

五、胚胎動(dòng)力學(xué)參數(shù)對囊胚形成的影響

對于D3形態(tài)學(xué)優(yōu)質(zhì)的胚胎,囊胚組的平均年齡、t2和s3均顯著小于廢棄組(P均<0.05),而t3、t5、cc2和cc3均顯著大于廢棄組(P均<0.05),其余參數(shù)在兩組間差異均無顯著意義(P均>0.05)(表5)。

表5 D3優(yōu)質(zhì)胚胎的囊胚組與廢棄組間年齡及動(dòng)力學(xué)差異(-±s)

對于D3形態(tài)學(xué)非優(yōu)質(zhì)的胚胎,囊胚組的t2顯著小于廢棄組(P<0.05),而年齡、tPNa、tPNf在兩組間差異均無顯著意義(均P>0.05)(表6)。

表6 D3非優(yōu)質(zhì)胚胎的囊胚組與廢棄組間年齡及動(dòng)力學(xué)差異(-±s)

六、影響囊胚形成的多元Logistic回歸分析

在D3形態(tài)學(xué)優(yōu)質(zhì)胚胎中,將t2、t3、t5、cc2、cc3、s3均按照二分位分為兩類,t2、t3、t5、cc2、cc3、s3中位數(shù)分別為24.7、34.6、46.9、10.7、12.8和6.3;年齡根據(jù)高齡分類,分為≥38歲和<38歲兩類;MS按照形態(tài)分為正常和異常兩類,然后將上述參數(shù)進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示年齡、cc3、s3和MS形態(tài)與囊胚形成之間存在相關(guān)(統(tǒng)計(jì)學(xué)參數(shù)分別為OR=2.966,P=0.007;OR=0.240,P=0.017;OR=2.922,P=0.015;OR=2.448,P=0.028)(表7)。

表7 D3形態(tài)學(xué)優(yōu)質(zhì)胚胎囊胚形成率的多元回歸分析

在D3形態(tài)學(xué)非優(yōu)質(zhì)胚胎中,將t2按照二分位分為兩類,其中位數(shù)為28.4;卵裂球數(shù)目分為<6個(gè)卵裂球的胚胎和≥6個(gè)卵裂球的胚胎兩類,然后將上述參數(shù)進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示僅卵裂球數(shù)目對囊胚形成有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=4.161,P=0.003)(表8)。

表8 D3形態(tài)學(xué)非優(yōu)質(zhì)胚胎囊胚形成率的多元回歸分析

七、卵裂期胚胎分層篩選模型的建立

在20枚DC1胚胎中,僅1枚形成可利用囊胚,其囊胚形成率為5.0%。因此,將DC1作為首要排除指標(biāo),將發(fā)生DC1的胚胎定義為K級(jí)。未發(fā)生DC1的胚胎按照D3胚胎形態(tài)學(xué)評(píng)分進(jìn)行篩選,形態(tài)學(xué)優(yōu)質(zhì)胚胎的等級(jí)高于形態(tài)學(xué)非優(yōu)質(zhì)胚胎。在D3形態(tài)學(xué)優(yōu)質(zhì)胚胎中,根據(jù)Logistic回歸分析中3個(gè)意義指標(biāo)的P值大小進(jìn)行逐級(jí)分層選擇,依次為s3、cc3和MS形態(tài)。盡管年齡與該組囊胚形成存在相關(guān),但胚胎篩選的目的是為同一患者胚胎進(jìn)行排序,以選擇最具發(fā)育潛能的胚胎進(jìn)行移植,提高患者的臨床妊娠率,因此建立胚胎篩選模型時(shí)將年齡排除。故,s3≤6.3 h、cc3>12.8 h的胚胎中,MS正常胚胎為A級(jí),MS異常胚胎為B級(jí);s3≤6.3 h、cc3≤12.8 h的胚胎中,MS正常胚胎為C級(jí),MS異常胚胎為D級(jí);s3>6.3 h、cc3>12.8 h的胚胎中,MS正常胚胎為E級(jí),MS異常胚胎為F級(jí);s3>6.3 h、cc3≤12.8 h的胚胎中,MS正常胚胎為G級(jí),MS異常胚胎為H級(jí)。而在D3形態(tài)學(xué)非優(yōu)質(zhì)胚胎中,根據(jù)卵裂球數(shù)目,≥6的為I級(jí),<6的為J級(jí)。故D3胚胎分層篩選模型共分為11等級(jí),A級(jí)為最佳,按字母依次降低,K級(jí)最劣(圖1)。

圖1 D3胚胎分層篩選模型

八、胚胎分層篩選模型的ROC曲線驗(yàn)證

用D3胚胎分層篩選模型進(jìn)行胚胎選擇并賦值,將其與是否形成囊胚作ROC曲線,求出曲線下面積。結(jié)果顯示ROC曲線的曲線下面積為0.857,95%CI為(0.816,0.899),P=0.000(圖2),表明D3胚胎分層篩選模型對囊胚形成有較好的預(yù)測價(jià)值。

圖2 胚胎分層篩選模型對胚胎發(fā)育結(jié)局預(yù)測的ROC曲線

討 論

在對卵裂期胚胎進(jìn)行選擇時(shí),許多生殖中心依然沿用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)評(píng)分,這種分類方法通過特定時(shí)間點(diǎn)的參數(shù)來區(qū)分胚胎優(yōu)劣,其信息是點(diǎn)狀的,不能代表胚胎發(fā)育全貌。因此,我們期望通過增加卵母細(xì)胞和胚胎早期生長發(fā)育過程中的額外關(guān)鍵信息,以獲得更精準(zhǔn)、有效的胚胎選擇方法。Time-lapse不僅可以維持胚胎培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定,而且可以實(shí)時(shí)觀測胚胎生長發(fā)育全過程,捕獲胚胎異常分裂行為。同時(shí),卵母細(xì)胞質(zhì)量也是影響胚胎早期質(zhì)量的關(guān)鍵,紡錘體在胚胎分裂過程中起著重要作用,且大量研究證實(shí)紡錘體形態(tài)與囊胚形成相關(guān)[12-13]。

本研究中DC1的發(fā)生率為6.0%(20/335),其囊胚形成率顯著低于DC2和無DC的胚胎(5.0% vs. 46.7% vs. 63.9%,P<0.05)。以往研究證實(shí)DC可導(dǎo)致分裂過程中染色體分離異常[14]。本研究中發(fā)生DC1的20枚胚胎僅1枚形成囊胚,且為非優(yōu)質(zhì)囊胚。因此,推測DC1可使胚胎發(fā)育潛能受損,故將DC1作為D3胚胎分層篩選模型的首層排除指標(biāo)。

胚胎的形態(tài)學(xué)評(píng)分也是影響囊胚形成的一個(gè)重要指標(biāo)。有研究表明胚胎形態(tài)和發(fā)育階段與胚胎發(fā)育能力密切相關(guān)[15]。本研究中D3形態(tài)學(xué)優(yōu)質(zhì)胚胎的囊胚形成率顯著高于D3形態(tài)學(xué)非優(yōu)質(zhì)胚胎(79.4% vs. 24.6%,P<0.05)?？梢?形態(tài)學(xué)評(píng)分對胚胎發(fā)育潛能的預(yù)測有意義。對于胚胎生長發(fā)育緩慢或碎片較多的胚胎,常常因?yàn)榧?xì)胞分裂時(shí)間點(diǎn)難以評(píng)判或獲得,而導(dǎo)致胚胎動(dòng)力學(xué)參數(shù)標(biāo)記不全。因此,本文在研究動(dòng)力學(xué)對胚胎發(fā)育潛能影響時(shí),將D3胚胎按照形態(tài)學(xué)分類后進(jìn)行。故D3胚胎的形態(tài)學(xué)分類歸為第二層篩選指標(biāo),且優(yōu)質(zhì)胚胎的分級(jí)高于非優(yōu)質(zhì)胚胎。

在D3形態(tài)學(xué)優(yōu)質(zhì)胚胎中,s3、cc3和MS形態(tài)與囊胚形成之間存在相關(guān)(P<0.05),根據(jù)P值大小將s3、cc3和MS形態(tài)作為模型的第一、第二和第三亞篩選參數(shù);而在D3非優(yōu)質(zhì)胚胎中,僅卵裂球數(shù)目與囊胚形成之間存在相關(guān)(P<0.05),故卵裂球數(shù)目為第一亞篩選參數(shù)。由此經(jīng)過逐層篩選,建立了預(yù)測囊胚形成的D3胚胎分層篩選模型,該模型分為A級(jí)～K級(jí)11個(gè)等級(jí),且評(píng)分由A級(jí)到K級(jí)依次遞減。該模型對囊胚形成預(yù)測ROC曲線的曲線下面積為0.857,95%CI為(0.816,0.899),P=0.000,具有較好的預(yù)測價(jià)值。

既往關(guān)于囊胚預(yù)測模型的研究中,Cruz等[4]利用Time-lapse動(dòng)力學(xué)特征,以t5為主要變量,s2為次要變量,將胚胎分為A～D 4個(gè)等級(jí),結(jié)果顯示囊胚形成率由A到D級(jí)分別為77.0%、72.0%、64.9%和53.6%,呈遞減趨勢。該模型中t5和s2(即t4-t3)均為較早期的分裂指標(biāo),但各級(jí)胚胎囊胚形成率之間差異不大。Motato等[5]以tM為主要變量,s3為次要變量,將胚胎分為A～D 4個(gè)等級(jí),結(jié)果顯示囊胚形成率由A到D級(jí)分別為84.4%、75.0%、28.2%和13.8%,呈遞減趨勢。該模型中主要選擇參數(shù)tM是開始形成桑椹胚的時(shí)間,該時(shí)間一般發(fā)生于受精后第4天(D4),出現(xiàn)時(shí)間較晚,進(jìn)而削弱了模型在早期卵裂期胚胎選擇的意義。Yang等[16]以細(xì)胞碎片、DC、RC和細(xì)胞發(fā)育阻滯為主要變量,以tPNF、t2和t4為次要標(biāo)量,將胚胎分為A～D 4個(gè)等級(jí),結(jié)果顯示A、B、C、D級(jí)的囊胚形成率分別為80.0%、77.8%、53.7%和22.2%(P<0.001)。該模型建立在138枚胚胎的小樣本基礎(chǔ)上,且參數(shù)的劃分較粗略,一個(gè)分層選擇涉及多項(xiàng)變量。而本研究將特殊分裂模式DC、形態(tài)學(xué)評(píng)分、動(dòng)力學(xué)評(píng)分和紡錘體形態(tài)評(píng)分聯(lián)合應(yīng)用,模型建立的指標(biāo)分類更為全面。特別是將D3形態(tài)學(xué)優(yōu)質(zhì)和非優(yōu)質(zhì)胚胎的動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行精細(xì)化分類評(píng)估,將那些動(dòng)力學(xué)參數(shù)標(biāo)記不全或動(dòng)力學(xué)參數(shù)評(píng)估模糊的胚胎歸為一類,僅進(jìn)行tPNa、tPNf和t2的評(píng)估。而對于D3形態(tài)學(xué)優(yōu)質(zhì)的胚胎,進(jìn)行全部的胚胎早期細(xì)胞分裂時(shí)間點(diǎn)、細(xì)胞分裂周期和細(xì)胞分裂同步性分析,從而為進(jìn)一步鑒別常規(guī)形態(tài)學(xué)優(yōu)質(zhì)胚胎的等級(jí)找到了評(píng)定指標(biāo)。

另外,本模型中引入了MS形態(tài),且MS形態(tài)與囊胚形成相關(guān),可作為胚胎篩選的參數(shù)。Holubcová等[12]將MS按照形態(tài)分為雙極紡錘體(A級(jí))、畸形/半透明紡錘體(B級(jí))、未見雙折射紡錘體(C級(jí))和微管橋紡錘體(D級(jí))四類,結(jié)果發(fā)現(xiàn)B、C、D級(jí)紡錘體胚胎囊胚形成率顯著低于A級(jí)。Asa等[13]也發(fā)現(xiàn)MS形態(tài)與胚胎形態(tài)呈正相關(guān),且MS形態(tài)不佳的卵母細(xì)胞,其形成的胚胎碎片程度較高。MS改變可能會(huì)引起染色體完整性的改變,促使染色體不分離導(dǎo)致非整倍體,不平衡的染色單體連接產(chǎn)生結(jié)構(gòu)異常,以及染色體缺失,進(jìn)而影響胚胎發(fā)育能力[17]。而Alegre等[18]在胚胎形態(tài)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)上引入胚胎培養(yǎng)液氧化狀態(tài)(H2sm),建立了胚胎質(zhì)量分級(jí)模型(A～F級(jí)),從A級(jí)到F級(jí)種植率在76.5%到29.2%之間,且依次遞減。因此,認(rèn)為形態(tài)學(xué)、動(dòng)力學(xué)和胚胎培養(yǎng)基氧化狀態(tài)相結(jié)合的評(píng)估模型可能有助于改進(jìn)現(xiàn)有的胚胎選擇方法;胚胎形態(tài)動(dòng)力學(xué)與其它指標(biāo)相結(jié)合可用于胚胎選擇模型的建立。

各中心以胚胎形態(tài)動(dòng)力學(xué)為基礎(chǔ)建立的胚胎選擇模型均可有效地預(yù)測本中心胚胎的發(fā)育潛能,但是由于胚胎發(fā)育對環(huán)境條件(如培養(yǎng)液種類、溫度及氣體濃度等)十分敏感[19-21],各中心的選擇參數(shù)不盡相同。因此到目前為止并沒有適用于各實(shí)驗(yàn)室的通用模型。Barrie等[21]根據(jù)已發(fā)表的6個(gè)胚胎選擇模型,對來自884個(gè)治療周期的977枚已知種植結(jié)局的胚胎進(jìn)行回顧性分析,結(jié)果顯示并不能獲得理想的預(yù)測效果,提示這些模型進(jìn)行外部應(yīng)用時(shí)可能會(huì)失去應(yīng)用價(jià)值,因此開發(fā)針對患者、治療和環(huán)境的內(nèi)部模型十分重要。

此外,本研究以是否形成囊胚為模型的最終指標(biāo),而非胚胎種植結(jié)局,是考慮到胚胎能否種植受胚胎質(zhì)量、子宮內(nèi)膜狀態(tài)和患者自身情況等多種因素共同作用;即便整倍體胚胎也會(huì)出現(xiàn)種植失敗的情況。另外,大部分以種植為結(jié)局的研究,并非建立在單胚胎移植基礎(chǔ)上,對于移植兩枚胚胎僅單胎妊娠的患者,會(huì)因無法明確具體種植的胚胎而被排除在統(tǒng)計(jì)之外,進(jìn)而可能會(huì)引起數(shù)據(jù)的嚴(yán)重偏移[22]。

最后,本研究中MS異常卵母細(xì)胞形成的胚胎數(shù)量較少,故MS形態(tài)僅分為正常和異常,實(shí)際上在異常的MS中又可詳細(xì)分為諸如形狀異常、亮度異常和未見紡錘體等。且文章僅將胚胎結(jié)局分為廢棄組和囊胚組,實(shí)際上囊胚組還可細(xì)分為優(yōu)質(zhì)囊胚和非優(yōu)質(zhì)囊胚。因此,本研究可積累數(shù)據(jù)后進(jìn)行進(jìn)一步深入分析。

綜上,本研究中以胚胎形態(tài)學(xué)、動(dòng)力學(xué)聯(lián)合MS形態(tài)分析建立的D3胚胎分層篩選模型,對胚胎發(fā)育潛能具有較好的預(yù)測能力。