改進型胚胎冷凍存放方法對胚胎解凍的影響研究

謝麗松,岳林林,周椿昊（江西省贛州市婦幼保健院,江西 贛州 341000）

隨著近幾年體外受精胚胎移植技術的應用比例不斷攀升，加之部分公眾對生育力保存的需求提高，胚胎冷凍已成為臨床輔助生殖的重要手段之一，其具有保存胚胎及提高累計妊娠率的作用，有利于降低多胎妊娠的發生風險，并且對卵巢過度刺激綜合征的發生有一定的預防效果[1-2]。程序化冷凍和玻璃化冷凍是臨床常用的胚胎冷凍技術，但既往研究[3-5]中證明程序化冷凍存在操作時間長、設備要求高等不足，故在臨床使用中有著較大的局限性。而玻璃化冷凍具有操作時間短、胚胎損傷小等優勢，故現在均采用玻璃化冷凍方法[6]。我科始建于2003年，隨著冷凍胚胎不斷增多，胚胎冷凍管理工作也成為了實驗室工作的重要組成部分。如何高效優質地進行胚胎冷凍管理尤為重要，最開始我科在保存冷凍胚胎時使用鋁制支架，上下塑料套桿，一個支架內存放3-4支載桿，存取過程均需要將支架提取到液氮罐以外的液氮盒內查找需要的載桿，易受外界影響，并且容易影響同支架的其他載桿。自2016年6月起，我科將支架改良為塑料透明側開口支架，一個支架內存放一支載桿，存取過程只看支架頭部編號即可準確無誤存取，不影響其他的載桿，也不易出現錯拿或勾掛其他支架的現象。

1 資料和方法

1.1 一般資料 納入贛州市婦幼保健院生殖與遺傳科2014年6月-2020年6月收治的600例冷凍胚胎進行解凍移植患者的臨床資料展開回顧性分析，所有患者均行玻璃化冷凍，依據冷凍胚胎后儲存方法差異分為改進型支架組（n=300）和傳統型支架組（n=300），具體情況見表1。兩組一般資料對比，差異無統計學意義（P＞0.05），經我院倫理委員會批準后執行本次研究。

表1 兩組一般資料比較()

表1 兩組一般資料比較()

?

1.2 選例標準 納入標準：①患者年齡處于20-40歲之間；②以往具備規律月經周期；③入院胚胎移植前血常規及肝腎檢查無異常；④患者對本次研究的方法、過程及目的均知情且愿意配合。排除標準：①既往存在盆腔臟器手術史或近期服用過糖皮質激素藥物等；②合并嚴重心、肝、腎功能不全或先天性子宮畸形者；③臨床資料缺失者。

1.3 方法 ①兩組均采用玻璃化冷凍，試劑盒為Vitrolife玻璃化冷凍試劑盒，2、3液含有冷凍保護劑（由丙二醇、乙二醇、聚蔗糖組成）。將胚胎使用冷凍載桿裝載，裝入冷凍支架內，之后放入液氮罐中凍存。②兩組均采用玻璃化解凍，試劑盒為Vitrolife玻璃化解凍試劑盒，1、2液含有蔗糖冷凍保護劑。③改進型支架組使用側邊開口的塑料支架，解凍時在唯一編號液氮罐提籃的分區內即可準確挑選出帶有唯一顏色和字母編號的塑料支架（見圖1）。④傳統型支架組采用鋁支架加塑料套管（見圖2），在挑選胚胎時需要將鋁支架提出液氮罐外進行二次挑選，選完將剩余載桿及支架（見圖3）放回液氮罐內。

圖1

圖2

圖3

1.4 觀察指標 ①記錄并比較兩組胚胎存活情況即胚胎解凍存活率。②統計兩組妊娠情況，包括移植周期妊娠率、胚胎種植率、胚胎著床率、流產率、活產率。③比較兩組液氮罐空間利用率、胚胎拿取時間。

1.5 統計學方法 采用SPSS25.0軟件進行數據處理，計數資料用百分比表示，采用χ2檢驗，計量資料均經Shapiro-Wilk正態性檢驗，呈正態分布以表示，組間用獨立樣本t檢驗，偏態分布計量資料用中位數（四分位數）[M（P25，P75）]表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗，P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組胚胎解凍存活情況比較 與傳統型支架組的胚胎解凍存活率93.0%（279/300）比較，改進型支架組的胚胎解凍存活率96.67%（290/300）更高，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 兩組妊娠情況比較 兩組胚胎種植率、胚胎著床率、流產率、活產率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。與傳統型支架組比較，改進型支架組移植周期妊娠率顯著增高，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組妊娠情況比較[n(%)]

2.3 兩組液氮罐空間利用率及胚胎拿取時間比較 與傳統型支架組比較，改進型支架組每個吊桶分三區，每區可放50根，每個吊桶可盛放150根載桿。而傳統型鋁制支架吊桶不分區，可放20根鋁桿。以每桿3-4根載桿計，約放80根載桿；而且相較于傳統型支架需要全部解凍完支架內胚胎才能拿出支架，改進型支架一個載桿一個支架用完則提籃內空間空余可立即填補，大大地提高了液氮罐的空間利用率。傳統型支架拿取時一個支架對應多桿胚胎，必須同時找對支架與載桿，且找到之后還需將剩余胚胎放回原位，而改進型則一個支架對應一桿胚胎，找出后也不需要再放回液氮罐，大大節省了胚胎的拿取時間。本次研究中，改進型支架組的胚胎拿取時間為（7.38±1.69）min，明顯少于傳統型支架組的（11.79±1.72）min，組間差異顯著（P＜0.05）。

3 討論

隨著醫學及科技的日益進步，生殖技術的發展也得到明顯提高，進而使得試管嬰兒也逐漸普遍起來，故將剩余的胚胎進行冷凍及儲藏也是臨床中重要的工作之一[7-8]。傳統的冷凍胚胎儲存方法需要借助鋁制支架及塑料套管進行存放，且其操作過程較為復雜，挑選鋁制支架時容易將旁邊的支架一同帶出，給工作帶來很大不便，特別是取出胚胎時需將整個支架連同其他的載桿拿出液氮罐外進行二次挑選，在實施該操作時可能存在一定的安全隱患，因此臨床上還需尋找一種更加方便且精準的胚胎冷凍儲存方法[9]。基于此，本次研究探討改進型胚胎冷凍存放方法對胚胎解凍的影響，以期為胚胎解凍移植的實施提供可靠的臨床依據。

本次研究顯示：與傳統型支架組比較，改進型支架組胚胎解凍存活率顯著增高，差異有統計學意義；兩組胚胎種植率、胚胎著床率、流產率、活產率比較，差異無統計學意義；與傳統型支架組比較，改進型支架組移植周期妊娠率顯著增高，差異有統計學意義。與傳統型支架組比較，改進型支架組液氮罐空間利用率增高，胚胎拿取時間顯著縮短，差異有統計學意義。改進型胚胎冷凍存放方法采用側邊開口的塑料支架，一個支架存貯一個冷凍載桿，在解凍操作中精準定位，方便查找及提取，避免操作人員操作過程中帶出其他人的胚胎，提高了操作的安全性[10-11]。與改進型支架組比較，傳統型支架會占用較大的存儲空間，需要將同一個儲存單元內所有胚胎解凍完才能提出支架，以備再次使用此空間[12-14]。改進型支架組一支架一載桿，用完一桿空間即可填補空余，液氮罐空間利用率顯著增高，精準定位讓胚胎拿取時間顯著縮短，表明改進型胚胎冷凍存放方法用于胚胎解凍患者可簡化操作步驟，提高液氮罐空間利用率，節約了液氮的用量，節省了冷凍室的面積，同時也節省了工作人員查找胚胎的時間，有效地提高了工作效率，并使得實際工作變得安全、方便[15-16]。

綜上所述，改進型胚胎冷凍存放方法用于胚胎解凍患者不會對圍產結局造成影響，具有較高的臨床價值。但本研究為回顧性分析，仍存在一定不足之處，如樣本選擇存在時間限制，且研究樣本均來源于同一地區，可能會造成結果存在一定偏倚，使研究結論的臨床推廣受到一定限制，因此后續仍需展開多中心研究，以繼續為胚胎移植患者冷凍載桿的選擇提供參考。