彌漫性大B 細胞淋巴瘤組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達量及臨床意義探究

賈光明

（鐘祥市中醫院，湖北 鐘祥 431900）

近年來，彌漫性大B 細胞淋巴瘤（DLBCL）的臨床治療效果得到了顯著提升，但仍有40%左右的患者會出現耐藥，預后較差。研究發現，miR-193a-3p、miR-146b-5p 在胃癌、肝癌等實體腫瘤組織中表達下調，并與病理分期、臨床預后存在明顯的相關性[1]。有研究證實，miR-193a-3p 與DLBCL 細胞惡性生物學行為密切相關，其可靶向負調控髓樣細胞白血病-1，從而抑制DLBCL細胞增殖和遷移，使細胞周期停滯在G2/M 期[2]。本研究旨在探討DLBCL 組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達量及其與淋巴瘤臨床分期的關系。

1 資料與方法

1·1 一般資料

選取2022 年3 月至2023 年2 月我院收治的DLBCL患者76 例，納入DLBCL 組。納入標準：經影像學檢查、病理活檢確診為DLBCL；未接受放化療、免疫治療等臨床治療；臨床資料完整。排除標準：合并其他惡性腫瘤；合并嚴重的心腦血管疾病、免疫系統疾病。入選病例中男40例，女36例，年齡27～78歲，平均（58·27±7·65）歲；淋巴瘤Ann-Arbor 分期：Ⅰ～Ⅱ期42 例，Ⅲ～Ⅳ期34例。選取我院同期收治的淋巴結反應性增生（RHL）患者70 例，納入RHL 組，其中男38 例，女32 例，年齡26 ～79 歲，平均（58·35±7·42）歲。兩組的年齡、性別等一般資料相比差異無統計學意義（P＞0·05），有可比性。

1·2 方法

淋巴組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達水平的檢測方法如下。

1·2·1 總RNA 提取 兩組的淋巴組織標本均通過手術方式獲取。標本獲取后，采用總RNA 提取試劑（Trizol 法）提取總RNA，干燥后溶解于焦碳酸二乙酯水中，采用紫外分光光度計測定RNA 的濃度和純度。

1·2·2 PCR 反應 以總RNA 為模板，使用逆轉錄試劑盒將其反轉錄為cDNA，采用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）儀檢 測miR-193a-3p、miR-146b-5p 的 表 達 水 平。miR-193a-3p、miR-146b-5p、內參基因（U6）序列設計引物（見表1）由上海生工生物技術有限公司合成。qPCR 反應體系包括引物1·6 μL、模板DNA 2 μL、SYBR Premix Ex TaqTM Ⅱ 10 μL、無菌水6·4 μL，合計20 μL。

表1 引物序列設計

1·2·3 擴增條件 95 ℃擴增5 min，95 ℃變性30 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，共40 個循環。

1·2·4 定量計算 各樣本U6、miR-193a-3p、miR-146b-5p 的qPCR反應均設置3個復管，每管測試3 次，最后采用2-△△Ct法計算miR-193a-3p、miR-146b-5p 相對于U6 的表達量。

1·3 觀察指標

觀察并比較兩組的miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達水平。分析DLBCL 組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表達水平與臨床病理特征及臨床分期的關系。

1·4 統計學方法

2 結果

2·1 兩組miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達水平的對比

miR-193a-3p 及miR-146b-5p 在DLBCL 組中的表達水平均低于RHL 組（P＜0·05）。詳見表2。

表2 兩組miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達水平的對比（±s）

表2 兩組miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達水平的對比（±s）

組別 miR-193a-3p miR-146b-5p RHL 組（n=70） 1.51±0.61 2.07±0.62 DLBCL 組（n=76） 0.86±0.27 1.15±0.34 t 值 8.436 10.986 P 值 ＜0.001 ＜0.001

2·2 DLBCL 組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達水平與臨床病理特征的關系

DLBCL 患者淋巴組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表達水平與年齡、性別、腫瘤大小、結外侵犯、淋巴瘤B 癥狀及血清β2-微球蛋白（β2-MG）、乳酸脫氫酶（LDH）水平無關（P＞0·05）；而與Ann-Arbor 分期、國際預后指數（IPI）評分有關，且Ann-Arbor 分期Ⅰ～Ⅱ期、IPI 評分0 ～2 分的DLBCL 患者淋巴組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達水平分別高于Ann-Arbor分期Ⅲ～Ⅳ期、IPI 評分3 ～5 分的患者（P＜0·05）。詳見表3。

表3 DLBCL 組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達水平與臨床病理特征的關系（±s）

表3 DLBCL 組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達水平與臨床病理特征的關系（±s）

注：*組間比較，P ＜0·05。

臨床資料及病理參數 例數 miR-193a-3p miR-146b-5p年齡（歲） ≤60 24 0.88±0.24 1.20±0.41＞60 52 0.84±0.28 1.11±0.32性別 男 40 0.84±0.40 1.10±0.40女36 0.89±0.29 1.21±0.39腫瘤大小（cm） ≤3 35 0.90±0.35 1.30±0.41＞3 41 0.82±0.26 1.04±0.34結外侵犯 否 25 0.88±0.25 1.26±0.41是51 0.84±0.29 1.05±0.36淋巴瘤B 癥狀 有 34 0.87±0.30 1.18±0.40無42 0.85±0.36 1.12±0.25血清β2-MG 升高 21 0.82±0.28 1.06±0.47正常 55 0.90±0.34 1.24±0.42血清LDH 升高 26 0.85±0.26 1.13±0.50正常 50 0.87±0.28 1.17±0.46 Ann-Arbor 分期（期） I ～Ⅱ 42 1.01±0.41* 1.67±0.25*Ⅲ～Ⅳ 34 0.71±0.34 0.63±0.43 IPI 評分（分） 0 ～2 25 1.02±0.45* 1.59±0.51*3 ～5 51 0.70±0.29 0.71±0.16

2·3 DLBCL 組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達水平與臨床分期的關系

經Kendall'stau-b 等級相關系數分析發現，miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達水平與DLBCL 臨床分期呈負相關，隨著miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達水平的降低，DLBCL 臨床分期越高（r=0·726，r=0·519，P＜0·05）。詳見表4。以Ann-Arbo分期為因變量（Ⅰ期=1，Ⅱ期=2，Ⅲ期=3，Ⅳ期=4），以miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達水平為自變量，建立多因素Logistic 回歸模型，以Ⅰ期為參照進行單因素分析，結果顯示DLBCL患者淋巴組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達下調是DLBCL 臨床高分期的危險因子（OR ＞1，P＜0·05）。詳見表5。

表4 不同Ann-Arbor 分期淋巴組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達情況

表5 miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達水平與Ann-Arbor 分期關系的Logistic 回歸分析

3 討論

不同DLBCL 患者的病理組織學形態、遺傳學、免疫表型特征及臨床特征存在明顯差異，臨床預后差別也較大，其中遺傳學因素是影響DLBCL 個體差異的關鍵因素。相關研究指出，B 細胞淋巴瘤的特異性途徑是DLBCL 受遺傳事件影響的重要途徑，主要包括B 細胞分化、B 細胞受體信號及調節細胞增殖、凋亡等[3]。因此，明確DLBCL 的遺傳機制，對本病患者的臨床個體化治療具有重要意義。病理學研究表明，miRNA 在腫瘤細胞的增殖、侵襲、遷移及凋亡等生命周期中具有重要的調節作用，腫瘤細胞的惡性行為對miRNA 存在高度依賴性[4]。國內研究指出，急性髓系白血病患者miR-193a-3p表達下調，對腫瘤細胞增殖、遷移及侵襲具有抑制作用，并能刺激腫瘤細胞凋亡[5]。姜富祥等[6]也發現，骨肉瘤中miR-146b-5p 呈低表達，靶向負調控相關酶的活性，進而抑制腫瘤細胞增殖和克隆形成。但miR-193a-3p、miR-146b-5p 在DLBCL 中的表達情況及與腫瘤生物學行為的關系鮮見報道。本研究結果顯示，miR-193a-3p 及miR-146b-5p 在DLBCL 中的相對表達量均顯著低于RHL，且Ann-Arbor 分期Ⅰ～Ⅱ期、IPI 評分0 ～2 分的DLBCL 患者miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達水平顯著升高，提示二者可能是DLBCL 發病及進展過程中的抑癌基因。

本研究進一步分析發現，隨著miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達水平的降低，DLBCL 的臨床分期越高，且淋巴組織中二者表達下調是DLBCL 臨床高分期的危險因子。提示miR-193a-3p、miR-146b-5p 與DLBCL 的臨床分期密切相關，可作為DLBCL 早期診斷的重要參考指標。其機制可能與miR-193a-3p、miR-146b-5p 對DLBCL 細胞的增殖及遷移可產生抑制作用有關。筆者認為，作為重要的抑癌基因，miR-193a-3p 可通過下調細胞周期素D1 水平而阻滯腫瘤細胞增殖，同時能通過抑制P21 活化激酶4 的活性而阻斷P53/Slug/L1 細胞黏附分子信號通路，最終抑制DLBCL 細胞的侵襲、遷移行為。此外，miR-146b-5p 是膜型基質金屬蛋白酶的關鍵負調控因子，其高表達會誘導MMP-16 的降解，繼而減弱腫瘤細胞的侵襲及遷移能力，故而DLBCL 中miR-146b-5p 低表達能抑制基質金屬蛋白酶的降解，使腫瘤細胞獲得更強的侵襲和遷移能力。

綜上所述，DLBCL組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p表達水平下調，可能參與了DLBCL 的發生、發展，二者的表達水平與DLBCL 的臨床分期有關，可作為DLBCL臨床診治的重要參考依據。