高危型HPV 感染者外周血T 淋巴細胞與陰道微生態的相關性

林美群 張燕霞 吳英標

HPV 是一種具有較強致癌性的球狀DNA 病毒, 其中高危型 HPV 的致癌性更為強烈［1］。已有文獻報道,高危型HPV 的持續性感染是導致子宮頸癌發生的重要原因［2］。并不是所有的 HPV 感染者都會發展成宮頸癌, 部分 HPV 感染者可以通過自身的免疫系統將其清除。因此HPV 感染過程及其發生、發展與機體免疫狀態密切相關。由于女性特有的生理構造, 陰道是一種微生態系統。正常婦女的陰道微生態系統維持著一種穩態, 而這種穩態會對子宮頸造成一定的影響, 導致HPV 感染的發生［3］。HPV 感染與女性陰道微生態及免疫狀況密切相關, 但后者對 HPV 感染的作用機制目前尚不清楚。在此基礎上, 本研究擬采用臨床病例對照,對高危型HPV、非高危型HPV 感染人群的陰道微生態及外周淋巴細胞亞群進行檢測, 旨在為高危型HPV感染者的防治提供新的思路。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2022 年11 月～2023 年4 月收治的90 例生殖道HPV 感染患者。納入標準：①有不同程度的白帶增加、異味、性狀顏色改變、外陰瘙癢等臨床表現；②經實驗室檢查結合臨床檢查確診為HPV感染；③入組前1 個月內未接受相關干預治療；④簽署知情同意書。排除標準：①合并生殖系統器質性疾病；②無性生活史；③合并精神類疾病或其他原因無法配合完成研究；④妊娠或哺乳期女性。經醫院倫理委員會審批后, 根據《婦產科學》［4］中相關標準, 將HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68 共13 種基因型列為高危型, 感染上述13 種HPV 亞型的50 例患者納入試驗組, 感染非高危型HPV亞型的40 例患者納入對照組。試驗組中年齡35～50 歲,平均年齡(41.5±6.1)歲；體質量指數21～27 kg/m2, 平均體質量指數(23.4±2.0)kg/m2。對照組中年齡34～48歲,平均年齡(40.5±5.4)歲；體質量指數20～27 kg/m2, 平均體質量指數(24.0±1.8)kg/m2。兩組患者基線數據差異無統計學意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 采集陰道微生態分泌物的具體方法：常規消毒外陰, 窺陰器暴露陰道, 采用一次性無菌采樣棉拭子采集陰道后穹窿及宮頸分泌物2份, 置于保存管中迅速送檢。使用山東仕達思陰道微生態分析系統進行形態學和功能學檢測。制作濕片, 用高倍數相差顯微鏡動態觀察支原體小體、衣原體小體及滴蟲等病原體；制作干片, 用革蘭染色在油鏡下觀察乳桿菌和其他陰道菌群分布情況, 結合功能學對患者的陰道微生態進行總體評價。這個步驟可以幫助醫生更全面地了解患者陰道內的微生物組成和數量, 從而更準確地診斷和治療疾病。

外周血T 淋巴細胞及亞群送檢至廣州金域醫學檢驗中心分析, 具體為：患者入院后, 采集乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈血 2 ml, 在美國熱電公司(American Technology Corporation)的Pico17 高速離心機(Spico17)下, 以3000 r/min 的轉速進行5 min 的離心,獲得血漿樣品, 并將其放入冰箱保存以待使用。應用美國陶姆遜公司3839 AutoMACSTMPro 多功能流式細胞儀(Flow Flow Cell, 3839)對兩組患者的外周血中CD3+、CD4+和CD8+亞 群 進 行 測 定, 并 計 算CD4+/CD8+。本實驗試劑盒采用德國默克公司的產品, 根據儀器的使用說明及試劑盒的使用方法進行操作。

1.3 觀察指標及判定標準 ①分析HPV 的感染情況以及HPV 亞型分布情況；②陰道菌群陽性情況, 主要為乳酸桿菌、衣原體、解脲支原體和滴蟲；③外周血T 淋巴細胞亞群分布情況, 主要包括CD3+、CD4+和CD8+, 并計算CD4+/CD8+；④Nugent 評分, 陰道微生態總體評價使用Nugent 評分進行, 按陰道內雜菌的數目評分, 0 分表示沒有雜菌, 提示沒有感染性陰道炎風險,評分越高提示雜菌越多, 患感染性陰道炎風險越大, 評分范圍0～8 分, 正常參考范圍0～3 分, ≥7 分則提示感染性陰道炎。

1.4 統計學方法 使用SPSS18.0 計學軟件對研究數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示, 采用t 檢驗；計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。相關性分析使用Pearson 檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV 感染情況分布 試驗組患者中HPV16 型有19 例, 占38.00%；HPV18 型14 例, 占28.00%；HPV52 型 有8 例, 占16.00%；HPV31 型 有8 例, 占16.00%；HPV56 型1 例, 占2.00%。對照組患者中HPV42 型有16 例, 占40.00%；HPV43 型有6 例, 占32.50%；HPV11 型有4 例, 占10.00%；HPV6 型有4 例,占10.00%；HPV81 型有3 例, 占7.50%。

2.2 外周血T 淋巴細胞亞群分布情況 試驗組患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于對照組患者, CD8+高于對照組患者, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組患者外周血T 淋巴細胞亞群分布情況比較( ±s)

表1 兩組患者外周血T 淋巴細胞亞群分布情況比較( ±s)

注：與對照組比較, aP＜0.05

組別 例數 CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+試驗組 50 47.52±4.52a 45.20±3.47a 32.98±2.57a 1.37±0.33a對照組 40 55.68±4.05 51.62±4.31 25.71±3.25 2.01±0.40 t-8.908 -7.831 11.854 -8.318 P 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 陰道菌群陽性率及Nugent 評分 試驗組患者陰道內乳酸桿菌陽性率低于對照組患者, 衣原體、解脲支原體、滴蟲陽性率及Nugent 評分高于對照組患者,差異具有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 兩組患者陰道菌群陽性率及Nugent 評分比較［n(%), ±s］

表2 兩組患者陰道菌群陽性率及Nugent 評分比較［n(%), ±s］

注：與對照組比較, aP＜0.05

組別 例數 乳酸桿菌 衣原體 解脲支原體 滴蟲 Nugent 評分(分)試驗組 50 17(34.00)a 44(88.00)a 42(84.00)a 45(90.00)a 7.85±1.20a對照組 40 22(55.00) 24(60.00) 22(55.00) 20(50.00) 6.84±0.64 χ2/t 3.991 9.433 9.097 17.723 4.801 P 0.046 0.002 0.003 0.000 0.000

2.4 Nugent 評分與外周血T 淋巴細胞亞群的相關性 分 析 兩 組 患 者Nugent 評 分 均 與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈負相關, 與CD8+呈正相關(P＜0.05)。見表3。

表3 Nugent 評分與外周血T 淋巴細胞亞群的相關性分析

3 討論

HPV 是一種具有高度傳染性的 DNA 病毒, 其具有較強的致癌性, 超過90%的宮頸癌患者都會合并高危型 HPV 感染［5］。目前已知的 HPV 亞型有200 余種,其中40 余種具有高度致癌性。根據 HPV 所致宮頸損傷的嚴重性, 可將 HPV 亞型分為高、中、低3 種, 其中高危型主要有HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56 、HPV58、HPV59 及HPV68 等［6］；中、低風險的HPV亞型則可納入非高危型。在本次調查中, 宮頸癌高危型 HPV 感染的主要亞型是HPV16 型, 占38.00%, 其次為HPV18 型 和HPV52 型, 分 別 占28.00%和16.00%,這與以往的研究結果［7］相吻合。

本研究發現, 試驗組患者的乳酸桿菌陽性率較對照組明顯降低, 而衣原體、解脲支原體及滴蟲陽性率較對照組高(P＜0.05), 提示陰道菌群失衡與HPV 感染相關, 但具體機制目前尚不清楚。在陰道和腸道中, 乳酸桿菌是一種正常的菌群, 其能抑制體內有害微生物的生長和繁殖。有研究發現, 乳酸桿菌能夠激活腔道內的黏膜免疫系統, 從而提高人體的免疫功能, 同時,乳酸桿菌還具有抗腫瘤細胞的功效, 在陰道中生長的正常乳酸桿菌還可以預防陰道癌、宮頸癌等疾病［8］。有國外學者研究證實, 在HPV 感染的人群中, 乳酸桿菌的表達水平明顯降低, 提示在HPV 感染的高危人群中, 因乳酸桿菌的缺失, HPV 的感染率明顯升高［9］。而厭氧細菌和衣原體、解脲支原體及滴蟲的檢出率較高, 其對陰道及子宮頸黏膜的損害程度較大, 也會導致HPV 感染風險升高［10］。

本研究結果證實, 試驗組外周血T 細胞亞群中CD3+、CD4+及CD4+/CD8+較對照組明顯降低, 而CD8+則明顯升高(P＜0.05), 提示高危型HPV 感染患者的免疫功能有所下降。正常的免疫機能可起到免疫監控作用, 對生殖系統的致病微生物進行清除, 而在免疫功能下降的情況下, 對多種有害物質的監控清除能力 下降, 導 致HPV 感染［11］。CD3+、CD4+和CD8+是反應人體免疫狀況的關鍵［12-15］。Nugent 評分是按陰道內雜菌的數目來評分的標準, 反映陰道微生態總體情況［16,17］。Nugent 評分與高危型HPV 的外周血T細胞亞群中CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+都有顯著負相關性, 而與CD8+有顯著的正相關性。本研究結果顯示, 無論對于高危型HPV 感染者還是非高危型HPV 感染者, Nugent 評分均與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈負相關, 與CD8+呈正相關(P＜0.05), 提示陰道微生態與外周血液中T 細胞亞群數量可能存在著密切關系, 二者可能通過相互作用, 共同參與宮頸高危型HPV 感染的發生和進展過程［18-20］。

綜上所述, 高危型HPV 感染者的全身免疫功能相對低下, 導致發生陰道菌群紊亂的風險增加, 糾正患者的免疫功能低下及陰道微生態狀態均有利于提升宮頸高危型HPV 感染的治療效果, 改善患者預后。