應(yīng)用ＳＴＲ 熒光標(biāo)記分析煙臺(tái)地區(qū)草莓種質(zhì)資源遺傳多樣性

李愷睿 史慶瑤 樊銘璽 譚浩然 陳曉峰

摘要：本研究以煙臺(tái)地區(qū)１ 份野生草莓種質(zhì)和６ 份常規(guī)栽培品種為試材，選取已發(fā)表具有擴(kuò)增多態(tài)性的１１ 對(duì)ＳＴＲ 熒光標(biāo)記引物進(jìn)行擴(kuò)增，采用多重?zé)晒饷?xì)管電泳檢測(cè)，分析了該地區(qū)草莓種質(zhì)的遺傳多樣性，并構(gòu)建了其分子身份證。 結(jié)果表明，用這１１ 對(duì)引物從７ 份草莓種質(zhì)中共檢測(cè)到６０ 個(gè)ＳＴＲ 等位基因位點(diǎn)，平均每對(duì)引物５.４５ 個(gè)，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度在９０～２７０ ｂｐ 之間，多態(tài)信息含量平均為０.６７６，可用于草莓種質(zhì)的多態(tài)性檢測(cè)。 聚類分析顯示７ 份草莓種質(zhì)間的遺傳相似系數(shù)為０.０７７～０.８４２，在遺傳相似系數(shù)為０.２５７時(shí)，７ 份種質(zhì)被分為３ 個(gè)類群，Ｗ１（野生草莓）與Ｓ２（豐香種質(zhì)）同源性較高。 對(duì)７ 份草莓種質(zhì)進(jìn)行不同等位基因編碼，構(gòu)建了分子身份證。 本研究結(jié)果可為煙臺(tái)地區(qū)草莓種質(zhì)資源鑒定、保護(hù)和開發(fā)利用提供重要依據(jù)。

關(guān)鍵詞：ＳＴＲ 熒光標(biāo)記；草莓；遺傳多樣性；聚類分析；分子身份證；煙臺(tái)地區(qū)

中圖分類號(hào)：Ｓ６６３.９０３文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：Ａ文章編號(hào)：１００１－４９４２（２０２４）０１－００４３－０７

草莓（Ｆｒａｇａｒｉａ × ａｎａｎａｓｓａ Ｄｕｃｈ.）為薔薇科草莓屬草本植物，是栽培最多的小漿果，果實(shí)酸甜可口，栽培經(jīng)濟(jì)效益高，廣泛受到消費(fèi)者和生產(chǎn)者的青睞[１－３] 。 栽培草莓于２０ 世紀(jì)初引入我國(guó)，截至２０１８ 年底，種植面積已達(dá)１７.３ 萬(wàn)ｈｍ２，年產(chǎn)量超過(guò)５００ 萬(wàn)ｔ，我國(guó)已超越美國(guó)成為世界第一草莓生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)[４] 。 我國(guó)的草莓主栽品種多為引進(jìn)種，存在不適應(yīng)當(dāng)?shù)卦耘鄺l件的問(wèn)題，在抗病性、抗寒性方面存在明顯不足，而野生草莓（Ｆｒａ￣ｇａｒｉａ ｖｅｓｃａ Ｌ.）在抗性方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，可用作抗性育種的親本。 開展草莓種質(zhì)資源研究具有重要意義， 可為草莓品質(zhì)改良提供豐富的資源庫(kù)[５－１０] 。

分子標(biāo)記法是一種可以在ＤＮＡ 水平上直接體現(xiàn)種質(zhì)資源多態(tài)性的分析方法，具有多態(tài)性高、不受環(huán)境因素影響的優(yōu)點(diǎn)，已成為種質(zhì)資源遺傳多樣性研究的重要手段[１１－１３] 。 早期應(yīng)用于草莓的擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ， ＡＦＬＰ）[１４] 、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性ＤＮＡ（ ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡｓ，ＲＡＰＤ）[１５] 分子標(biāo)記存在技術(shù)繁瑣、重復(fù)率差的問(wèn)題， 而短串聯(lián)重復(fù)序列（ ｓｈｏｒｔ ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔ，ＳＴＲ），又名簡(jiǎn)單重復(fù)序列（ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅ￣ｐｅａｔ， ＳＳＲ），具有擴(kuò)增穩(wěn)定、準(zhǔn)確、共顯性、簡(jiǎn)單便捷的特點(diǎn)[１６－１８] ，近年來(lái)在草莓種質(zhì)資源研究中的應(yīng)用日益增多。 黃志城等[１９] 篩選出２０ 對(duì)多態(tài)性高的引物，基于ＳＳＲ 分子標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建了９６ 份草莓種質(zhì)的ＤＮＡ 指紋圖譜庫(kù)；陳堅(jiān)等[２０] 利用ＳＳＲ 分子標(biāo)記對(duì)福建主栽的以及引進(jìn)的１１ 個(gè)草莓種質(zhì)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)聚類結(jié)果與種質(zhì)地理來(lái)源有高度相關(guān)性；刁霞[２１] 利用ＥＳＴ－ＳＳＲ 分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)采自中國(guó)西南地區(qū)的野生黃毛草莓種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析，結(jié)果表明１６ 個(gè)黃毛草莓群體有較為顯著的遺傳變異。 目前，我國(guó)對(duì)于草莓種質(zhì)資源遺傳多樣性的研究多集中于栽培種，對(duì)野生種的研究不足。

２０２２ 年，我們從山東省海陽(yáng)市招虎山采集到一份耐寒性強(qiáng)的野生草莓種質(zhì)，為了深入開發(fā)利用該種質(zhì)，本研究利用ＳＴＲ 熒光標(biāo)記法，分析了其與６ 份煙臺(tái)地區(qū)主栽草莓品種的遺傳多樣性，并構(gòu)建了它們的分子身份證，以期為煙臺(tái)地區(qū)草莓種質(zhì)資源保護(hù)和開發(fā)利用提供參考。

１ 材料與方法

１.１ 試驗(yàn)材料

供試野生草莓種質(zhì)（ Ｆｒａｇａｒｉａ ｖｅｓｃａ Ｌ.） 于２０２２ 年采自海陽(yáng)市招虎山，該野生種質(zhì)匍匐莖較細(xì)，節(jié)間長(zhǎng)，葉橢圓形、深綠色、較薄，具有較強(qiáng)耐寒性，果實(shí)近球形、紅色、直徑０.５～１.０ ｃｍ。 ６ 份栽培品種為煙臺(tái)地區(qū)設(shè)施主栽品種。 ７ 份種質(zhì)均定植在中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)煙臺(tái)研究院日光溫室中，具體信息見表１。

１.２ 試驗(yàn)方法

１.２.１ ＤＮＡ 提取 采用Ｅｚｕｐ 柱式植物基因組ＤＮＡ 抽提試劑盒（ＥＺ－１０ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍｎ Ｐｌａｎｔ Ｇｅ￣ｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ，上海生工生物工程股份有限公司） 提取草莓葉片ＤＮＡ。 對(duì)提取出的ＤＮＡ 樣本用１.２％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)量，用超微量分光光度計(jì)檢測(cè)樣本的濃度和純度，經(jīng)檢測(cè)，ＯＤ２６０ / ＯＤ２８０值為１.９２，在１.８～２.０ 之間，符合實(shí)驗(yàn)要求。 將ＤＮＡ 樣本稀釋至２５ ｎｇ/ μＬ，置于－２０ ℃冰箱保存，用于后續(xù)的擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。

１.２.２ ＳＴＲ－ＰＣＲ 反應(yīng)體系的建立 從已發(fā)表文獻(xiàn)中選出被證實(shí)具有多態(tài)性擴(kuò)增結(jié)果的１１ 對(duì)引物（表２）進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，并使用不同熒光標(biāo)記對(duì)１１ 對(duì)引物的正向５′端進(jìn)行修飾，其中，引物ＳＴ１、ＳＴ３、ＳＴ５、ＳＴ７、ＳＴ８、ＳＴ１０ 使用ＦＡＭ（藍(lán)色）熒光標(biāo)記，引物ＳＴ２、ＳＴ４、ＳＴ６、ＳＴ９、ＳＴ１１ 使用ＨＥＸ（綠色）熒光標(biāo)記。

ＳＴＲ－ＰＣＲ 反應(yīng)體系為２５ μＬ，包括模板ＤＮＡ１ μＬ，正、反向引物（１０ μｍｏｌ/ Ｌ）各０.５ μＬ，ｄＮＴＰ（５ μｍｏｌ/ Ｌ） ０.５ μＬ，１０ ×Ｔａｑ Ｂｕｆｆｅｒ（ＭｇＣｌ２ ） ２.５μＬ，Ｔａｑ 酶（５ Ｕ/ μＬ）０.２ μＬ，ｄｄＨ２ Ｏ １９.８ μＬ。 反應(yīng)程序：９５ ℃預(yù)變性５ ｍｉｎ；９４ ℃變性３０ ｓ，６０ ℃退火３０ ｓ，７２ ℃延伸３０ ｓ，１０ 個(gè)循環(huán)；９４ ℃ 變性３０ ｓ，５５ ℃退火３０ ｓ，７２ ℃延伸３０ ｓ，３０ 個(gè)循環(huán)；７２ ℃修復(fù)延伸１０ ｍｉｎ。 電泳檢測(cè)：加１.５％瓊脂糖于１×ＴＡＥ 溶液中，用４Ｓ Ｒｅｄ Ｐｌｕｓ 染色，點(diǎn)入樣品，在１１０ Ｖ、１００ ｍＡ 條件下電泳２０ ｍｉｎ。

１.２.３ 毛細(xì)管電泳檢測(cè) 將分子量?jī)?nèi)標(biāo)（ＬＩＺ５００）和去離子甲酰胺（ＨＩＤＩ）按１∶９９ 的體積比混合，共１ ０００ μＬ；將混合液加到９６ 孔反應(yīng)板中，每孔１０ μＬ；將反應(yīng)板迅速置于平板離心機(jī)中，１ ２００ｒ/ ｍｉｎ 離心１５ ｓ；在各孔板中加入１ μＬ 樣品，１ ２００ ｒ/ ｍｉｎ 離心１５ ｓ；使用封板膜密封９６ 孔板，振蕩后置于離心機(jī)中，１ ２００ ｒ/ ｍｉｎ 離心３０ ｓ，置于ＰＣＲ 儀中；９８ ℃變性５ ｍｉｎ，ＰＣＲ 反應(yīng)程序結(jié)束后立即置于冰水混合物上急速冷卻，待冷卻后置于平板離心機(jī)中，１ ２００ ｒ/ ｍｉｎ 離心１５ ｓ，使用ＡＢＩ３７３０ ＸＬ 型ＤＮＡ 分析儀檢測(cè)，進(jìn)行電泳分析。

１.２.４ 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 根據(jù)毛細(xì)管電泳結(jié)果，人工讀取指紋圖譜，并將指紋圖譜轉(zhuǎn)化為０、１ 矩陣，運(yùn)用ＤａｔｅＦｏｒｍａｔｅｒ 將矩陣轉(zhuǎn)換成相關(guān)軟件可以識(shí)別的格式，利用ＰｏｐＧｅｎ３２ 軟件計(jì)算觀測(cè)等位基因數(shù)（Ｎａ）、有效等位基因數(shù)（Ｎｅ）、Ｓｈａｎｎｏｎｓ信息指數(shù)（Ｉ）、觀測(cè)雜合度（Ｈｏ）、期望雜合度（Ｈｅ）、Ｎｅｉｓ 基因多樣性指數(shù)（Ｎｅｉｓ），利用Ｐｏｗ￣ｅｒ Ｍａｒｋｅｒ Ｖ３.２５ 軟件計(jì)算多態(tài)信息含量（ＰＩＣ），同時(shí)利用ＮＴＳＹＳｐｃ ２.１０ 軟件計(jì)算７ 份草莓種質(zhì)間的遺傳相似系數(shù)，最后繪制ＵＰＧＭＡ 聚類圖。

１.２.５ 分子身份證構(gòu)建 參照唐玉娟等[２６] 的方法，將每對(duì)引物檢測(cè)出的等位基因按ｂｐ 值從小到大順序排列，用阿拉伯?dāng)?shù)字１～９ 依次賦值，超過(guò)９的從英文字母Ａ 開始賦值，將每份種質(zhì)經(jīng)１１ 對(duì)引物檢測(cè)出的等位基因按照賦值編碼表賦值并串聯(lián)，得到２２ 位特有的字符串，即為該種質(zhì)的分子身份證。

２ 結(jié)果與分析

２.１ ＳＴＲ 標(biāo)記結(jié)果多態(tài)性分析

用１１ 對(duì)引物對(duì)７ 份草莓種質(zhì)進(jìn)行擴(kuò)增，共檢測(cè)到等位基因６０ 個(gè)，各對(duì)引物檢出等位基因數(shù)在２～１０ 個(gè)之間，平均每對(duì)引物５.４５５ 個(gè)，其中，引物ＳＴ８ 檢出的等位基因數(shù)最多，ＳＴ１、ＳＴ６、ＳＴ７ 次之，ＳＴ２ 檢出的等位基因數(shù)最少（表３）。 每個(gè)引物的有效等位基因數(shù)介于２.０００～８.１６７ 之間，平均為４.２５５；Ｓｈａｎｎｏｎｓ 信息指數(shù)介于０.６９３ ～ ２.２０６ 之間，平均為１.４７３；觀測(cè)雜合度介于０.０００ ～ １.０００之間，平均為０.６６４；期望雜合度介于０.６４８～０.９４５之間，平均為０.７９３；Ｎｅｉｓ 基因多樣性指數(shù)介于０.５００～０.８７８ 之間，平均０.７２３；引物多態(tài)信息含量值介于０.３７５～０.８６６ 之間，平均為０.６７６，證明所選引物的多態(tài)性良好，可以用于草莓種質(zhì)的多態(tài)性檢測(cè)。 圖２ 為用熒光引物ＳＴ１ 擴(kuò)增的毛細(xì)管電泳圖譜。

２.２ 草莓種質(zhì)間遺傳關(guān)系聚類分析

根據(jù)毛細(xì)管電泳結(jié)果讀取擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度，構(gòu)成７ 份草莓種質(zhì)的指紋圖譜（表４），將其轉(zhuǎn)化為０、１ 矩陣，用ＤａｔａＦｏｒｍａｔｅｒ 將０、１ 矩陣轉(zhuǎn)化為ＮＴ￣ＳＹＳｐｃ ２.１０ 軟件可以識(shí)別的格式，計(jì)算不同種質(zhì)之間的遺傳相似系數(shù)（表５），并構(gòu)建遺傳聚類圖（圖２）。

７ 份草莓種質(zhì)的遺傳相似系數(shù)為０.０７７～０.８４２（表５）。 在遺傳相似系數(shù)為０.２５７ 時(shí)，７ 份種質(zhì)被分為３ 個(gè)類群，Ⅰ類群包括白雪和天使２ 份白草莓種質(zhì)，占總數(shù)的２８.６％；Ⅱ類群包括日本培育的紅顏、寧玉、章姬３ 份種質(zhì)，占總數(shù)的４２.９％；Ⅲ類群包含豐香和野生種２ 份種質(zhì)。 在遺傳相似系數(shù)為０.４４１ 時(shí)，Ⅱ類群又可被分為２ 個(gè)亞群，Ⅱ－１亞群包括紅顏、章姬２ 份種質(zhì)，其中章姬為紅顏的育種母本，而Ⅱ－２ 亞群僅寧玉１ 份種質(zhì)。 可見，具有相同果實(shí)顏色的種質(zhì)被聚到一起，野生種質(zhì)和豐香親緣關(guān)系較近。

２.３ 草莓種質(zhì)分子身份證構(gòu)建

將１１ 對(duì)引物按照擴(kuò)增獲得的等位基因數(shù)量從多到少排列，若有２ 對(duì)及以上的引物具有相同的等位基因數(shù)量，則按照最小片段的大小進(jìn)行排列，如本研究中引物ＳＴ４ 和ＳＴ５ 均檢測(cè)出６ 個(gè)等位基因，但引物ＳＴ４ 的最小片段為１１１ ｂｐ，小于引物ＳＴ５ 的最小片段１６３ ｂｐ，故引物ＳＴ４ 排在第５位，ＳＴ５ 排在第６ 位。 再將各引物的等位基因按照從小到大的順序排列，并從阿拉伯?dāng)?shù)字１ 開始賦值，大于９ 的部分從英文大寫字母Ａ 開始賦值，缺失條帶記為０。 將每份種質(zhì)讀取到的等位基因片段按照表６ 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行賦值，以種質(zhì)Ｓ４ 為例，其在１１ 個(gè)位點(diǎn)獲得的等位基因分別為１１９/１８９、１４５/１５４、１７７/１８８、２４９/２７０、１１６/１２３、１６３/１６８、１５５/１５７、１３５、１６９、２４８、１３９，對(duì)應(yīng)賦值分別為５Ａ、１４、１２、４７、３５、１４、２３、４４、１１、２２、２２，得到其分子身份證為５Ａ１４１２４７３５１４２３４４１１２２２２。 依此類推，獲得每份種質(zhì)的分子身份證，見表７。 可見，１１ 對(duì)熒光引物可以完全區(qū)分開７ 份草莓種質(zhì)。

３ 討論與結(jié)論

物種遺傳多樣性的開發(fā)是改良現(xiàn)有種質(zhì)的基礎(chǔ)，研究技術(shù)和手段對(duì)遺傳多樣性評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確性有很大影響。 相較于表型性狀研究，分子標(biāo)記在基因水平上反映了不同種質(zhì)的遺傳差異。 ＳＴＲ 熒光標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)結(jié)合了ＳＴＲ 技術(shù)和熒光檢測(cè)技術(shù)的特點(diǎn)，解決了傳統(tǒng)的聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)檢測(cè)精度低和效率低的問(wèn)題[２３] ，近年來(lái)該技術(shù)在蘋果[２７] 、梨[２８] 、歐李[２９] 等植物上得到了廣泛應(yīng)用。 本研究選?。保?對(duì)ＳＴＲ 引物對(duì)煙臺(tái)地區(qū)１ 份野生種質(zhì)和６ 份栽培品種進(jìn)行分子標(biāo)記，平均各對(duì)引物檢測(cè)位點(diǎn)５.４５ 個(gè)，引物的多態(tài)性良好，該結(jié)果與李靜[２３] 的研究結(jié)果相符，檢測(cè)位點(diǎn)數(shù)符合實(shí)驗(yàn)預(yù)期。 多態(tài)信息含量（ＰＩＣ）是衡量標(biāo)記多態(tài)性的指標(biāo)，可用于反映基因的多樣性，高度多態(tài)基因座的標(biāo)準(zhǔn)為ＰＩＣ>０.５[３０] 。 本研究選取的１１ 對(duì)熒光引物中，１０ 對(duì)熒光引物的ＰＩＣ>０.５，即９０.９％的引物為高度多態(tài)性位點(diǎn)。

分子身份證可以將指紋圖譜轉(zhuǎn)化為由數(shù)字和字母組成的字符串，并根據(jù)字符串生成可供快速識(shí)別的條形碼或二維碼，可以快速便捷地鑒別種質(zhì)[３１] 。 目前國(guó)內(nèi)尚未見有關(guān)草莓分子身份證的研究，本研究根據(jù)毛細(xì)管電泳結(jié)果人工讀取指紋圖譜并編碼賦值，構(gòu)建了煙臺(tái)地區(qū)７ 份草莓種質(zhì)的分子身份證，為草莓種質(zhì)的準(zhǔn)確鑒別提供了依據(jù)。

本研究建立了７ 份草莓種質(zhì)的聚類分析圖，種質(zhì)遺傳相似系數(shù)范圍為０.０７７～０.８４２，低于韓柏明等[３２] 研究中草莓種質(zhì)的遺傳相似系數(shù)（０.６２ ～１.００），說(shuō)明這７ 份草莓種質(zhì)間的親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)，這可能與所選引物數(shù)量較少且針對(duì)單一性狀有關(guān)。 從聚類結(jié)果來(lái)看，具有相似性狀的種質(zhì)（白雪、天使）被聚到一類，引自日本的３ 份種質(zhì)（寧玉、紅顏、章姬）被聚到一類，但具有同樣親本的種質(zhì)（紅顏、寧玉）遺傳相似系數(shù)較小（０.４７１），沒有歸到同一亞類中。 該結(jié)果可能與栽培草莓遺傳基礎(chǔ)狹窄、栽培發(fā)展時(shí)間較短、人工選擇因素有關(guān)[３３] 。 野生種質(zhì)雖然與豐香聚到一類，但兩者遺傳相似系數(shù)（０.２９６）較小，說(shuō)明該野生種質(zhì)具有獨(dú)特于栽培種質(zhì)的遺傳特性。

煙臺(tái)市是我國(guó)重要的果蔬生產(chǎn)基地，草莓種植面積約０.６６７ 萬(wàn)公頃，占山東省草莓種植面積的１/５[３４－３６] 。 但目前對(duì)煙臺(tái)地區(qū)草莓種質(zhì)的相關(guān)研究不足，尤其對(duì)當(dāng)?shù)匾吧葺N質(zhì)資源的研究尚屬空白。 野生種質(zhì)資源中往往存在大量抗性基因，可通過(guò)遠(yuǎn)緣雜交用于培育抗性強(qiáng)的新品種，對(duì)草莓栽培種質(zhì)改良和新品種選育有重要意義[３７－４０] 。 本研究首次對(duì)煙臺(tái)地區(qū)１ 份野生種質(zhì)和６ 份栽培種質(zhì)進(jìn)行ＳＴＲ 分子標(biāo)記分析，構(gòu)建了各種質(zhì)的分子身份證，有助于當(dāng)?shù)夭葺贩N鑒定和拓寬草莓遺傳基礎(chǔ)[４１] 。 煙臺(tái)地區(qū)野生草莓具有抗性強(qiáng)、遺傳特性獨(dú)立的特點(diǎn)，可為培育更多優(yōu)質(zhì)的草莓新品種提供優(yōu)良的種質(zhì)資源。

參 考 文 獻(xiàn)：

[１] 吳曉云，高照全，李志強(qiáng)，等. 國(guó)內(nèi)外草莓生產(chǎn)現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)[Ｊ]. 北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，２０１６，３０（２）：２１－２６.

[２] 姜莉莉，田中一久，盧小永，等. 我國(guó)草莓用農(nóng)藥登記現(xiàn)狀分析[Ｊ]. 生物災(zāi)害科學(xué)，２０２１，４４（２）：１５９－１６２.

[３] 舒銳，焦健，臧傳江，等. 我國(guó)草莓產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及發(fā)展建議[Ｊ].中國(guó)果菜，２０１９，３９（１）：５１－５３.

[４] 武沖，姜莉莉，宗曉娟，等. 中國(guó)草莓育種研究進(jìn)展[Ｊ]. 落葉果樹，２０２２，５４（２）：２８－３０.

[５] 陳潔，劉田田，徐雪平，等. 草莓品種資源和遺傳育種研究進(jìn)展[Ｊ]. 福建農(nóng)業(yè)，２０１４（９）：３１－３３.

[６] 侯麗媛，張春芬，聶園軍，等. 草莓品種及其選育方法研究進(jìn)展[Ｊ]. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，２０１７，４５（１２）：２０３８－２０４３.

[７] 王建輝，李洪雯，劉建軍. 利用野生種質(zhì)進(jìn)行草莓香味改良研究進(jìn)展[Ｊ]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，２０１６，３２（２２）：１８９－１９３.

[８] 雷家軍，代漢萍，譚昌華，等. 中國(guó)草莓屬（Ｆｒａｇａｒｉａ）植物的分類研究[Ｊ]. 園藝學(xué)報(bào)，２００６，３３（１）：１－５.

[９] 趙密珍，王靜，袁華招，等. 草莓育種新動(dòng)態(tài)及發(fā)展趨勢(shì)[Ｊ].植物遺傳資源學(xué)報(bào)，２０１９，２０（２）：２４９－２５７.

[１０] 董晨星. 草莓種質(zhì)資源生物學(xué)鑒定及對(duì)激素的反應(yīng)[Ｄ].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，２０２０.

[１１] 忻雅，方獻(xiàn)平，王淑珍，等. 簡(jiǎn)單重復(fù)序列標(biāo)記和序列相關(guān)擴(kuò)增多態(tài)性標(biāo)記在草莓遺傳多樣性分析中的比較[Ｊ]. 浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），２０１９，４５（３）：２７８－２８７.

[１２] 張鵬，曾祥國(guó)，韓永超，等. 草莓新品種‘晶玉抗炭疽病相關(guān)的生理生化指標(biāo)分析[Ｊ]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，２０１５，３１（３４）：１９７－２０２.

[１３] 李志強(qiáng)，吳超，宮麗丹，等. 澳洲堅(jiān)果優(yōu)良單株的ＤＮＡ 分子標(biāo)記鑒定[Ｊ]. 熱帶農(nóng)業(yè)科技，２０２３，４６（１）：７－１０，１４.

[１４] 張運(yùn)濤，馮志廣，李天忠，等. 草莓品種親緣關(guān)系的ＡＦＬＰ 分子標(biāo)記分析[Ｊ]. 園藝學(xué)報(bào)，２００６，３３（６）：１１９９－１２０２.

[１５] 王志剛，張志宏，李賀，等. 利用ＲＡＰＤ 和ＳＣＡＲ 標(biāo)記鑒定草莓品種[Ｊ]. 園藝學(xué)報(bào)，２００７，３４（３）：５９１－５９６.

[１６] Ｓｏｎｇ Ｘ Ｙ， Ｚｈａｎｇ Ｃ Ｚ， Ｌｉ Ｙ， ｅｔ ａｌ. ＳＳＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉ￣ｖｅｒｓｉｔｙ ａｍｏｎｇ １９２ ｄｉｐｌｏｉｄ ｐｏｔａｔｏ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ[ Ｊ]. ＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌＰｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ， ２０１６， ２（３）： １６３－１７１.

[１７] Ｏｕｎｉｉ Ｒ， Ｚｂｏｒｏｗｓｋａ Ａ， Ｓｅｈｉｃ Ｊ， ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｔｕｎｉｓｉａｎ ｌｏｃａｌ ｐｅａｒ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ａｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ＳＳＲｍａｒｋｅｒｓ[Ｊ]. Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ， ２０２０， ６（２）： ６１－７０.

[１８] 呂偉，韓俊梅，任果香，等. 山西芝麻種質(zhì)資源ＳＳＲ 遺傳多樣性及群體結(jié)構(gòu)分析[Ｊ]. 核農(nóng)學(xué)報(bào)，２０２１，３５（７）：１４９５－１５０６.

[１９] 黃志城，石敬韡，龐夫花，等. 基于ＳＳＲ 標(biāo)記的草莓品種ＤＮＡ 指紋圖譜的構(gòu)建及應(yīng)用[Ｊ]. 分子植物育種，２０１７，１５（８）：３０９７－３１１６.

[２０] 陳堅(jiān)，鄭益平，郭文杰，等. 福建省草莓主栽與引進(jìn)品種的ＳＳＲ 分子標(biāo)記鑒定[Ｊ]. 福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，２０１８，３３（２）：１５０－１５３.

[２１] 刁霞. 黃毛草莓（Ｆｒａｇａｒｉａｎ ｎｉｌｇｅｒｒｅｎｓｉｓ Ｓｃｈｌｄｌ）ＥＳＴ－ＳＳＲ 引物開發(fā)及遺傳多樣性研究[Ｄ]. 昆明：云南大學(xué)，２０１９.

[２２] 曹嫻. 草莓抗灰霉病基因定位及櫸樹種質(zhì)資源多樣性的ＩＳ￣ＳＲ 分析[Ｄ]. 上海：上海交通大學(xué)，２０１１.

[２３] 李靜. 草莓抗炭疽病遺傳圖譜構(gòu)建和抗性相關(guān)基因的克隆與表達(dá)分析[Ｄ]. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，２０１２.

[２４] Ｈｏｎｊｏ Ｍ， Ｎｕｎｏｍｅ Ｔ， Ｋａｔａｏｋａ Ｓ， ｅｔ ａｌ. Ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅ￣ｐｅａｔ ｍａｒｋｅｒｓ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｅｖｅｒｂｅａｒｉｎｇ ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ ｇｅｎｅ ｉｎ ｌｏｎｇ￣ｄａｙ ａｎｄ ｄａｙ￣ｎｅｕｔｒａｌ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｏｃｔｏｐｌｏｉｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｓｔｒａｗ￣ｂｅｒｒｙ Ｆｒａｇａｒｉａ×ａｎａｎａｓｓａ [ Ｊ]. Ｅｕｐｈｙｔｉｃａ， ２０１６， ２０９ （２）：２９１－３０３.

[２５] Ｃａｓｔｒｏ Ｐ， Ｂｕｓｈａｋｒａ Ｊ Ｍ， Ｓｔｅｗａｒｔ Ｐ， ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆｄａｙ￣ｎｅｕｔｒａｌｉｔｙ ｉｎ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ[Ｊ]. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，２０１５， ３５（２）： ７９.

[２６] 唐玉娟，羅世杏，黃國(guó)弟，等. 基于ＳＳＲ 熒光標(biāo)記的杧果種質(zhì)資源遺傳多樣性分析及分子身份證構(gòu)建[Ｊ/ ＯＬ]. 熱帶作物學(xué)報(bào)，２０２２（２０２２－ １１－ ２４）. ｈｔｔｐｓ：/ / ｋｎｓ.ｃｎｋｉ.ｎｅｔ/ ｋｃｍｓ/ｄｅｔａｉｌ/４６.１０１９.ｓ.２０２２１１２２.１９５６.００４.ｈｔｍｌ.

[２７] 侯麗媛，董艷輝，聶園軍，等. 蘋果屬種質(zhì)ＴＰ－Ｍ１３－ＳＳＲ 親緣關(guān)系及遺傳多樣性分析[Ｊ]. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，２０２０，４８（９）：１３７１－１３７８，１５２２.

[２８] 高源，田路明，劉鳳之，等. ＴＰ－Ｍ１３－ＳＳＲ 技術(shù)在梨遺傳多樣性研究中的應(yīng)用[Ｊ]. 果樹學(xué)報(bào)，２０１１，２８（３）：３９４－３９９.

[２９] 劉國(guó)彬，姚硯武，曹均. 利用熒光ＳＳＲ 標(biāo)記構(gòu)建歐李種質(zhì)分子身份證[Ｊ]. 東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，２０２２，５０（１０）：１０－１７.

[３０] Ｂｏｔｓｔｅｉｎ Ｄ， Ｗｈｉｔｅ Ｒ Ｌ， Ｓｋｏｌｎｉｃｋ Ｍ， ｅｔ ａｌ. Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｇｅｎｅｔｉｃ ｌｉｎｋａｇｅ ｍａｐ ｉｎ ｍａｎ ｕｓｉｎｇ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ [ Ｊ]. Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９８０， ３２（３）： ３１４－３３１.

[３１] 郭艷春，張力嵐，陳思遠(yuǎn)，等. 黃麻應(yīng)用核心種質(zhì)的ＤＮＡ 分子身份證構(gòu)建[Ｊ]. 作物學(xué)報(bào)，２０２１，４７（１）：８０－９３.

[３２] 韓柏明，趙密珍，王靜，等. 基于ＳＳＲ 標(biāo)記的草莓品種親緣關(guān)系分析[Ｊ]. 植物遺傳資源學(xué)報(bào)，２０１３，１４（３）：４２８－４３３.

[３３] 苗立祥，楊肖芳，張?jiān)コ?，? 基于草莓全基因組ＳＳＲ 標(biāo)記的開發(fā)和應(yīng)用[Ｊ]. 分子植物育種，２０２１，１９（４）：１２１０ －１２２２.

[３４] 張曉璐. 山東省水果產(chǎn)業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力研究[Ｄ]. 青島：青島農(nóng)業(yè)大學(xué)，２０２３.

[３５] 曲彥霖. 山東省水果業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力評(píng)價(jià)及布局優(yōu)化[Ｄ]. 煙臺(tái)：煙臺(tái)大學(xué)，２０２１.

[３６] 徐蕾. 山東省龍口市草莓生產(chǎn)主體經(jīng)營(yíng)現(xiàn)狀及對(duì)策研究[Ｄ]. 大連：大連海洋大學(xué)，２０２３.

[３７] 李辛雷，陳發(fā)棣. 菊花種質(zhì)資源與遺傳改良研究進(jìn)展[Ｊ].植物學(xué)通報(bào)，２００４（４）：３９２－４０１.

[３８] 雒新艷，王利紅，劉英，等. 盆菊野生種質(zhì)核心性狀的綜合評(píng)價(jià)研究[Ｊ]. 山東林業(yè)科技，２０２２，５２（６）：３４－３７，４６.

[３９] 李黎，潘慧，李文藝，等. 中國(guó)野生獼猴桃資源的潰瘍病抗性種質(zhì)篩選[Ｊ]. 植物科學(xué)學(xué)報(bào)，２０２２，４０（６）：８０１－８０９.

[４０] 王洋，李錫香，王海平，等. 茄科蔬菜野生資源的研究與利用[Ｊ]. 植物遺傳資源學(xué)報(bào)，２０２０，２１（６）：１４６８－１４８２.

[４１] 劉國(guó)霞，張全芳，楊雪，等. 八倍體草莓ＤＮＡ 指紋圖譜的構(gòu)建與初步遺傳分析[Ｊ]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，２０２３，２８（２）：３５－４２.