雞感染滑液囊支原體的病理學觀察

丁美娟,周永銀,張懿,張丹,周勇岐*，尹秀鳳,張小飛

(1.兆豐華生物科技(南京)有限公司，江蘇 南京 211102;2. 江蘇省農業科學院獸醫研究所，江蘇 南京 210014)

滑液囊支原體(Mycoplasmasynoviae, MS)引起雞滑液囊炎，該病一年四季均可發生，但以冬春季節多發[1]。MS自然感染最早可發生在1周齡[2]，但急性感染通常見于4～16周齡，在急性感染期之后出現的慢性感染可持續終生，發病率一般為5%～15%，死亡率約為1%～10%[3]。MS除了可以通過隱性感染雞和病雞的水平傳播外，還可以垂直傳播，經蛋傳播給子代，感染初期經卵傳播率較高。在我國，無論是商品肉雞、蛋雞或種雞[4-5]，MS引起的傳染性滑膜炎和感染均有發生，給養雞業造成巨大的經濟損失。近年來我國雞群MS感染的報道較多，對MS生物學特性、免疫原性及診斷方法的研究報道也較多[6-9]，但對MS感染的病理變化報道較少。本試驗以1例自然感染MS、表現為典型臨床癥狀的病例為研究對象，進行了病理組織學觀察。

1 材料與方法

1.1 病料

病料來自江蘇某養殖場，10只50日齡左右的疑似MS感染病雞。

1.2 標準菌株

MS陽性菌株GX11-T株，購自中國獸醫藥品監察所。

1.3 主要試劑

DNA提取試劑盒、DNA Taq酶、dNTP和分子質量標準DL2000 DNA Marker購自大連寶生物技術有限公司；氯仿、異丙醇、乙醇、甲醛等均為國產分析純產品。

1.4 流行病學調查與臨床觀察

對發病雞場雞群年齡、發病率等發病情況進行調查，觀察發病雞的臨床癥狀和病死雞的剖檢變化，記錄結果并作出初步診斷。

1.5 病料的PCR檢測

采用PCR的檢測技術，參考丁美娟等[10]建立的對臨床疑似MS病變主要侵害部位雞腫脹跗關節腔內容物進行MS病原檢測。

根據雞滑液囊支原體16S rRNA基因(N-R044811)序列設計的引物，預期擴增目的片段大小為1 077 bp，由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。

上游引物P1： 5′-CCTACGGGAGGCAGCAGT-3′;

下游引物P2： 5′-AGGCAGTCGTGTCCCAAGGTC-3′。

1.6 病理組織學觀察

將病雞關節、爪墊、肝臟、腎臟、胸腺等組織，用10%中性甲醛溶液固定組織，石蠟包埋，常規HE染色后觀察其病理組織學變化。

2 結果與分析

2.1 流行病學及臨床檢查

2018年10月份，該養殖場存欄15 100只海蘭褐蛋雞，在50日齡左右，雞出現跛行、采食量下降、精神沉郁、羽毛粗亂，有的發病雞消瘦、關節腫大、爪墊腫脹，龍骨滑液囊處有囊腫，部分雞的排泄物可見大量尿酸或綠色的尿酸鹽沉積，疑似MS感染，發病率約2%。

2.2 PCR檢測

對送檢的疑似MS病雞腫脹跗關節腔內容物直接進行PCR擴增，經瓊脂糖凝膠電泳，在紫外透射儀下可見約1 077 bp特異性條帶，與目的片段大小一致，見圖1。

M.DL2000 DNA Marker; 1. MS陽性對照GX11-T; 2～7. 檢測樣品; 8. 陰性對照

2.3 PCR產物測序與分析

PCR擴增產物經過克隆、序列測定后，通過在線BLAST比對分析發現，檢測樣品與NCBI收錄MS的16S rRNA基因序列同源性較高，同源性約92%～98%，證明該檢測樣品為MS感染。

2.4 剖檢變化

解剖病雞關節滑膜組織有黏性滲出物(圖2A)，爪墊腫脹，分泌黏性滲出物(圖2B)，龍骨的滑液囊有黃白色纖維素性干酪樣物質(圖2C)；病雞氣管、肝、脾、腎等無肉眼可見病變。

A. 跗關節黏性滲出物; B. 爪墊腫脹,分泌黏性滲出物; C. 龍骨黃白色纖維素性干酪樣物質

2.5 病理組織學觀察

肝臟：肝臟主要變化為肝小葉中央靜脈和周圍的肝竇擴張，充有大量紅細胞，血管內皮細胞腫脹，匯管區周圍少量炎癥細胞浸潤(圖3A)。

腎臟：腎組織大面積灶性出血，腎小球擴張，毛細血管內皮細胞腫脹、增生，腎小管上皮細胞與基底膜分離形成一環狀空白區(圖3B)。

胰臟：胰島中可見淋巴細胞浸潤，腺泡排列較疏松，炎癥細胞灶性浸潤(圖3C)。

胸腺：胸腺髓質中有明顯出血和充血，大量血管擴張淤血以及炎性細胞浸潤(圖3D)。

法氏囊：法氏囊皮質與髓質界限模糊，皮質細胞大量減少消失，髓質細胞較疏松(圖3E)。

小腸：腸黏膜層絨毛結構不完整，部分僅見裸露的固有層結構，腸腔內可見大量脫落的細胞，腸腺較豐富，肌層纖維排列折皺狀(圖3F)。

爪墊：部分真皮結蹄組織疏松、壞死，大量異嗜性細胞浸潤和少量淋巴細胞浸潤(圖3G)。

關節：關節腔內以異嗜性細胞為主的炎性細胞崩解壞死，并伴有少量紅細胞滲出(圖3H)；關節囊結締組織壞死，有巨噬細胞、淋巴細胞等炎性細胞浸潤(圖3I)。

A.肝臟; B. 腎臟; C.胰臟; D.胸腺; E.法氏囊; F.小腸; G.爪墊; H. 跗關節腔; I. 關節囊

3 討論

對MS感染雞各組織器官病理學觀察結果顯示，病雞大部分組織器官的實質細胞均受到不同程度的病理性損傷。病理學觀察結果同時顯示，MS病原主要侵害部位關節和爪墊，腔囊內均有大量膿液和炎性細胞滲出、崩解、壞死，與聶立欣等[11]報道一致。病雞爪墊部分真皮結蹄組織疏松，壞死，大量異嗜性細胞浸潤和少量淋巴細胞浸潤，部分形成膿液。這些病變導致發病雞出現跛行、癱瘓。另外MS感染雞肝臟等多處組織炎性細胞浸潤，肝臟血管內皮細胞腫脹，腎組織大面積灶性出血，可見MS感染雞存在血液循環障礙。胸腺髓質充血、出血以及炎性細胞浸潤，法氏囊皮質細胞減少，導致機體免疫能力下降，該發現進一步證實了MS不僅導致關節炎和滑膜炎的發生，同時導致生長發育遲緩，甚至會引發免疫系統的抑制[12]。

MS感染已經遍及全球，尤其近幾年來，我國MS感染常呈暴發趨勢，給養雞業造成嚴重的經濟損失。2013年第18屆世界禽病大會，就有專家提出“現在以及不遠的將來MS的危害會超過雞毒支原體(MG)”的觀點[13]。國內外雖然已有許多關于MS的報道，但國內大部分報道基于病雞的臨床癥狀和剖檢病理變化所作出的診斷，有關MS病理組織學研究尚不多見。本試驗后期對該例臨床樣品進行了進一步實驗室病原檢測，排除了沙門氏菌、金黃色葡萄菌等細菌病，病毒性關節炎等病毒病混合感染；參考丁美娟等[14-15]MS分離和鑒定技術，進一步進行了SPF雞人工感染試驗，復制出典型的MS自然病例，說明該雞場送檢的疑似MS病雞為單一、純凈MS病原感染。本研究通過MS臨床典型發病病例進行系統的病理學觀察，為該病的診斷提供可靠的依據，豐富了MS感染雞的病理學資料。