研究ELISA聯(lián)合熒光定量PCR檢測丙型肝炎病毒的效果

劉波，陳昌蘭

1.滕州市疾病預(yù)防控制中心衛(wèi)生監(jiān)督科，山東滕州 277599；2.滕州市疾病預(yù)防控制中心檢驗科，山東滕州 277599

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒引起的疾病，患者在早期沒有任何的臨床表現(xiàn)，以至于沒有及時加以治療，患者病情持續(xù)惡化，并向周邊的人傳播[1]。丙型肝炎病毒在全球范圍內(nèi)廣泛存在，是一個全球性的公共健康問題。隨著丙型肝炎病毒患者病情的發(fā)展，大多數(shù)感染者會出現(xiàn)慢性炎癥，甚至出現(xiàn)肝纖維化、肝癌等，嚴重危害患者及其家人的生命和健康[2-3]。因此，對丙型肝炎病毒的早期檢測與正確的診斷對于提高患者生存質(zhì)量具有十分重大的意義。酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是目前丙型肝炎病毒感染的主要檢查手段，檢出速度快，已在臨床推廣。然而，隨著近年來檢測方法的不斷發(fā)展，熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction, PCR）檢測在丙型肝炎病毒的檢測中同樣發(fā)揮了重要價值[4-5]。ELISA聯(lián)合熒光定量PCR檢測可以更好地提高丙型肝炎病毒診斷準確率，具有較高的臨床應(yīng)用價值[6]。本研究選取2022年8月—2023年8月滕州市疾病預(yù)防控制中心接診的90例疑似丙型肝炎病毒患者為研究對象，旨在探究丙型肝炎病毒檢測應(yīng)用ELISA聯(lián)合熒光定量PCR檢測的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院接診的90例疑似丙型肝炎病毒患者為研究對象，全部接受ELISA聯(lián)合熒光定量PCR檢測。其中女38例，男52例；年齡21～55歲，平均（38.49±5.90）歲。研究經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，患者或家屬知情同意（2012145）。

1.2 方法

ELISA檢測：向試劑盒中添加100 μl的樣品稀釋液，向?qū)?yīng)的孔中添加10 μl的待測樣本。在此基礎(chǔ)上，分別建立2個陽性對照孔及3個陰性對照孔，每個對照孔中分別添加陽性或陰性對照100 μl，然后封板，放入37℃溫育1 h。5次洗滌處理之后，將100 μl的酶標物質(zhì)添加到每個孔中，相同的溫度培養(yǎng)0.5 h，再清洗5遍之后，將50 μl的基質(zhì)緩沖溶液添加到每個孔中?；旌暇鶆?，37℃溫育0.5 h，每個孔中添加50 μl的終止溶液，用酶標儀檢測，并嚴格遵循要求進行逐一操作。

熒光定量PCR檢測：應(yīng)用核酸試劑盒，將200 μl的樣本添加到反應(yīng)孔中，再添加蛋白酶k10 μl及核酸助沉試劑4 μl，進行自動化處理。完成上述操作后，將上清液20 μl裝入擴增管，開展PCR定量擴增。

1.3 觀察指標

①以丙型肝炎病毒（Hepatitis Virus C, HCV）RNA檢測結(jié)果作為“金標準”，分析ELISA檢測、熒光定量PCR檢測、聯(lián)合檢測的檢出情況。

②分析ELISA檢測、熒光定量PCR檢測、聯(lián)合檢測的靈敏度、特異度、準確度、陽性預(yù)測值以及陰性預(yù)測值。靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%。特異度=真陰性例數(shù)/（假陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)）×100%。準確性=（真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)）/總例數(shù)×100%。陽性預(yù)測值=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%。陰性預(yù)測值=真陰性例數(shù)/（假陰性例數(shù)+真陰性例數(shù)）×100%。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料（檢測結(jié)果及診斷效能）用例數(shù)（n）和率（%）表示，行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同檢測方法的檢出情況比較

HCV RNA檢查結(jié)果顯示，43例陽性（47.78%）、47例陰性（52.22%）；ELISA檢測顯示，36例陽性（40.00%）、54例陰性（60.00%）；熒光定量PCR檢測顯示38例陽性（42.22%）、52例陰性（57.78%）；聯(lián)合檢測顯示，42例陽性（46.67%）、48例陰性（53.33%）。見表1。

表1 不同檢測方法的檢出情況比較（n）

2.2 不同檢測方法的診斷效能分析

ELISA檢測與熒光定量PCR檢測在靈敏度、特異度、準確度、陽性預(yù)測值以及陰性預(yù)測值方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。聯(lián)合檢測的靈敏度、準確度、陽性預(yù)測值以及陰性預(yù)測值顯著高于ELISA檢測，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。聯(lián)合檢測的靈敏度、準確度顯著高于熒光定量PCR檢測，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。見表2。

3 討論

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒引起的傳染性疾病，它可以通過血液和輸血等途徑進行傳播，大多數(shù)丙型肝炎患者在早期沒有任何表現(xiàn)，但是當疾病發(fā)展到一定程度時，可能會出現(xiàn)發(fā)熱、肝功能異常、消化道損傷等癥狀[7-8]。丙型肝炎病毒感染與乙肝病毒感染相比，臨床表現(xiàn)較輕微，因此常被患者忽略，不能得到早期的診斷和治療，造成病情進展，有些患者還會發(fā)展成肝硬化、肝癌[9-10]。因此，正確地選用適當?shù)臋z測方法，對丙型肝炎患者進行早期檢測與確診就變得十分重要。

ELISA是目前臨床上普遍使用的一種常規(guī)檢驗手段，具有簡便、便捷的特點，適合大規(guī)模采集丙型肝炎病毒，但由于反應(yīng)溫度、外源性物質(zhì)、試劑盒質(zhì)量和內(nèi)源性物質(zhì)等多種因素的制約，很難對患者體內(nèi)的病毒進行定量分析[11-12]。丙型肝炎病毒經(jīng)血傳播是目前公認的丙型肝炎病毒的主要傳染方式，但仍有一些丙型肝炎病毒患者的感染方式不明，ELISA法僅表明抗體為陽性就可以判斷為丙型肝炎病毒，但如果沒有明顯的癥狀或誘發(fā)因素，則必須通過證實試驗才能將其剔除，同時也不能確定患者是否存在著病毒的復(fù)制[13-15]。因此，許多學(xué)者主張將ELISA聯(lián)合熒光定量PCR檢測結(jié)合起來用于丙型肝炎病毒的診斷，以保證檢驗的可信度。熒光定量PCR是一種新興的檢測方法，它通過在反應(yīng)系統(tǒng)中添加具有熒光的探針，通過對其進行熒光檢測，從而實現(xiàn)對目標分子的檢測[16]。已有研究表明，基于實時熒光PCR的方法是一種封閉的方法，可有效降低樣本的污染，提高檢測品質(zhì)[17]。熒光定量PCR檢測利用熒光分子對丙型肝炎病毒進行定量分析，為丙型肝炎病毒感染的早期診斷和預(yù)后評估奠定基礎(chǔ)。丙型肝炎病毒檢測中，ELISA聯(lián)合熒光定量PCR檢測可以充分體現(xiàn)兩種診斷的優(yōu)勢，也可以彌補單項檢測的不足之處，對于早期診斷丙型肝炎病毒具有重要價值。丁燕[18]的研究中，ELISA與PCR聯(lián)合檢測的準確度為94.56%，特異度為96.00%，陽性預(yù)測值為95.12%，與本研究結(jié)果一致，在本研究中，聯(lián)合檢測的準確度為94.44%，特異度為95.74%，陽性預(yù)測值為95.24%。

綜上所述，ELISA聯(lián)合熒光定量PCR檢測丙型肝炎病毒具有較高的準確率，應(yīng)用價值較高。