芻議活動性肺結核早期檢驗中半巢式全自動實時熒光定量PCR檢測與涂片抗酸染色法的應用研究

咸麗

平邑縣結核病防治所檢驗科，山東臨沂 273300

肺結核是一種常見的慢性傳染病，發病后多表現為咳嗽、咳痰≥2周、咳血或血痰是肺結核的主要局部癥狀[1]。近年來，由于醫學科技的快速發展，肺結核的診斷方法日益增多，而痰培養是“金標準”，但由于該方法耗時較久，樣本采集方法和操作氣溶膠污染都可能對檢驗結果產生一定的干擾[2]。Xpert MTB/RIF檢驗、涂片抗酸染色法檢驗是活動性肺結核的常用診斷方法，Xpert MTB/RIF具有較高的檢出率[3]。Xpert MTB/RIF檢測周期短，自動化程度高，結核分枝桿菌靈敏度高，對活動性肺結核的早期診斷有較好的指導意義[4]。為評析Xpert MTB/RIF方法與涂片抗酸染色法在活動性肺結核早期檢驗中的有效性，本次研究選取2022年9月—2023年9月于平邑縣結核病防治所就診的90例疑似肺結核患者為研究對象開展調研。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇于本院就診的90例疑似肺結核患者為研究對象，均提供半巢式全自動實時熒光定量PCR檢測（Xpert MTB/RIF）、涂片抗酸染色法檢驗。其中，男61例，女29例；年齡28～78歲，平均（50.34±6.56）歲。研究經所醫學倫理委員會批準同意（PYXJFSJY-2023-011）。

1.2 納入與排除標準

納入標準：均符合肺結核的診斷標準[5]；患者具有良好的溝通與表達能力；患者均自愿參與本次研究。排除標準：多器官功能障礙患者；合并傳染性疾病患者；危重癥患者；癌癥患者。

1.3 方法

90例疑似肺結核患者，均提供Xpert MTB/RIF方法、涂片抗酸染色法檢驗。

半巢式全自動實時熒光定量PCR檢測（Xpert MTB/RIF）：Xpert MTB/RIF反應盒及樣品試劑（Sample Reagent, SR）均購自美國Cepheid公司。使用儀美科技生產的全自動實時熒光PCR儀（型號：GXIV-4N3-6）。在進行操作之前，將生物安全柜中的紫外線燈照射臺面，時間為30 min。后啟動生物安全柜，運行5 min后，檢查安全柜的運行是否正常，使用乙醇濃度為75%進行臺面消毒處理。準備相關材料，放置在生物安全柜中。在反應盒的側壁和相應的處理管上標記痰液標本序號。采集痰標本放置在有螺旋蓋的前處理管中，前處理管中添加相當于痰標本兩倍體積的SR痰標本處理液。后將處理管的螺旋蓋旋緊。生物安全柜中前處理管在渦旋振蕩器上渦旋振蕩。將前處理管中的痰液標本靜溫處置15 min，使痰液標本充分液化，靜置10 min。如果出現細小塊狀以及未液化的標本，需要重復上述操作使其溶解。清潔臺面，將反應盒移至擴增區，完成檢測。

涂片抗酸染色法檢驗：采用乙醇脫脂處理，干燥清潔后備用。將承載痰標本的容器打開后，預防出現氣溶膠以及標本外溢。將痰標本中的干酪樣膿樣以及可疑部分約0.05 mL在玻片的正面輕輕環狀涂抹均勻，制作成痰膜。將制作完畢的痰膜靜置在生物安全柜中自然干燥，后行染色處理。

1.4 觀察指標

將痰培養法作為金標準，對比分析Xpert MTB/RIF檢驗、涂片抗酸染色法檢驗的陽性檢出率=陽性例數/總例數×100%，陰性檢出率=陰性例數/總例數×100%。

對比分析半巢式全自動實時熒光定量PCR檢測（Xpert MTB/RIF）、涂片抗酸染色法檢驗的應用效能。靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%。特異度=真陰性例數/（假陽性例數+真陰性例數）×100%。準確性=（真陽性例數+真陰性例數）/（假陽性例數+真陰性例數+真陽性例數+假陰性例數）×100%。陽性預測值=真陽性例數/（真陽性例數+假陽性例數）×100%。陰性預測值=真陰性例數/（假陰性例數+真陰性例數）×100%。

1.5 統計方法

使用SPSS 23.0統計學軟件對數據資料處理分析，計數資料用例數（n）和率（%）表示，行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對比分析Xpert MTB/RIF檢驗、涂片抗酸染色法檢驗的診斷結果

痰培養法顯示，77例陽性（陽性率85.56%）、13例陰性（陰性率14.44%）。Xpert MTB/RIF方法檢驗76例陽性、14例陰性。涂片抗酸染色法檢驗44例陽性、46例陰性。見表1。

表1 對比分析Xpert MTB/RIF檢驗、涂片抗酸染色法檢驗的診斷結果（n）

2.2 對比分析Xpert MTB/RIF檢驗、涂片抗酸染色法檢驗的應用效能

Xpert MTB/RIF檢驗的靈敏度、準確度、陽性預測值以及陰性預測值均高于涂片抗酸染色法檢驗，差異有統計學意義（P均＜0.05）。Xpert MTB/RIF檢驗與涂片抗酸染色法檢驗特異度對比，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 對比分析Xpert MTB/RIF、涂片抗酸染色法檢驗的應用效能（%）

3 討論

肺結核主要由結核分枝桿菌感染導致。肺結核的發病率逐年升高，如果得不到及時的診治，將會對患者的生命和健康產生很大的危害[6]。對活動性肺結核患者進行痰中結核分枝桿菌的測定，對于尋找感染源、制訂治療方案及評估療效具有十分重要的作用。

涂片抗酸染色法顯微鏡檢驗是目前臨床上常用的一種方法，操作簡便，但操作人員會受到一定的主觀因素的影響，導致靈敏度下降。痰培養法的診斷準確率很高，但實驗過程繁瑣[7-8]。肺結核以痰液培養為“金標準”，其檢出率很高，但其需要很久的時間，會延誤患者的最佳治療時間，并且會導致疾病的惡化，并不能區分結核分枝桿菌和非結核性分枝桿菌，會出現假陽性和假陰性的情況。而Xpert MTB/RIF以其特異性高，操作簡便，快速等優點受到廣大醫師和患者的歡迎[9-10]。涂片抗酸染色法是最傳統的一種有效的檢測技術，通過“染-洗片-復染”過程，可以對分枝桿菌染色，在淡藍色背景下，抗酸桿菌呈紅色，其他細菌呈藍色，從而增加檢測的可靠性，但其檢測結果容易受到外部環境的干擾，導致一些患者無法達到預期的篩查效果，容易造成漏診和誤診[11-12]。目前，Xpert MTB/RIF已越來越多地用于活動性肺結核早期檢驗中，Xpert MTB/RIF基于熒光試劑，實現了對PCR全流程的實時監測，同時檢測全流程的Ct值與初始復制數量之間存在著良好的直線相關性，能夠有效地提升檢測的準確性[13-14]。袁楨等[15]在研究中，熒光定量檢驗PCR診斷活動性肺結核的靈敏度100.00%及準確度98.75%均高于涂片抗酸染色法（P均＜0.05）。其研究與本次研究結果一致，本次研究中Xpert MTB/RIF檢驗的靈敏度97.40%、準確度96.67%高于涂片抗酸染色法檢驗（P均＜0.05）。提示Xpert MTB/RIF在活動性肺結核的診斷中具有較高的臨床價值，可用于肺結核的早期篩選。

綜上所述，活動性肺結核早期檢驗中半巢式全自動實時熒光定量PCR檢測（Xpert MTB/RIF）的應用效能高于涂片抗酸染色法的應用研究。