血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α與局部晚期宮頸癌患者新輔助化療療效的關系分析*

張慧雅,李慧娟

西電集團醫院婦科,陜西西安 710077

局部晚期宮頸癌(LACC)是指腫瘤最大徑≥4 cm的ⅠB3期和ⅡA2期宮頸癌[1]。LACC患者手術風險過高,臨床上通常不能直接進行外科手術治療。新輔助化療(NACT)可縮小腫瘤體積、降低術后切緣陽性率、消除亞臨床病灶,為LACC患者提供手術機會[2]。然而,臨床實踐中并非所有LACC患者均能從NACT治療中獲益,NACT治療無效者甚至耽誤了最佳治療時間,導致預后更差[3]。因此,開展NACT前準確評估LACC患者NACT療效具有重要意義。膜聯蛋白A1(ANXA1)又稱脂皮質素Ⅰ,具有抗炎、促進細胞增殖和凋亡等多種功能,已被證實與鱗狀細胞癌[4]、卵巢癌[5]化療敏感性有關。熱休克蛋白(Hsp)70和HSP90α是一類廣泛的高度保守的蛋白,與腫瘤細胞的惡性增殖、分化、凋亡等生物學行為有密切的關系[6]。另有研究表明Hsp70與食管鱗癌[7]、Hsp90α與肺癌[8]化療敏感性密切相關。本研究擬探討血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α與LACC患者NACT療效的關系,以期為LACC患者的臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年1月至2023年1月在本院進行NACT治療的LACC患者157例為研究對象。患者年齡37～80歲,平均(51.66±9.54)歲;體質量指數(BMI)為18.27～27.43 kg/m2,平均(22.90±1.42)kg/m2;絕經情況:絕經112例,未絕經45例;國際婦產科聯盟大會(FIGO)分期:ⅠB3期89例,ⅡA2期68例;分化程度:低/未分化69例,高/中分化88例;病理類型:鱗癌50例,非鱗癌107例;有淋巴結轉移71例;合并糖尿病52例,高血壓46例,高脂血癥29例;腫瘤最大徑4.0～7.3 cm,平均(5.84±0.81)cm;化療前糖類抗原125(CA125)水平為(54.12±3.57)U/mL,糖類抗原199(CA199)水平為(40.66±4.79)U/mL,血紅蛋白(Hb)水平為(122.12±11.94)g/L,血小板計數(PLT)水平為(232.41±22.07)×109/L。納入標準:(1)符合LACC診斷標準[9],腫瘤最大徑≥4 cm,病理學檢查確診為原發性宮頸癌,FIGO分期[10]為ⅠB3期和ⅡA2期;(2)入組前未接受任何相關治療;(3)符合NACT適應證,在本院完成完整的NATC;(4)臨床資料完整。排除標準:(1)合并其他惡性腫瘤者;(2)有腫瘤細胞遠處轉移者;(3)合并心、腦、腎等重要臟器功能障礙者;(4)合并血液系統疾病、急慢性感染、免疫系統疾病者。所有患者均簽署知情同意書,本研究經本院倫理委員會審核批準(審批號:20191206-03)。

1.2方法

1.2.1血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α測定 患者入院后均采集空腹靜脈血5 mL,3 000 r/min離心15 min,離心半徑10 cm,取上清液于-80 ℃保存待測。采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α水平。人ANXA1 ELISA試劑盒(規格96T,貨號EKU02422)購于艾美捷科技有限公司,人HSP70 ELISA試劑盒(規格96T,貨號LM-HSP70-Hu)、人HSP90α ELISA試劑盒(規格96T,貨號LM-HSP90-Hu)購于上海聯邁生物工程有限公司。嚴格按照試劑盒說明書進行操作,于450 mm波長處測定吸光度(A)值,繪制標準曲線,計算血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α水平。

1.2.2NACT治療方法 患者入院確診后給予標準NACT方案進行治療,即紫杉醇聯合順鉑治療。具體用藥方案:紫杉醇(紫杉醇注射液,揚子江藥業集團有限公司,國藥準字H20053001,規格5 mL∶30 mg)175 mg/m2,1次/d,靜脈滴注;順鉑(注射用順鉑,齊魯制藥有限公司,國藥準字H37021356,規格30 mg)75 mg/m2,1次/d,靜脈滴注。以21 d為1個化療周期,計劃治療3個周期,具體化療周期數由化療醫師根據患者的具體情況適當調整。

1.3NACT療效評價標準 于化療3個周期后進行計算機斷層掃描(CT)、磁共振成像(MRI)和胸部X線片檢查,基于影像學檢查結果,根據實體腫瘤療效評價標準(RECIST 1.1)[11]評價NACT療效。具體標準:完全緩解(CR)為全部腫瘤病灶(包括靶病灶和非靶病灶)消失并維持4周,所有淋巴結短徑必須<10 mm;部分緩解(PR)為所有靶病灶最大徑之和與基線相比縮小≥30%并維持4周,但未達到CR;疾病進展(PD)為病灶(或靶病灶)最大徑之和較最小時增加≥20%,且最大徑增加的絕對長度至少達到5 mm,或出現1個或多個新病灶,非靶病灶明顯進展;疾病穩定(SD)為介于PR與PD之間。將CR和PR評價為NACT有效,納入有效組,將SD和PD評價為NACT無效,納入無效組。

2 結 果

2.1兩組血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α水平比較 157例LACC患者化療3個周期后,CR 37例(23.57%),PR 89例(56.69%),SD 22例(14.01%),PD 9例(5.73%)。將療效為CR和PR的126例患者納入有效組,將療效為SD和PD的31例患者納入無效組。有效組化療前血清ANXA1水平高于無效組,血清Hsp70、Hsp90α水平低于無效組,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α水平比較

2.2有效組和無效組臨床資料比較 有效組FIGO分期為ⅡA2期患者占比、低/未分化患者占比、有淋巴結轉移患者占比,以及化療前CA125、CA199水平低于無效組,差異有統計學意義(P<0.05);兩組年齡,BMI,絕經情況,病理類型,合并糖尿病、高血壓、高脂血癥患者比例,腫瘤最大徑,化療前Hb、PLT水平比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 有效組和無效組臨床資料比較或n(%)]

2.3LACC患者NACT療效影響因素的多因素Logistic回歸分析 以LACC患者NACT療效為因變量(賦值:有效=0,無效=1),以血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α、CA125、CA199水平(賦值:連續性變量原值輸入)及FIGO分期(賦值:ⅠB3期=0,ⅡA2期=1)、分化程度(賦值:高/中分化=0,低/未分化=1)、淋巴結轉移(賦值:無=0,有=1)進行多因素Logistic回歸分析。結果顯示,血清Hsp70水平升高、血清Hsp90α水平升高、FIGO分期為ⅡA2期和CA199水平升高是影響LACC患者NACT療效的獨立危險因素(P<0.05),ANXA1水平升高是保護因素(P<0.05)。見表3。

表3 LACC患者NACT療效影響因素的多因素Logistic回歸分析

2.4血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α預測LACC患者NACT療效的價值 血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α及3項指標聯合檢測預測LACC患者NACT無效的曲線下面積(AUC)分別為0.836、0.789、0.717和0.941,聯合檢測優于各指標單獨檢測。見圖1、表4。

圖1 血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α單獨及聯合檢測預測LACC患者NACT無效的ROC曲線

表4 血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α預測LACC患者NACT無效的效能分析

3 討 論

近年來,隨著醫學技術的發展,NACT為惡性腫瘤的治療提供了新思路,已被廣泛應用于乳腺癌、宮頸癌、肺癌等各類腫瘤的治療中[12]。理論上,NACT可為分期過高、腫瘤體積過大而不適宜手術治療的患者提供手術機會,從而改善患者生存及預后[13]。然而臨床實踐中,部分患者對NATC不敏感,導致NACT治療無效。目前關于NACT無效的具體機制尚不十分明確,多認為與藥物失活、藥物靶點改變、藥物流出、細胞凋亡及DNA損傷修復等多種因素有關[14]。

ANXA1是鈣離子依賴的磷脂結合蛋白,其基因定位于人染色體9q12～q21.2,由13個外顯子和12個內含子組成,包括保守的C末端蛋白核心結構和多功能的N末端“頭部”,已被證實與非小細胞肺癌、卵巢癌等多種腫瘤耐藥性有關[15]。Hsp是一種分布廣泛的具有高度保守性的應激蛋白,具有分子伴侶活性,在防止蛋白聚集、調節細胞生長平衡中扮演重要角色,按照蛋白相對分子質量大小可分為Hsp110、Hsp90(包括Hsp90α和Hsp90β)、Hsp70、Hsp60以及小分子Hsp 5類,其中Hsp70和Hsp90α易受應激狀態的誘導,在多種腫瘤中呈高表達狀態,其水平與腫瘤臨床分期、分化程度、轉移等病理因素有關[16]。在LACC腫瘤環境下,Hsp70和Hsp90α大量分泌,腫瘤惡性程度越高,其分泌越多,在血清中水平越高。

本研究顯示,化療前有效組血清ANXA1水平高于無效組,血清Hsp70、Hsp90α水平低于無效組,血清Hsp70、Hsp90α水平升高是影響LACC患者NACT療效的獨立危險因素,而血清ANXA1水平升高是保護因素。這表明血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α與LACC患者NATC療效有關。ANXA1影響LACC患者NATC療效的可能原因如下:(1)ANXA1具有鈣離子調節的胞吐及促囊泡聚合作用,可通過加強囊泡的聚合以及藥物填充囊泡影響藥物轉運到細胞內而發揮作用[17],進而影響LACC患者NACT敏感性;(2)ANXA1轉運到細胞核內通過誘導細胞凋亡相關蛋白的去磷酸化,介導細胞凋亡[18],當ANXA1表達下調時腫瘤細胞凋亡能力降低,增殖作用強化,進而引起NACT耐藥。Hsp70影響LACC患者NATC療效的可能原因如下:Hsp70能通過抑制細胞色素C與凋亡酶激活因子結合,阻斷功能性凋亡小體的形成,干擾含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶激活,抑制細胞凋亡過程[19],當Hsp70表達上調時,細胞凋亡被抑制,增殖能力增強,誘發NATC不敏感。Hsp90α影響LACC患者NATC療效的可能原因如下: Hsp90α是腫瘤特異性抗原之一,可通過與基質金屬蛋白酶2結合或促進表皮生長因子受體2活化,增強腫瘤細胞的侵襲、轉移能力,腫瘤細胞可利用Hsp90α維持自身基因免于發生錯誤折疊,從而增強NACT耐藥性[20]。

進一步ROC曲線分析結果顯示,血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α及3項指標聯合檢測預測LACC患者NACT無效的AUC分別為0.836、0.789、0.717和0.941,3項指標聯合檢測預測LACC患者NACT無效的效能優于各項指標單獨檢測。導致LACC患者NACT無效的機制是復雜且多方面的,ANXA1、Hsp70、Hsp90α可分別從藥物運轉、腫瘤細胞凋亡以及腫瘤細胞侵襲與遷移方面反映耐藥風險,因而3項指標聯合檢測能更好地反映患者NACT療效,提高預測效能。

綜上所述,當LACC患者血清ANXA1水平較低,血清Hsp70、Hsp90α水平較高時,NACT耐藥風險增大。在LACC患者開展NACT治療前通過檢測血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α水平有助于評價NACT無效的發生風險,具有較高的臨床應用價值。