外周血EBV-DNA及SAA、LDH聯合檢測對兒童傳染性單核細胞增多癥的診斷價值

方立江,袁 露,高行軍,張 茜,張 毅

1.陜西中醫藥大學第二附屬醫院檢驗科,陜西咸陽 712099;2.陜西中醫藥大學附屬醫院骨傷醫院骨病病區,陜西咸陽 710077;3.陜西中醫藥大學第二附屬醫院藥劑科,陜西咸陽 712099;4.陜西省咸陽市周陵衛生院檢驗科,陜西咸陽 712099;5.陜西中醫藥大學附屬醫院檢驗科,陜西咸陽 710077

傳染性單核細胞增多癥(IM)主要是因EB病毒(EBV)誘發的疾病,多見于兒童與青少年,因其無典型臨床癥狀,且病情輕重不一,臨床較易被誤診[1]。EBV衣殼抗原IgM抗體(EBV-CA-IgM)檢查是臨床廣泛應用的IM診斷方法,但受患兒免疫功能及初期抗體生成延遲影響,其檢測陽性率較低,早期存在漏診的可能[2]。隨著診斷技術的飛速發展,EBV脫氧核糖核酸(EBV-DNA)的檢測被臨床廣泛接受,有報道顯示,EBV-DNA陽性率高于EBV-CA-IgM[3],EBV-DNA檢測在早期IM診斷中發揮重要作用。有報道顯示,免疫功能低下的患者EBV感染風險更高,感染后的病情也越嚴重[4]。B淋巴細胞是EBV的靶細胞,其受到攻擊后激活T淋巴細胞的免疫應答反應,刺激機體釋放大量細胞因子建立屏障。血清淀粉樣蛋白A(SAA)是組織淀粉樣蛋白的前體物質,屬于急性時相蛋白,在應激狀態下,受炎癥細胞因子刺激,SAA水平迅速升高,有研究表明其與IM具有一定的相關性[5]。而乳酸脫氫酶(LDH)是參與糖異生和糖酵解的關鍵酶類物質,是與IM相關的早期診斷指標[6]。本研究通過檢測IM患兒EBV-DNA、SAA、LDH,分析三者聯合對IM的診斷效能,現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2021年7月至2023年2月陜西中醫藥大學第二附屬醫院收治的EBV相關IM患兒104例為研究組,其中男65例、女39例,年齡1～12歲、平均(6.07±1.22)歲,EBV-CA-IgM為(16.93±5.84)AU/mL。納入標準:(1)符合《EB病毒感染實驗室診斷及臨床應用專家共識》[7]中IM診斷標準;(2)EBV特異性抗體檢測結果為陽性;(3)入院前未應用抗菌藥物、免疫抑制劑等治療。排除標準:(1)肺炎、支氣管炎、扁桃體炎等其他感染性疾病;(2)巨細胞病毒、腺病毒、支原體等其他病原菌誘發的IM;(3)合并重要器官代謝異常和Ⅲ～Ⅳ級精神障礙史。選取同期體檢的103例健康兒童作為健康對照組,其中男62例、女41例,年齡1～12歲、平均(5.97±1.26)歲,EBV-CA-IgM為(0.58±0.69)AU/mL。兩組性別、年齡比較,差異均無統計學意義(P>0.05),研究均衡可比。本研究經醫院醫學倫理委員會批準(批號:LW2023021),所有入組對象家屬均知情同意本研究。

1.2方法

1.2.1EBV-DNA檢測 采集所有研究對象入院/體檢時空腹肘靜脈血2 mL置于含乙二胺四乙酸二鉀的紫色抗凝管中。應用實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)檢測外周血EBV-DNA載量,試劑盒購自同昕生物技術(北京)有限公司,儀器為美國Thermo Fisher Scientific公司生產的Applied Biosystems 7500實時熒光定量PCR系統。以≥1×103copy為陽性。

1.2.2SAA、血清LDH檢測 將研究對象入院/體檢時空腹肘靜脈血3～5 mL注入含乙二胺四乙酸二鉀的抗凝試管充分混勻后送檢。血清標本注入離心管,置于TDZ4-WS低速自動平衡離心機,4 ℃ 3 000 r/min 離心15 min(離心半徑10 cm),取血清保存于-80 ℃超低溫冰箱(Thermo Fisher公司)。分離血清后2 h內應用速率法檢測血清LDH水平,試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司。應用深圳國賽生物技術有限公司全自動特定蛋白分析儀Astep PLUS,運用乳膠增強免疫散射比濁法測定SAA水平,試劑盒購自美國貝克曼庫爾特公司。

2 結 果

2.1兩組SAA、LDH水平比較 研究組SAA、LDH水平明顯高于健康對照組,差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 兩組SAA、LDH水平比較

2.2兩組外周血EBV-DNA陽性率比較 研究組外周血EBV-DNA陽性率明顯高于健康對照組,差異有統計學意義(P<0.01)。見表2。

表2 兩組外周血EBV-DNA陽性率比較[n(%)]

2.3各項檢測指標診斷IM的效能分析 ROC曲線分析結果顯示,3項指標聯合檢測診斷IM的曲線下面積(AUC)明顯大于各項指標單獨檢測(P<0.05)。見圖1、表3。

圖1 各項指標單獨及聯合檢測診斷IM的ROC曲線

表3 各項檢測指標對IM的診斷效能分析

3 討 論

IM是由EBV入侵而誘發的,多表現為輕度咽炎和上呼吸道感染癥狀,無典型特異性表現,所以臨床較易漏診和誤診。目前EBV感染的診斷主要是結合臨床表現,采用異型淋巴細胞計數、EBV相關抗體檢測等方法進行確診,但在EBV感染的初期,機體免疫屏障可能未及時生成抗體,加之兒童免疫功能尚未完全發育成熟,導致感染早期EBV相關抗體檢測的陽性率偏低[8-9]。而異型淋巴細胞檢測過程中需通過人工進行計數處理,其結果受主觀因素影響大[10]。EBV-DNA主要是由淋巴細胞釋放的病毒顆粒,在EBV感染的早期診斷中起到關鍵作用。報道顯示,IM患者通常會于第2周EBV-DNA逐漸轉陰,但也有一部分患者從發病至治愈EBV-DNA均呈陰性[11]。因此,對于IM的診斷仍需要多指標聯合進行。

SAA是診斷病毒和細菌感染的敏感性標志物,在IM患者中,EBV侵入肝臟,誘導免疫應答反應釋放大量炎癥因子,在炎癥因子的持續刺激下,肝細胞誘導產生SAA[12]。在急性感染患者中,SAA水平在最初的3～6 h 內可迅速升高至1 000倍,于感染后第3天其水平達到峰值。蘇麗麗等[13]報道,SAA水平與IM合并肝損傷患兒的病情及預后密切相關。劉文田等[14]報道,EBV感染早期患兒的SAA水平明顯升高,EBV相關IM患兒SAA水平與血清淋巴細胞計數、異形淋巴細胞計數、EBV-DNA及肝功能損傷程度均呈中度的相關性。本研究結果顯示,研究組SAA水平明顯高于健康對照組(P<0.05),表明SAA對診斷IM有一定的價值。

LDH屬于酶類物質,是糖酵解和糖異生過程中催化乳酸和丙酮酸之間氧化還原反應的關鍵酶類,在機體分布極為廣泛,任何組織細胞的細胞質中均可見LDH,當其所在靶器官遭到損傷時,組織細胞膜受到破壞,細胞膜通透性上升,LDH被釋放進入血液循環,從而引起血清LDH水平升高[15-16]。有研究結果顯示,在IM患者中,EBV結合B淋巴細胞上的EBV受體,進而導致B淋巴細胞在受到感染后其表面抗原發生改變,誘發了T淋巴細胞活性異常,殺傷B淋巴細胞,進而對組織造成損傷,使LDH水平急劇上升[17-18]。本研究結果表明,IM患者血清LDH水平較健康對照者明顯升高,但LDH診斷特異度在3項指標中較低,為75.61%,故不應將其作為單獨診斷IM的指標。而ROC曲線分析結果顯示,3項指標聯合檢測對于IM患兒的診斷效能最高,其靈敏度為93.65%,特異度為83.33%,表明EBV-DNA、SAA、LDH三者聯合可作為早期診斷IM的敏感指標。

綜上所述,EBV-DNA、SAA、LDH聯合檢測有助于IM的早期診斷,從而指導臨床抗病毒治療。