自制核桃醬改善氣血兩虛小鼠的作用

顏紅嬌，楊定法，趙聲蘭

云南中醫藥大學，藥食資源開發實驗室（昆明 650500）

核桃仁，為胡桃科植物胡桃Juglans regiaL.的干燥成熟種子[1]，是一種藥食同源植物[2]，具有豐富的營養價值和藥理作用[3]。通過抗氧化[4]、調節海馬體中的NMDAR[5]、降低海馬體中AchE水平[6]等改善記憶。另外，核桃仁還具有降糖[7]、降脂[8]、護肝[9]、預防心腦血管疾病[10]等作用。在中醫上，核桃也被認為具有溫補腎陽、潤肺肝、補益氣血、益智開發腦力等功效，常與其他藥物配伍以改善人體由于氣血兩虛導致的各類疾病，如國家衛生健康委藥品標準中藥成方制劑收錄的理氣舒心片[11]、二仙口服液、參茸延齡片等，以及中國藥典收錄的培坤丸、復方皂礬丸[12]等。試驗將自制核桃醬用于氣血兩虛小鼠，通過臟器指數、血常規檢測等初步探討其補氣血作用。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

SPF級昆明種雄性小鼠60只，6～8周齡，體重20±2 g，云南洛宇生物科技有限公司，許可證編號SYXK（滇）K2017-0005。

1.2 藥物

核桃醬配方中的所有原料脫皮核桃仁（云南其眾食品有限公司）；龍眼肉、人參、當歸、蘆根（廣東逢春制藥有限公司）；菊粉、低聚果糖（江門市德昂生物科技有限公司）；蜂蜜（北京百花蜂產業科技發展公司）。上述材料由線上購得，經核實均屬于道地藥材。環磷酰胺（四川綠葉制藥股份有限公司，安道生）；乙酰苯肼（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）。

1.3 試驗儀器與設備

獸用全自動血液細胞分析儀（BC-2800Vet，深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司）；動物實驗跑臺（MH19-DSPT-202，上海富康達有限公司）。

1.4 試驗方法

1.4.1 氣血兩虛小鼠模型的建立及給藥

模型的建立：小鼠適應性飼養3 d后，將隨機分為5組，每組12只，分別名為空白組、模型組、補氣血核桃醬低劑量組、補氣血核桃醬中劑量組、補氣血核桃醬高劑量組。除空白組外，所有小鼠在1～7 d均在實驗跑臺上進行跑步疲勞試驗，電流刺激強度4.5 mA，并采用人為驅趕方式確保每只小鼠在跑道上跑步，直至小鼠最后寧愿待在電流刺激區受電擊也不愿或不能上跑道跑步為止。在第2和第4天給4個小組小鼠分別皮下注射的乙酰苯肼劑量為20和40 mg/kg。在第4天開始到第7天的4 d中，每天腹腔注射環磷酰胺劑量為50 mg/kg。

給藥：從造模第1天開始給藥，至第13天結束。空白對照組和模型組給與等體積的生理鹽水。

1.4.2 指標檢測

1.4.2.1 小鼠跑步力竭試驗

小鼠在處死的前1 d，通過動物實驗跑臺，考察小鼠的耐疲勞能力。具體方法：讓小鼠在動物實驗跑臺上跑步，直至小鼠最后寧愿待在電流刺激區受電擊也不愿或不能上跑道跑步為止，記錄小鼠的跑步路程。

1.4.2.2 小鼠外周血象檢測

在最后一次注射完環磷酰胺的第6天，摘眼球取血，小鼠血液放置在紫色EDTA-2抗凝管中并輕搖10～20次，防止溶血或凝血，用獸用血液分析儀檢測紅細胞數目、血紅蛋白濃度。

1.4.2.3 其他指標

1.4.2.3.1 臟器指數

小鼠脫頸處死，取小鼠胸腺和胰腺并稱重，于液氮中速凍5 min以上再轉移至-80 ℃冰箱保存。

1.4.2.3.2 體重

分別記錄小鼠造模前、造模后、處死前的體重。

1.4.2.3.3 肛溫

在處死前1 d，按照體溫計說明書測量小鼠肛溫并做記錄。

1.4.2.3.4 攝食量、飲水量

以小鼠處死前1 d的食量和水量減去處死時剩余的食量和水量為小鼠24 h的攝食量和飲水量。

2 結果與分析

2.1 體重增長量

如圖1所示，與正常組相比，模型組小鼠體重顯著負增長。與模型組相比，給藥組只有中劑量組能維持正增長，但與正常組相比仍有顯著差距。說明產品尚不能完全遏制乙酰苯肼、環磷酰胺導致的體重減輕。

圖1 補氣血核桃醬對小鼠體重增長量的影響

2.2 力竭跑步路程、攝食量、飲水量

如表1和圖2所示，與正常組相比，模型組的跑步路程、攝食量、飲水量顯著降低。與模型組相比，除補氣血核桃醬低劑量組的攝食量有顯著差異外，其余給藥的3個劑量組在跑步路程、攝食量、飲水量數據上差異不顯著。

表1 補氣血核桃醬對小鼠力竭跑步路程、攝食量、飲水量的影響

圖2 補氣血核桃醬對小鼠力竭跑步路程、攝食量、飲水量的影響

2.3 肛溫

如圖3所示，正常組小鼠的平均肛溫為36.96 ℃，模型組只有35.05 ℃，說明該模型能顯著降低小鼠的肛溫，而在給藥后，給藥組均能不同程度提高小鼠的肛溫，具有顯著意義。

圖3 補氣血核桃醬對小鼠肛溫的影響

2.4 臟器指數

如圖4所示，與正常組相比，模型組小鼠胸腺指數顯著降低，核桃醬中劑量組能顯著抑制小鼠的胸腺萎縮。

圖4 補氣血核桃醬對小鼠胸腺指數的影響

2.5 外周血象

如圖5所示，與正常組相比，模型組小鼠紅細胞數目和血紅蛋白濃度顯著負增長。與模型組相比，3個給藥組均能顯著升高由造模藥引起的紅細胞數目和血紅蛋白濃度的降低。

圖5 補氣血核桃醬對小鼠外周血象的影響

3 討論與結論

試驗采用乙酰苯肼+環磷酰胺+跑步力竭以建立小鼠的氣虛雙虛模型，通過體重增長量、肛溫、跑步力竭路程、攝食量、飲水量來考察補氣血核桃醬對小鼠氣虛的改善作用，通過對外周血象的檢測和胸腺脾臟指數來評判補氣血核桃醬對小鼠血虛的改善作用。

該模型能顯著降低小鼠的體重增長量、攝食量、飲水量、胸腺指數、紅細胞數目、血紅蛋白濃度、肛溫、力竭跑步距離。然而，該產品并不能顯著改善小鼠的攝食量、飲水量、力竭跑步距離這些氣虛指標，僅有中劑量組能夠抑制造模藥帶來的體重下降。然而，雖然氣虛指標效果不顯著，但是通過對小鼠的肛溫檢測，該產品能顯著升高由造模藥引起的肛溫下降情況。