人類婆羅雙樹樣基因4作為口腔鱗狀細胞癌腫瘤標記物的研究

文/焉妍，于建新

口腔鱗狀細胞癌是口腔頜面外科最常見的惡性腫瘤，大約占整個口腔惡性腫瘤的80%[1]。目前的治療方法，短期效果尚可，但是腫瘤細胞在緩解一段時間后仍會復發轉移，患者的5 年生存率較低。一些學者認為，這種不良結果可能與口腔鱗癌的發病機理不清和腫瘤細胞的特殊性有關[2]。臨床研究顯示，腫瘤干細胞是腫瘤發生發展的關鍵因素。SALL4 是SALL4 家族中的一員，它可以調控腫瘤干細胞，異常表達可導致肝癌、急性慢性粒細胞白血病、胃腸道等腫瘤的發生，突變可導致Duane-Radial 射線綜合征(DRSS)、Hoot-Oruam 綜合征(HOS)等遺傳性疾病[3]。那么SALL4 在口腔鱗癌中的表達是怎么樣的，能否為口腔鱗癌的臨床治療提供指導，本文進行了研究和探討。

1 數據和方法

在煙臺山醫院口腔科隨機抽取2017 年9 月至2018 年6 月接受治療的52 例口腔鱗癌患者為觀察組，這52 例患者的腫瘤旁組織為對照組，經兩名病理科醫生診斷，在我院道德倫理委員會審核同意的情況下（批準號：煙山倫準2017015 號），參與實驗的患者均只進行了手術治療，未進行放化療，從癌旁組織到病灶的距離大于5mm，且無腫瘤侵擾。其中男性24 例，女性28 例，年齡在52～66 歲之間，平均年齡(59.51±6.41)歲，腫瘤＞5cm 者27 例，腫瘤≤5cm 者25 例，中/高分化者36 例，低分化者16 例，淋巴結轉移者22 例，無轉移者30 例；臨床TNM I-II期37 例，III-IV 期15 例。兩組標本經10%中性緩沖福爾馬林固定，常規石蠟包埋。免疫組織化學方法檢測SALL4 蛋白的表達。

免疫組化法操作步驟及判斷標準：常規切4μm石蠟切片采用Roche 全自動免疫組化染色儀進行操作，采用免疫組化EnVision 方法檢測抗體表達。以清洗液替代1 抗體作陰性對照，以已知的陽性組織作陽性對照。SALL4 蛋白定位于細胞核，彌漫性或≥70%細胞核呈黃色或棕褐色判定為陽性表達。統計分析數據處理采用SPSSv.23.0，計量資料分別用卡方檢定和卡方檢定，用Kaplan-Meier 方法進行生存分析，用對數據檢驗兩組之間的差異。用Cox 比例風險回歸模型評價預后因素的獨立性。（P＜0.05）表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 SALL4在癌旁組織和口腔鱗癌組織中的表達

SALL4 在口腔鱗癌組織中的陽性表達率為 63.46%，明顯高于對照組的15.38%（P＜0.05）,見表1、圖1。

表1 口腔鱗癌組織及癌旁組織中SALL4 的表達[n(%)]

圖1 SALL4 在癌旁組織和口腔鱗癌組織中的病理學表達

A：SALL4 在口腔鱗癌組織中染色顯示細胞核陰性表達 En Vision 法 中倍放大；

B：SALL4 在口腔鱗癌旁組織中染色顯示細胞核陽性表達En Vision 法 中倍放大。

2.2 SALL4高陽性表達和口腔鱗狀細胞癌患者臨床病理參數之間的關系

SALL4 的表達水平與有無淋巴結轉移和TNM 分期有關（P＜0.05） 。SALL4 的表達水平與年齡、性別、腫瘤大小、組織分化無關 (P＞0.05) 。見表2。

表2 SALL4 高表達與其病理學特征的關系[n(%)]

2.3 SALL4高陽性表達與口腔鱗狀細胞癌患者生存時間的關系

回訪的52 例患者中，隨訪截止日期2022 年3月，隨訪時間為4 年，20 例患者因口腔鱗狀細胞癌復發去世（均為Ⅲ、Ⅳ患者），32 例存活，Kaplan-Meier 檢驗結果表明，實驗組、對照組平均生存期為（26.31±1.37）個月（P＜0.05），SALL4 高表達的實驗組患者的平均生存期為（26.31±2.48）個月，明顯低于對照組患者的（34.16±1.37）個月（P＜0.05)，表明SALL4 的高表達對患者的生存時間有明顯的影響。如圖2。

圖2 SALL4 高陽性表達與口腔鱗狀細胞癌患者生存時間的關系

2.4 影響口腔鱗癌患者預后的獨立危險因素分析

淋巴結是否有轉移、TNM 分期和SALL4 等危險因素是影響口腔鱗癌患者預后的因素。見表3。

表3 Cox 比例風險模型分析。

3 討論

據有關資料顯示，我國每年約有26 萬例新增口腔鱗癌患者和約12 萬例死亡患者。大多數患者有長年抽煙或飲酒的習慣，同時伴有口腔保健意識差，潰瘍和營養不良等。當前精準的手術治療、術后結合化療仍是口腔鱗癌的治療手段，但由于口腔鱗癌的自身特點使得其治療效果不佳，因此在治療上存在較大的缺陷[4]。目前學者們對各種惡性腫瘤的發病機制進行了研究，口腔鱗狀細胞癌也在其中，研究發現腫瘤干細胞在細胞遷移、侵襲、血管生成、抗凋亡和免疫逃逸等過程中發揮著重要作用，SALL4 又可以調控腫瘤干細胞。加之近些年來，一些腫瘤干細胞的相關基因作為腫瘤標志物應用于臨床治療，就使得SALL4 作為口腔鱗癌標記物成為可能。

SALL4 是SALL 家族的成員，其表達的高峰是在胚胎期，隨后表達逐漸減弱，成年后該基因在大多數組織器官中不表達[5]，SALL4 的研究開始于肺部的惡性腫瘤，研究數據顯示SALL4 因其特有的性質可以作為一種敏感而有效的腫瘤標志物[6]。 Ma 等[7]研究發現SALL4 在遺傳病DRRS 綜合征中顯著表達，顯示它是一個含有多個C2H2 鋅指狀結構的原癌基因。Farawela 也提出SALL4 可以作為一種良好的腫瘤標志物，它在各種腫瘤中的表達具有致癌作用[8]。還有研究表明SALL4 是一些途徑(如Wnt 途徑和BMP 途徑)的關鍵媒介，SALL4 可通過這些途徑調控腫瘤的發生發展[9]。Pan 等人[10]發現SALL4 可以區分生殖細胞腫瘤、轉移性癌癥和惡性黑色素瘤，可作為腫瘤診斷的標志物。Ommati 等人[11]也通過研究表明SALL4 是一種高度敏感有效的腫瘤標記物。Zheng 等人[12]發現SALL4 可能是肝癌預后的獨立危險因素，但其與臨床病理特征的關系不明顯，SALL4 主要作用于細胞核中的某些基因，從而發揮作用。上述研究為SALL4 可以作為口腔鱗狀細胞癌的標志物提供了理論基礎。

本研究結果表明，SALL4 在切取的口腔鱗狀細胞癌組織中，陽性表達率高達63.46%，明顯高于對照組（P＜0.05）。本研究還分析了SALL4 表達的臨床病理特征，發現SALL4 的高表達水平與有無淋巴結轉移和TNM 分期有關（P＜0.05）。SALL4 的表達水平與腫瘤的大小、年齡、性別、組織分化程度等并不相關（P＜0.05），結果提示SALL4 可能參與了腫瘤的轉移過程。SALL4 陽性表達患者的平均生存時間明顯短于SALL4 陰性表達患者（P＜0.05），提示SALL4高表達患者預后欠佳。

4 結論

SALL4 在 口腔鱗癌組織中呈明顯高表達，表明口腔鱗癌組織中可能存在腫瘤干細胞,SALL4 對腫瘤干細胞的調節與口腔鱗癌的發生發展密切相關，SALL4 有望成為口腔鱗癌的一個靈敏性、特異性良好的標志物，用于口腔鱗癌的臨床病理診斷和鑒別診斷。