苯氧威·噻嗪酮懸浮劑的高效液相色譜分析方法

杜秀利，王廣成，李 婷，高立明，吳春先，許艷秋*

(1.瀘定縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全(質(zhì)量檢測)中心，四川 甘孜 626100；2.四川省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳植物保護(hù)站，四川 成都 610045)

苯氧威(Fenoxycarb)，又名雙氧威、苯醚威，CAS登記號79127-80-3，是一種非萜烯類氨基甲酸酯類化合物。苯氧威既能破壞昆蟲的內(nèi)分泌激素，干擾昆蟲發(fā)育和變態(tài)的過程，殺滅蟲卵，又有胃毒和觸殺作用，對鱗翅目、雙翅目等害蟲有特效，是一種廣譜、低毒的昆蟲生長調(diào)節(jié)劑和殺蟲劑[1-2]。噻嗪酮(Buprofezin)，CAS登記號69327-76-0，是一種噻二嗪類昆蟲生長調(diào)節(jié)劑，屬昆蟲蛻皮抑制劑，同時也具有觸殺和胃毒作用，對鞘翅目，部分同翅目及蜱螨目害蟲具有持效殺幼蟲活性[3]。目前我國登記的苯氧威與噻嗪酮的混配制劑主要用于柑橘樹上蚧殼蟲的防治。

目前公開報道的文獻(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)中已有苯氧威[1-2]和噻嗪酮[4-5]相關(guān)的檢測方法，但未查見二者混配制劑或苯氧威懸浮劑單制劑檢測方法的相關(guān)報道，因此，本文采用高效液相色譜儀建立了一種同時測定產(chǎn)品中苯氧威和噻嗪酮有效成分含量的方法，該方法方便、高效、準(zhǔn)確，是一種理想的分析方法，可用于苯氧威·噻嗪酮混配制劑，及苯氧威懸浮劑、噻嗪酮懸浮劑等相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制和檢測。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑和試劑 苯氧威標(biāo)準(zhǔn)品，99.71%；噻嗪酮標(biāo)準(zhǔn)品，99.0%；苯氧威·噻嗪酮懸浮劑，25%；甲醇，色譜純；超純水。

1.2 儀器條件 高效液相色譜儀：Agilent 1260，配DAD檢測器，美國安捷倫科技有限公司；電子天平：AB204-S，瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)；過濾器：濾膜孔徑0.45 μm。

色譜柱：Eclipse plus C18，5.0 μm，250 mm×4.6 mm(i.d.)不銹鋼柱；流動相：Ψ(甲醇+水)=80+20；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：230 nm；進(jìn)樣體積：3.0 μL。采用外標(biāo)法，峰面積定量。在該色譜條件下，苯氧威的保留時間約為5.3 min，噻嗪酮的保留時間約為11.3 min。典型色譜圖(圖1)。

圖1 相同條件下苯氧威+噻嗪酮標(biāo)樣和懸浮劑樣品的液相色譜圖

1.3 檢測步驟

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 準(zhǔn)確稱取苯氧威標(biāo)準(zhǔn)品約0.03 g(精確至0.000 2 g)，噻嗪酮標(biāo)準(zhǔn)品約0.12 g(精確至0.000 2 g)，置于50 mL的容量瓶，加入適量甲醇超聲至完全溶解后，放置至恢復(fù)室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻備用。

1.3.2 試樣溶液配置 準(zhǔn)確稱取含苯氧威約0.03 g的苯氧威·噻嗪酮樣品(精確至0.000 2 g)，置于50 mL的容量瓶，用水分散后用甲醇溶解，超聲至完全溶解后，放置至恢復(fù)室溫，用甲醇稀釋至刻度，用0.45 μm孔徑濾膜過濾，收集濾液備用。

1.3.3 進(jìn)樣分析 按前文所述的儀器條件運(yùn)行液相色譜儀，待儀器完全穩(wěn)定，既基線平穩(wěn)且無明顯波動，且連續(xù)2次進(jìn)樣的標(biāo)準(zhǔn)溶液苯氧威(噻嗪酮)響應(yīng)值變化<1.5%后，進(jìn)行樣品的測定。按照標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序檢測苯氧威和噻嗪酮的含量。

1.3.4 結(jié)果計算 利用工作站對苯氧威(噻嗪酮)積分，并分別將標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液的峰面積平均，待測樣中苯氧威(噻嗪酮)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(%)的計算公式如下：

式中：A1為苯氧威(噻嗪酮)標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積平均值；A2為苯氧威(噻嗪酮)試樣溶液峰面積平均值；m1為稱取苯氧威(噻嗪酮)標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量，g；m2為稱取苯氧威(噻嗪酮)待測樣品的質(zhì)量，g；ωs為標(biāo)準(zhǔn)品中苯氧威(噻嗪酮)的純度，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動相和檢測波長的選擇 本文優(yōu)化了檢測體系的流動相比例和檢測波長。試驗采用甲醇+水體系作為流動相，經(jīng)優(yōu)化發(fā)現(xiàn)當(dāng)甲醇+水的比例為80+20時，苯氧威和噻嗪酮能夠很好地分離，且無雜質(zhì)干擾，保留時間適中，因此選擇該比例為試驗的流動相。采用二極管陣列檢測器(DAD)在190～400 nm吸收波長范圍內(nèi)觀察苯氧威和噻嗪酮的紫外吸收曲線，掃描結(jié)果(圖2)，從圖可知苯氧威的最大吸收波長約在202 nm，次大吸收在228 nm，噻嗪酮最大吸收約在202 nm，次大吸收在在244 nm。由于在202 nm附近有紫外吸收的成分較多，容易出現(xiàn)雜質(zhì)干擾，結(jié)合樣品中各組分的含量、出峰峰形及干擾峰情況，最終選擇230 nm為該方法的檢測波長。

圖2 苯氧威+噻嗪酮的紫外吸收光譜圖

2.2 分析方法特異性 試驗分別對苯氧威·噻嗪酮混合標(biāo)樣和制劑樣品中苯氧威和噻嗪酮的純度進(jìn)行檢測，采用HPLC-DAD 峰純度分析法來鑒別苯氧威和噻嗪酮(樣品中苯氧威和噻嗪酮的純度圖(圖3、4)。試驗結(jié)果顯示混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中苯氧威和噻嗪酮的純度分別為993.470和999.922，樣品中苯氧威和噻嗪酮的純度分別為991.022和999.986，峰純度結(jié)果均>990，有效成分出無其他物質(zhì)干擾，符合定量分析要求。

圖3 苯氧威·噻嗪酮懸浮劑樣品中苯氧威的HPLC-DAD峰純度色譜圖

圖4 苯氧威·噻嗪酮懸浮劑樣品中噻嗪酮的HPLC-DAD峰純度色譜圖

2.3 非分析物干擾 用以上方法分別對空白樣品、苯氧威原藥和噻嗪酮原藥進(jìn)行色譜分析結(jié)果(圖5)，由圖可知空白樣品在苯氧威和噻嗪酮的出峰位置無干擾峰，苯氧威原藥與噻嗪酮原藥之間互相沒有其他未分離物質(zhì)的干擾。

圖5 非分析物干擾

2.4 分析方法的線性相關(guān)性 配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，苯氧威標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別為0.188 1、0.408 2、0.592 4 、0.913 8、1.881 0 mg/mL，噻嗪酮濃度分別為0.623 7、1.927 5、2.346 3、2.924 0、5.316 3 mg/mL，分別對苯氧威(噻嗪酮)的進(jìn)行檢測。以苯氧威(噻嗪酮)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，分別擬合線性回歸方程并作線性相關(guān)圖，所得結(jié)果(圖6)，在給定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，苯氧威和噻嗪酮的質(zhì)量濃度與峰面積均呈良好的線性關(guān)系。苯氧威的線性方程為Y=9 015.9X-132.2，相關(guān)系數(shù)(R2)為0.999 5；噻嗪酮的線性方程為Y=5 275.4X+170.04，相關(guān)系數(shù)(R2)為0.999 7。

2.5 分析方法精密度 對同一25%苯氧威·噻嗪酮懸浮劑樣品按照本方法進(jìn)行5次平行測定，計算苯氧威和噻嗪酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，用以考察方法的精密度，試驗結(jié)果(表1)。由表可見，苯氧威的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.002 3，變異系數(shù)為0.044%，噻嗪酮的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.005 2，變異系數(shù)為0.025%，該結(jié)果明顯低于horwitz公式計算的理論變異系數(shù)，證明該方法的精密度符合檢測要求。

表1 方法精密度數(shù)據(jù)表

2.6 方法準(zhǔn)確度 稱取一定量的懸浮劑空白樣品5份，分別加入一定量的苯氧威和噻嗪酮標(biāo)準(zhǔn)品，混勻配置成試驗樣品，按照前文所述方法檢測溶液中苯氧威和噻嗪酮的含量，計算回收率，結(jié)果(表2)。由表可知，將該方法用于測定苯氧威和噻嗪酮懸浮劑的平均回收率分別為100.03%和100.08%，符合CIPAC的基本要求。

表2 方法準(zhǔn)確度數(shù)據(jù)表

3 結(jié)論

實驗結(jié)果表明，將本方法用于苯氧威和噻嗪酮懸浮劑中有效成分含量的測定，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，線性關(guān)系良好，具有簡便、快速、準(zhǔn)確及分離效果好的優(yōu)點(diǎn)，是此類產(chǎn)品的質(zhì)量控制有效可行的檢測方法。