屏障環境下SPF大小鼠的飼養管理

王昌軍 單嬌 逄春華 劉小卓 李新 常凱

摘要：目前雖有大量文獻就大小鼠的飼養及屏障系統運營管理進行討論，但較為籠統，對詳細的管理方法及動物飼養狀態記錄較少。本文根據筆者工作實際就大小鼠在屏障環境下的飼養管理做一簡要探討。

關鍵詞：屏障環境；大小鼠；飼養管理

隨著動物實驗在各類科研以及教學中的普及使用率的上升，對實驗動物的需求也在日益增長[1]，對SPF級動物需求也更為迫切。健康的實驗動物是開展動物實驗科學研究的基礎，保持屏障環境內的清潔度是SPF級動物房正常運行的關鍵，目前雖有不少文獻就大小鼠的飼養及屏障系統運行管理進行討論，但較為籠統，對詳細的管理方法及動物飼養狀態記錄較少。筆者在動物房工作多年，積累了豐富的工作經驗，根據屏障環境的特點，建立了一套行之有效的屏障環境實驗室運行管理規范。本文就大小鼠在屏障環境下的飼養管理做一簡要探討。

1 實驗動物房基本情況

1.1 人員、物品、動物的流向

在目前屏障環境的管理中，人員進出屏障環境是影響環境細菌數量和細菌種類的主要因素之一，因此為了減少屏障環境受到污染，保證實驗動物質量與實驗準確性，必須加強對實驗人員的管理[2]。動物房按照相關管理規定，制定了《人員管理程序》等相關制度，嚴格規范人員進出，要求所有進出屏障環境的實驗人員均需要持有實驗動物從業人員資格證，未經授權，外部人員不得隨意進出動物房。對來訪參觀人員實行預約制度，并填寫《人員進出登記表》。同時針對屏障環境內物品和實驗動物的流向也做出了明確規定。詳見圖1。

1.2 動物房主要儀器設備

動物房目前在用儀器設備多達50臺套，關鍵設備有屏障環境系統、IVC系統、銳思捷純水系統、新華雙扉高壓滅菌器等。為確保儀器設備正常運轉，動物房制定了《儀器設備操作規程》《實驗動物設施衛生與消毒標準操作規程》《停電、停水、停氣、火災、設備故障應急處理操作規程》等規則制度，同時為確保SPF區環境潔凈度，定期委托第三方公司對中央空調控制系統定期保養與維護，并及時更換濾膜、濾芯等主要配件。壓力表、安全閥和呼吸器等設備，每年定期送青島市特種設備檢驗檢測研究院進行計量校驗。目前動物房采用的是屏障環境中央控制系統，通過電腦設備可全面控制屏障環境內的門禁系統、報警系統、溫濕度和壓力等。圖2為動物房IVC系統。

1.3 動物房環境衛生監測

環境指標的主要參數主要包括溫度、濕度、噪聲、光照、室內風速、氨濃度、室內換氣次數、各區域壓力差等[3]。根據動物實驗要求，溫度、濕度和壓差需要每日記錄，根據它們的數值變化，對屏障系統狀態進行簡單維護操作，如風閥或空氣過濾器等。每半年一次委托外部第三方機構對動物房環境進行環境監測。同時為確保動物房內衛生，SPF區域動物飼料和飲用水均進行營養指標和微生物指標監測，主要包括水分及揮發物質、蛋白質、大腸桿菌、大腸菌群、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等項目，檢測合格后方可進去飼喂大小鼠。

1.4 飼養籠盒及屏障內外消毒方法

動物房SPF區現有飼養籠盒488個，其中檢疫觀察籠盒100籠，大鼠籠盒100個，可飼養大鼠200只，小鼠籠盒288個，可飼養小鼠576只。為避免交叉污染，新采購或已使用的籠盒均需高壓滅菌處理，將清洗過的籠盒放入雙扉高壓滅菌器，選擇滅墊料程序，高壓滅菌后傳入消毒后室。對于籠盒內動物使用的飼料、實驗酒精等不耐熱的物品進入SPF區則采用傳遞窗紫外線消毒30 min傳入。每次清洗工作完畢，將清洗工具（如拖把、抹布等）用有效氯或有效溴含量為250～500 mg/L的消毒液浸泡，作用15～30 min后，用清水沖洗、擰干，放置指定位置。

2 屏障環境下大、小鼠飼養要點

動物房飼養的鼠為大、小鼠ICR體系，在采購實驗動物時，應向有實驗動物生產許可證、信譽好、動物質量佳、有嚴格管理和一定規模的單位購入，目前采購供應商是濟南朋悅實驗動物繁育有限公司。當SPF動物抵達后，首先檢查帶空氣過濾裝置的運輸箱密封情況，然后再對照運輸箱上的標簽，核對動物的信息與要求是否相符，此外，還要觀察動物的健康狀況，包括觀察動物的精神狀態、被毛、糞便等方面是否正常。為對實驗動物進行區分，動物房采用染色法對實驗動物進行標記，如被毛、四肢等處進行涂染，以染色部位、顏色不同來標記區分實驗動物。同時對實驗動物進行編號，編號原則為：動物品種+驗收日期+籠號或者（籠號+序號）。

2.1 小鼠飼養管理要點

小鼠體型小，胃容量更小，但性格比較活躍，喜歡啃咬物品，目前采取的是籠盒飼養方式，每盒最多5只，在飼喂過程中，應采取少量多次添加的方式。自飼料間領取適當用量的已輻照過的飼料，確認包裝完好后，在傳遞窗內紫外消毒后，傳入屏障內消毒后室暫存，開袋后應于一周內飼喂完，若略有剩余，應將其做無害化處理后丟棄。小鼠飲水必須保證每天換水，不能中斷，更換時應清洗并消毒飲水瓶及吸水管，保證飲用水清潔。飲水瓶應符合無毒、無味，流水通暢，不漏水，便于動物吸取，保持飲水不被污染，便于清洗、耐化學或高溫消毒的要求。發現有漏水跡象的水瓶及瓶蓋，應及時剔除。

2.2 大鼠飼養管理要點

大鼠的飼養管理基本與小鼠相同。大鼠的飼養室要注意安靜、避免噪聲，強烈的噪聲易引起大鼠狂躁不安[4]，易產生實驗誤差。

同時由于大鼠體型比較大，排泄物也多，產生的有害氣體多（氨氣、硫化氫等）。在飼養過程中要控制大鼠的飼養密度，勤換墊料，以每周更換兩次為宜。

2.3 籠盒和籠具注意事項

籠盒一定要選擇高品質、耐高溫籠盒，以避免在高壓過程中造成盒體變形、損壞等，本動物房采用聚乙烯塑料飼養籠，該籠盒可耐120 ℃高溫，具有易清潔、使用壽命長的特點。

墊料是動物直接接觸的鋪墊物，有舒適、吸濕、保暖、可做窩等作用，首選不可食并舒適的刨花或鋸末。應注意檢查是否有異味、潮濕、發霉、粉塵等異樣。自倉庫領取需用量，適量鋪墊于籠盒中，與籠盒一起經121 ℃、20 min，高溫高壓滅菌后使用，注意滅菌的干燥效果，及時反饋給滅菌器操作人員。墊料經高壓滅菌處理后，保質期不超過一周，超過一周轉移出屏障，棄用。

廢棄墊料傾倒應在清洗間內進行，并用專用“廢棄物收集袋”包裝，統一存放在污物間，交由專人進行處理。

2.4 動物房設施消毒

加料、給水作業結束后，工作人員需將籠架上的墊料、飼料殘渣用刷子或抹布掃清，消毒液擦拭消毒。對于箱式籠子，將動物取出放入滅菌過的新籠具，將墊料連同籠具一起經過污物走廊運至消毒后室，小型飼養箱墊料污物等裝入塑料袋內，每周更換1～2次。地板上的污物、墊料、飼料殘渣清掃干凈，用消毒液擦拭兩側的門特別是門把，再用消毒液拖地。貯物間、二更、風淋、緩沖間和清潔走廊，用消毒藥水拖地。把換出的物品推出污物走廊后，進行拖地、消毒。過氧乙酸的配制和使用方法見表1。

3 小結

青島海關技術中心已建成動物房約600 m2，擁有SPF級動物飼養區300余m2和300余m2的普通動物飼養區，可飼養大、小鼠、豚鼠和兔子等實驗動物，除了核心動物房外，還具有P2級生物安全實驗室、細胞培養室和病理實驗室等輔助實驗室。目前可開展化妝品及固廢等2大類10個項目的動物實驗。

在工作實踐中，總結了一套規范的、可操作性強的屏障環境實驗室運行管理規范制度，最大限度地發揮屏障環境的功效。為確保試驗質量，實驗動物均從具備生產許可資質的濟南朋悅實驗動物中采購。但在實際飼養過程中，也存在一系列的小問題，比如說部分鼠出現被毛粗糙發紺、斷尾現象，其約占飼養總數的10%，經綜合分析研判，導致該種癥狀發生的原因是籠盒內濕度過低，為此加強巡查，要求值班人員及時查看中央控制系統溫濕度參數指標，時刻關注獨立通氣籠盒（IVC）參數變化，降低換氣次數，調高溫濕度參數，為實驗動物提供良好的生活環境，避免因環境不潔導致動物疾病發生。目前雖然動物房在動物飼養方面取得了一定的經驗，但是也遇到了不少問題，在屏障環境下如何進一步完善管理，給實驗動物提供更好的生活環境，其運行模式和管理方式都有待進一步探討。

參考文獻：

[1] 齊長永，劉永杰.SPF級大、小鼠生產規范化管理要素及實踐[J].實驗動物與動物實驗，2012，30（4）：150-153.

[2] 吳克勤，陳濤，吳香新.淺析屏障環境實驗室的管理[J].海峽藥學，2014，26（8）：171-172.

[3] 李學勇，靳洪濤，劉欣.實驗動物屏障設施管理中的幾個關鍵問題[J].中國比較醫學雜志，2008，18（1）：69-76.

[4] 秦芝蕾，張新創，左謙益. SPF 級實驗動物屏障系統的建立及運營分析[J].當代畜牧，2012（3）：54-58.