過敏性鼻炎患兒血清HLA-G、Claudin-1水平變化及與病情嚴重程度的關系*

李 娟,胡廣成,陳歡歡,王 昕,董曉莎,曹煥珍

黃河三門峽醫院兒科,河南三門峽 472000

過敏性鼻炎是一種常見疾病,癥狀常見打噴嚏、鼻塞、鼻癢和流鼻涕,是由免疫球蛋白E介導的對吸入性變應原、病原體和其他外來物質過敏引起的鼻黏膜過敏性疾病[1]。過敏性鼻炎對患者生活質量產生嚴重的負面影響,是全球公共衛生、醫療和經濟問題[2]。與輕度患者相比,中重度過敏性鼻炎患者表現出更多的焦慮、抑郁、疲勞、社交障礙和認知功能障礙等體征[3]。流行病學研究表明,兒童過敏性鼻炎患病率高于成人[3]。該病由于缺乏明確的國際指南,經常被誤診和不善治療[4]。人類白細胞抗原G(HLA-G)是一種具有免疫調節特性的分子,其免疫抑制作用是通過與其同源受體的相互作用發揮的,在免疫活性細胞上表達[5]。近年來,HLA-G在調控系統性紅斑狼瘡、類風濕關節炎等自身免疫性疾病中的能力已經得到了驗證[6],但是在過敏性鼻炎中的調節能力和調節模式還需進一步研究。由多種封閉蛋白(Claudin)表達形成的緊密連接構成上皮完整性成為了機體的第一層屏障,過敏性鼻炎往往是由于第一層屏障的損壞而導致,體內外研究也表明封閉蛋白1(Claudin-1)作為緊密連接的一部分在過敏性鼻炎患者中會發生下調[7-8]。因此,本研究擬研究過敏性鼻炎患兒在治療前后血清中HLA-G和Claudin-1的水平變化,探討HLA-G和Claudin-1的變化與病情嚴重程度的關系,以期為過敏性鼻炎患兒病情評估和臨床治療提供參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2021年7月1日至2022年7月1日本院收治的86例過敏性鼻炎患兒作為觀察組,其中男性46例、女性40例,平均年齡(11.35±2.51)歲;另選取同期34例本院體檢健康兒童作為對照組,其中男性19例、女性15例,平均年齡(11.62±1.47)歲。觀察組和對照組的性別、年齡比較差異均無統計學意義(P>0.05),具有可比性。納入標準:(1)符合《中國變應性鼻炎診斷和治療指南(2022年,修訂版)》[9]和世界衛生組織制定的《變應性鼻炎及其對哮喘的影響指南》[10];(2)經皮膚點刺實驗確定為塵螨過敏;(3)年齡8～14歲。所有細節及步驟在試驗開始前都詳細告知受試兒童家屬,并簽署知情同意書。排除標準:(1)半鼻腔鼻竇炎癥反應、鼻息肉、鼻中隔嚴重偏曲或其他過敏癥狀;(2)合并心、肺、肝、腎功能不全;(3)合并其他免疫系統病變、呼吸系統病變及其他慢性炎癥性疾病;(4)入組前使用其他影響治療情況的藥物;(5)不能完整按照療程治療。本研究通過本院倫理委員會的審核和批準。

1.2方法 分別于對照組和觀察組入組和觀察組治療10周、30周、1年測定其血清HLA-G和Claudin-1水平。所有受試兒童均于早晨空腹狀態下采集靜脈血5 mL,以3 000 r/min離心10 min(離心半徑10 cm)分離血清并保存于-80 ℃冰箱。采用酶聯免疫吸附試驗法檢測血清HLA-G(試劑盒由武漢吉立德生物公司提供)、Claudin-1(試劑盒由上海茁彩生物科技有限公司提供)水平。

過敏性鼻炎癥狀量表(SFAR)評分內容包括噴嚏、鼻塞、流涕、鼻癢等4項,每項1～3分,總分值越高代表患兒癥狀越嚴重,7分為臨界值,≥7分確診為過敏性鼻炎(7～10分為輕度,11～16分為中重度)[11]。采用視覺模擬量表(VAS)評分對患兒癥狀程度進行評價,其中4分為臨界值,≥4分為中重度,影響工作和生活,<4分為輕度,不影響工作和生活[12]。比較分析治療前和治療后不同時段患兒的SFAR、VAS評分,不同SFAR、VAS評分患兒血清HLA-G、Claudin-1水平,并分析患兒血清HLA-G、Claudin-1水平與SFAR和VAS評分的關系。

2 結 果

2.1兩組血清HLA-G、Claudin-1水平比較 觀察組治療前后血清HLA-G水平較對照組升高,Claudin-1水平較對照組降低,差異均有統計學意義(P<0.05)。觀察組治療30周、1年后血清HLA-G水平較治療前降低,Claudin-1水平較治療前升高,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 觀察組和對照組血清HLA-G、Claudin-1水平比較

2.2觀察組病情嚴重程度變化情況比較 與治療前比較,觀察組治療30周和1年后SFAR評分降低,VAS評分輕度/中重度比例明顯升高,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3不同疾病嚴重程度患兒血清HLA-G、Claudin-1水平比較 結果顯示,過敏性鼻炎患兒血清HLA-G水平隨著SFAR、VAS評分的增加,即病情程度的加重而升高,差異有統計學意義(P<0.05);血清Claudin-1水平隨著SFAR、VAS評分的增加,即病情程度的加深而降低,差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同疾病嚴重程度患兒血清HLA-G、Claudin-1水平比較分)

2.4血清HLA-G、Claudin-1水平與疾病嚴重程度的關系 Spearman相關性分析結果顯示,過敏性鼻炎患兒血清HLA-G水平與表示疾病嚴重程度的SFAR評分(r=0.433,P<0.05)、VAS評分(r=0.442,P<0.05)呈正相關,Claudin-1水平與表示疾病嚴重程度的SFAR評分(r=-0.483,P<0.05)、VAS評分(r=-0.468,P<0.05)呈負相關。

3 討 論

過敏性鼻炎又稱變應性鼻炎,鼻黏膜作為人體的第一道防御,黏膜表面組織的完整性和均一性,對宿主人體的健康有著極高的影響。社會發展水平的提高伴隨著生存環境的惡變,過敏率逐年增加,過敏患者年齡逐漸降低,過敏時的不良癥狀及過敏誘發的哮喘、結膜炎、鼻竇炎等疾病風險,嚴重影響人們的工作和生活[4]。機體的免疫應答對于過敏性鼻炎的發生很重要,當機體首次接觸變應原時,機體處于致敏狀態產生免疫球蛋白(Ig)E抗體吸附在肥大細胞和嗜堿粒細胞表面。當再次接觸該變應原時,IgE與其發生特異性抗原-抗體反應,引起載體肥大細胞和嗜堿粒細胞發生變異,刺激產生多種生物活性介質,并合成炎性介質,這些炎性介質在鼻黏膜處共同作用導致過敏性鼻炎的發生[13]。目前針對過敏性鼻炎主要采取預防與治療相結合的方式,隔離變應原是最簡單有效的預防措施,治療主要采取藥物治療、激活免疫治療、建立耐受的免疫治療[14]。神經-免疫機制是過敏性鼻炎機制研究的重大發現,中樞神經系統-免疫細胞-神經肽/細胞因子網絡為干預治療過敏性鼻炎提供了重要理論基礎。

HLA-G通過與外周免疫細胞上的免疫抑制性受體,包括LILRB1、LILRB2和KIR2DL4結合來介導免疫[15]。在季節性和常年性變應性鼻炎患者的血清中可檢測到可溶性HLA-G分子水平升高,其水平與變應原特異性IgE水平、臨床嚴重程度、藥物消耗和對變應原特異性免疫治療的反應相關[16]。可溶性HLA-G分子也存在于過敏性哮喘患者的氣道上皮中,以及哮喘患者的血漿和支氣管肺泡灌洗中,其水平與變應原特異性IgE水平相關。雖然目前很難完全定義HLA-G在過敏性疾病中的作用,但有研究顯示其在過敏反應期間由免疫細胞表達和分泌,可能抑制過敏性炎癥反應[17-18]。在本研究中,過敏性鼻炎兒童血清HLA-G水平明顯高于正常兒童,并且在臨床治療后水平逐漸降低。

完整的黏膜屏障對于保護機體免疫系統免受有害病原體的暴露至關重要。過敏性鼻炎患者鼻上皮屏障會發生破壞,細胞連接分子包括緊密連接和橋粒細胞的損傷在發病機制中起重要作用[19]。緊密連接是由多種跨膜封閉蛋白包括Claudin-1、Claudin-2、Claudin-4等組成的位于上皮細胞的細胞間連接復合物[8]。有研究者在過敏性炎癥性疾病患者中發現了功能失調的上皮完整性及緊密連接表達的改變[8]。還有研究發現,多種Claudin在過敏性鼻炎患者鼻上皮細胞中的mRNA表達顯著降低,提示Claudin在維持鼻上皮屏障功能中扮演重要角色[19]。Claudin-1在鼻黏膜上皮的頂端連接處,因此更容易受到變應原的損害,對于為吸入病原體建立限速屏障尤其重要[19]。在本研究中,發現過敏性兒童患者血清Claudin-1水平顯著低于健康兒童,在臨床治療后逐漸回復,與mRNA轉錄水平的變化趨勢一致。

SFAR和VAS評分聯合用于評估過敏性鼻炎的癥狀嚴重程度,分數越高患兒病情越嚴重。本研究分析了患兒血清HLA-G和Claudin-1水平與疾病嚴重程度的相關性,結果表明,血清HLA-G水平與疾病嚴重程度呈正相關,當疾病程度加重時,HLA-G水平升高;血清Claudin-1水平與疾病嚴重程度呈負相關,輕度過敏性鼻炎患兒血清Claudin-1水平高于中重度患兒。這可能與HLA-G的免疫調控和Claudin-1的屏障保護作用相關,Claudin-1表達異常影響了鼻黏膜上皮屏障功能的完整性,與HLA-G免疫調節功能的降低共同促進了過敏性鼻炎的發生和發展。

因此,HLA-G和Claudin-1均是細胞表面的分泌蛋白,與過敏性鼻炎的嚴重程度相關,二者均可作為評估臨床嚴重程度的生物標志物,對二者表達的調節可能是過敏性鼻炎的潛在治療方法。但是本研究未對HLA-G、Claudin-1的關系進行闡述,未能說明二者在調控過敏性鼻炎過程中的相互作用,其在過敏性鼻炎患兒中的具體作用機制尚需進一步研究。