三重基序蛋白28對乳腺癌細胞增殖能力和腫瘤免疫微環(huán)境的影響

付琳琳，馬保東，張書娟，霍彥平

(1.鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院乳腺外科,河南 鄭州 450001;2.鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院干細胞再生醫(yī)學轉化中心,河南 鄭州 450001;3.鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院檢驗科,河南 鄭州 450001)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤,也是女性癌癥死亡的主要原因[1]。據2020年全球癌癥統(tǒng)計顯示,全球新發(fā)乳腺癌病例230萬例,占所有癌癥患者的11.7%;其中2020年死亡人數超過 68.5萬例[2]。近年來,乳腺癌的診斷和治療取得了巨大進展,但乳腺癌患者的預后仍然較差。目前,乳腺癌的治療仍以手術為主,聯合化學治療、放射治療、內分泌治療和靶向治療等其他輔助治療[3-4]。近期,針對不同亞型乳腺癌靶向免疫治療研究取得了突破性進展,程序性死亡受體1 (programmed cell death protein 1,PD-1)/程序性死亡-配體1 (programmed cell death 1 ligand 1,PD-L1)通路的拮抗劑可以在一些轉移性三陰性乳腺癌患者中誘導持久的臨床效果[5-6]。因此,開發(fā)預測新的免疫治療靶點將對治療乳腺癌以及改善患者的預后帶來更多希望。三重基序蛋白28(tripartite motif-containing 28,TRIM28)是1個包含多個結構域的大分子蛋白,屬于人類三聚體蛋白家族中的一員,也被稱為KRAB相關蛋白1或轉錄中間因子1β[7]。TRIM28參與調控多種生物進程,包括細胞增殖、侵襲、分化和衰老等[7]。不僅如此,TRIM28還在T細胞活化和T細胞耐受中起著至關重要的作用[8]。研究發(fā)現,黑色素瘤[9]、腎透明細胞癌[10]和肺腺癌[11]等均與TRIM28相關的免疫應答有關。目前,TRIM28對乳腺癌細胞的影響及其與腫瘤免疫微環(huán)境之間的關系尚不清楚?；诖?本研究旨在通過生物信息學方法結合體外實驗探索TRIM28在乳腺癌中的表達水平及其對乳腺癌細胞的影響,并分析TRIM28與乳腺癌中免疫浸潤細胞之間的關系,為后續(xù)進一步發(fā)掘乳腺癌免疫治療的新靶點提供參考。

1 材料與方法

1.1 乳腺癌組織及癌旁組織標本收集

收集2020年9月至2022年1月在鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院進行診治的39例乳腺癌患者的石蠟包埋腫瘤組織標本及配對的癌旁組織標本。納入標準:(1)所有標本經病理學檢查確診為乳腺癌;(2)所取癌組織標本位于瘤體中央,無出血、壞死及囊性病變。排除標準:(1)手術前經化學治療、放射治療和免疫治療;(2) 乳腺癌合并其他器質性疾病及惡性腫瘤。本研究由鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院倫理委員會批準,所有患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 細胞、主要試劑和儀器

MCF7乳腺癌細胞系購自武漢普諾賽生命科技有限公司。達爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco′s modified Eagle′s medium,DMEM)、40 g·L-1多聚甲醛、質量分數0.1%結晶紫染液購自北京索萊寶科技有限公司,Opti-MEM培養(yǎng)基購自美國賽默飛世爾科技有限公司,siRNA購自蘇州吉瑪基因股份有限公司,TRIM28抗體購自美國Cell Signaling Technology公司,山羊抗兔免疫球蛋白G(immunoglobulin,IgG)購自英國Abcam公司,Omni-ECL超靈敏化學發(fā)光檢測試劑盒購自上海雅酶生物醫(yī)藥科技有限公司,二氨基聯苯胺(diaminobenzidine,DAB)顯色液購自美國Biogradetech公司,細胞計數盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)購自上海雅酶生物醫(yī)藥科技有限公司;正置顯微鏡購自日本OLYMPUS公司,細胞恒溫培養(yǎng)箱購自香港力康生物醫(yī)療科技控股有限公司,超凈工作臺、細胞計數儀購自美國賽默飛世爾科技有限公司,電泳儀、凝膠成像儀購自美國Bio-Rad公司,酶標儀購自美國Molecular Devices公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 免疫組織化學染色法檢測乳腺癌組織及癌旁組織中TRIM28蛋白的表達

取石蠟包埋的乳腺癌組織和癌旁組織,應用二甲苯脫蠟,梯度乙醇水化,高溫抗原修復,體積分數3% 過氧化氫溶液室溫孵育15 min,滴加TRIM28一抗(滴度為1：50),4 ℃孵育過夜;滴加辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔 IgG二抗(滴度為1：5 000),室溫孵育30 min。DAB顯色液顯色,蘇木精復染,自來水沖洗,梯度乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹脂封片,應用正置顯微鏡觀察細胞染色結果;使用免疫組織化學評分(histochemistry score,H-score) 半定量評估染色強度和在特定強度范圍內染色細胞的百分比。H-score=Σpi(i+1),式中pi表示陽性細胞數量占切片中所有細胞數量的百分數;i代表著色強度。H-score的范圍為0～300,數值越大表示TRIM28蛋白表達水平越高。

1.3.2 細胞培養(yǎng)

將MCF7細胞接種于含體積分數10%胎牛血清和體積分數1%青霉素/鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基,置于37 ℃、含體積分數5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),取對數生長期細胞進行后續(xù)實驗。

1.3.3 siRNA干擾實驗敲低TRIM28

取對數生長期MCF7細胞,隨機分為si-control組和si-TRIM28組;在50 μL的Opti-MEM培養(yǎng)基中加入0.5 μg DNA制備為A液(si-control組加入空載質粒,si-TRIM28組加入敲低TRIM28的質粒);用50 μL Opti-MEM培養(yǎng)基稀釋1 μg的RNAi-Mate制備為B液,室溫孵育5 min。將A液和B液混勻后室溫孵育30 min;將所得到的DNA/RNAi-Mate復合物加入到接種MCF7細胞(每孔1×105)的24孔板中,補充Opti-MEM培養(yǎng)基至500 μL,培養(yǎng)48 h后更換為含有體積分數10%胎牛血清的無雙抗DMEM培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)至細胞融合度達到80%～90%時進行后續(xù)實驗操作。

1.3.4 Western blot法檢測MCF7細胞中TRIM28蛋白表達

取轉染后的si-control組和si-TRIM28組MCF7細胞,使用免疫沉淀裂解緩沖液裂解,提取細胞的總蛋白后定量測定蛋白濃度,將2組中等量的蛋白質在十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate- polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)凝膠上進行電泳分離,在冰浴條件下以200 mA電流轉膜2 h將其轉移至聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride,PVDF)膜上。室溫下使用50 g·L-1的脫脂牛奶和含Tween20的三羥甲基氨基甲烷緩沖液將膜封閉2 h,滴加TRIM28、β-actin一抗(滴度為1：1 000)室溫孵育1 h,并4 ℃孵育過夜;滴加相應二抗(滴度為1：5 000)室溫下孵育2 h,每次10 min洗脫3次。使用Omni-ECL超靈敏化學發(fā)光檢測試劑盒配制顯影液,將顯影液滴加至PVDF膜上,放至顯影儀中曝光拍照保存。使用Image J 軟件分析條帶灰度值,以β-actin為內參,TRIM28蛋白相對表達量以目的蛋白灰度值與內參蛋白灰度值的比值表示。實驗重復3次,取均值。

1.3.5 CCK-8實驗檢測MCF7細胞增殖能力

取轉染后的si-control組和si-TRIM28組MCF7細胞,按每孔3×103個細胞接種于96孔板中,每組設3個復孔,置于37 ℃、含體積分數5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 d。然后,每孔加入10 μL CCK-8溶液,并置于37 ℃、含體積分數5%CO2培養(yǎng)箱中孵育2 h,用酶標儀測定450 nm處的吸光度值。通過細胞存活率反映細胞的增殖能力,細胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100% (As為si-TRIM28組吸光度值,Ac為si-control組吸光度值,Ab為空白組吸光度值),細胞存活率越高表示細胞的增殖能力越強。

1.3.6 平板克隆形成實驗檢測MCF7細胞集落形成能力

取轉染后的si-control組和si-TRIM28組對數生長期MCF7細胞,胰蛋白酶消化,使用完全培養(yǎng)基重懸成細胞懸液,按每孔3×103個細胞接種于6孔板,置于37 ℃、含體積分數5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至出現肉眼可見的克隆形成時停止培養(yǎng)。使用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)洗滌1次,每孔加入40 g·L-1多聚甲醛固定15 min,PBS洗滌1次;每孔加入1 mL體積分數0.1%結晶紫染色 20 min,PBS清洗后晾干并拍照,觀察集落形成的數量。

1.3.7 基于美國癌癥腫瘤基因圖譜(The Cancer Genome Atlas,TCGA)數據庫分析乳腺癌組織中免疫浸潤細胞

從TCGA數據庫下載乳腺癌患者的mRNA轉錄組數據,數據均為原始Count數據,對所有的數據進行歸一化。通過CIBERSORT算法來計算所有樣本組織中22種腫瘤浸潤免疫細胞的差異。從CIBERSORT網站下載R腳本,使用R軟件對所有樣本的mRNA表達矩陣進行分析,基于P<0.05選擇具有顯著差異的腫瘤浸潤免疫細胞。

1.3.8 基于基因組富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)獲取TRIM28基因介導的免疫/癌癥相關信號通路

為了闡明TRIM28基因表達水平信號通路的顯著差異,使用GSEA軟件4.3.2中的c2.cp.kegg.v7.2.symbols.gmt作為對照基因組;以標準化富集得分>1、P<0.05和錯誤發(fā)現率(false discovery rate,FDR)<0.25定義為具有顯著差異的信號通路。

1.3.9 免疫調節(jié)因子的獲取及富集分析

在TISIDB數據庫中選擇“Gene Symbol”,使用“Immunomodulator”模塊獲取與TRIM28蛋白具有相關性的免疫調節(jié)因子。將上述獲得的免疫調節(jié)因子導入WebGestalt網站進行京都基因和基因組百科全書(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG) 信號通路富集分析。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 乳腺癌組織與癌旁組織中TRIM28蛋白表達水平比較

乳腺癌組織中TRIM28蛋白陽性染色定位于細胞質中,呈棕黃色細顆粒狀。TRIM28蛋白在癌旁組織中呈陰性或弱陽性表達,在乳腺癌組織中呈強陽性表達,結果見圖1。腫瘤組織和癌旁組織中TRIM28蛋白表達水平分別為75.91±54.99、50.96±41.71;腫瘤組織中TRIM28蛋白表達水平顯著高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計學意義(t=2.258,P=0.027)。

A:腫瘤組織;B:癌旁組織。圖1 乳腺癌組織和癌旁組織中TRIM28蛋白表達(免疫組織化學染色,×200)Fig.1 Expression of TRIM28 protein in breast cancer tissues and paracancerous tissues(immunohistochemical staining,×200)

2.2 2組MCF7細胞中TRIM28蛋白相對表達量比較

si-control組和si-TRIM28組MCF7細胞中TRIM28蛋白相對表達量分別為1 058 456.33±21 557.87、206 617.00±10 389.57;si-TRIM28組MCF7細胞中TRIM28蛋白相對表達量顯著低于si-control組,差異有統(tǒng)計學意義(t=61.654,P<0.05)。結果見圖2。

1:si-control組;2:si-TRIM28組。圖2 si-control組和si-TRIM28組MCF7細胞中TRIM28蛋白的表達Fig.2 Expression of TRIM28 protein in MCF7 cells in the si-control group and si-TRIM28 group

2.3 2組MCF7細胞增殖能力比較

培養(yǎng)第0天,2組MCF7細胞存活率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。培養(yǎng)第4天,si-TRIM28組MCF7細胞存活率顯著低于si-control組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結果見表1。

表1 si-control組和si-TRIM28組MCF7細胞增殖能力比較Tab.1 Comparison of MCF7 cell proliferation ability between the si-control group and si-TRIM28 group

2.4 2組MCF7細胞集落形成能力比較

si-control組和si-TRIM28組MCF7細胞克隆形成數分別為(338.0±9.2)、(236.3±12.2)個;si-TRIM28 組MCF7細胞克隆形成數量顯著少于si-control組,差異有統(tǒng)計學意義(t=11.528,P<0.05)。結果見圖3。

A:si-control組;B:si-TRIM28組。圖3 si-control組和si-TRIM28組MCF7細胞克隆形成Fig.3 Clone formation of MCF7 cells in the si-control group and si-TRIM28 group

2.5 乳腺癌組織中免疫細胞浸潤情況

基于TCGA分析乳腺癌組織中免疫浸潤細胞結果顯示,乳腺癌組織和癌旁組織樣本中巨噬細胞亞群(M0、M1和M2)、B細胞亞群(初始B細胞和記憶B細胞)、T細胞亞群(CD8 T細胞、靜息記憶CD4 T細胞、活化的記憶CD4 T細胞、濾泡輔助性T細胞和調節(jié)性T細胞)、活化的自然殺傷(natural killer,NK)細胞、單核細胞和嗜酸性粒細胞計數差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),表明免疫微環(huán)境密切參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程。結果見圖4。

A:熱圖。B:小提琴圖。Monocytes M0:單核細胞M0;B cells naive:幼稚B細胞;T cells CD8:CD8型T細胞;T cells follicular helper:濾泡輔助性T細胞;Macrophages M1:M1型巨噬細胞;Mast cells resting:靜息肥大細胞;Plasma cells:漿細胞;T cells regulatory (Tregs):調節(jié)性T細胞;Dendritic cells resting:靜息樹突狀細胞;T cells CD4 memory activated:活化的記憶CD4 T細胞;NK cells resting:靜息NK細胞;Neutrophils:中性粒細胞; B cells memory:記憶B細胞;T cells gamma delta:γδT細胞;T cells CD4 naive:CD4幼稚型T細胞;Eosinophils:嗜酸性粒細胞;NK cells activated: 活化的NK細胞;Mast cells activated:活化的肥大細胞;T cells CD4 memory resting:靜息的記憶CD4 T細胞;Macrophages M2:M2型巨噬細胞。圖4 TCGA-BRCA組織樣本中免疫細胞的差異Fig.4 Differences of immune cells in TCGA-BRCA tissue samples

2.6 乳腺癌組織中TRIM28蛋白表達水平與腫瘤浸潤免疫細胞的關系

乳腺癌組織中TRIM28蛋白表達水平與浸潤的單核細胞和調節(jié)性T細胞呈正相關(r=0.150、0.100,P<0.05),與活化的樹突狀細胞、活化的記憶CD4 T細胞、靜息的記憶CD4 T細胞、γδ T細胞呈負相關(r=-0.100、-0.160、-0.099、-0.190,P<0.05),結果見圖5。

A:TRIM28與調節(jié)性T細胞的相關性;B:TRIM28與單核細胞的相關性;C:TRIM28與活化的樹突狀細胞的相關性;D:TRIM28與活化的記憶CD4 T細胞的相關性;E:TRIM28與靜息記憶CD4 T細胞的相關性;F:TRIM28與γδT細胞的相關性。圖5 乳腺癌組織中TRIM28蛋白表達水平與浸潤免疫細胞的相關性Fig.5 Correlation between TRIM28 protein expression level and infiltrating immune cells in breast cancer tissues

2.7 TRIM28基因參與的免疫/癌癥相關信號通路

GSEA分析結果表明,TRIM28參與了多種免疫/癌癥相關的信號通路,包括癌癥通路、T細胞受體信號通路、Notch信號通路和Wnt信號通路;結果見圖6。

A:癌癥通路;B:T細胞受體信號通路;C:Notch信號通路;D:Wnt信號通路。圖6 TRIM28參與免疫/癌癥相關信號通路Fig.6 TRIM28 is involved in immune/cancer-related signaling pathways

2.8 TRIM28基因相關的免疫調節(jié)因子

從TISIDB數據庫中獲取了TRIM28相關的58個免疫調節(jié)因子,其中免疫刺激因子包括C10orf54、CD27、CD276、CD28、CD40、CD40LG、CD48、CD80、CD86、C-X-C基序趨化因子配體12(C-X-C motif chemokine ligand 12,CXCL12)、C-X-C基序趨化因子受體4(C-X-C motif chemokine receptor 4,CXCR4)、外核苷三磷酸二磷酸水解酶1(ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1,ENTPD1)、誘導性T細胞共刺激分子(inducible T cell costimulatory,ICOS)及其配體、白細胞介素2受體α(interleukin-2 receptor subunit alpha, IL2RA)、白細胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及其配體、殺傷細胞凝集素樣受體亞家族成員(killer cell lectin-like receptor subfamily member,KLRC1,KLRK1)、淋巴毒素α(lymphotoxin alpha,LTA)、組織相容性復合體I類相關基因B (MHC class I polypeptide-related sequence B, MICB)、胞外5′-核苷酸酶(ecto-5′-nucleotidase,NT5E)、脊髓灰質炎病毒受體(poliovirus receptor,PVR)、視黃酸早期轉錄1e (retinoic acid early transcript 1E,RAET1E)、跨膜蛋白173(transmembrane protein 173,TMEM173)、UL16 結合蛋白 1 (UL16 binding protein 1,ULBP1)、TNF受體超家族成員(TNF receptor superfamily member,TNFRSF)和TNF超家族成員 (TNF superfamily member,TNFSF);免疫抑制因子包括ADORA2A、BTLA、CD160、CD244、CD274、CD96、 集落刺激因子1受體(colony stimulating factor 1 receptor,CSF1R)、細胞毒性T淋巴細胞相關蛋白4(cytotoxic T-lymphocyte associated antigen 4,CTLA4)、甲型肝炎病毒細胞受體 2 (hepatitis A virus cellular receptor 2,HAVCR2)、人吲哚胺2,3-雙加氧酶1 (indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)、白細胞介素-10(interleukin-10,IL-10)及其受體,激酶插入域受體(kinase insert domain receptor,KDR)、淋巴細胞激活基因3(lymphocyte activation gene 3,LAG3)、細胞程序性死亡蛋白1配體2(programmed cell death protein 1 ligand 2,PDCD1LG2)、脊髓灰質炎病毒受體相關分子2(poliovirus receptor related protein 2,PVRL2)、轉化生長因子β受體 1(transforming growth factor beta receptor 1,TGFBR1)、T細胞免疫球蛋白和ITIM結構域蛋白(T cell immune receptor with immunoglobulin and ITIIM domain,TIGIT)、 C10orf54、含V-Set域T-細胞激活抑制因子1(V-set domain containing T-cell activation inhibitor 1,VTCN1)。對這58個免疫調節(jié)因子進行KEGG信號通路富集分析結果顯示,免疫調節(jié)因子CSF1R、CXCL12、CD27、CD40和CD40LG共同參與了T細胞受體信號通路、NK細胞介導的細胞毒性、NF-κB信號通路等信號通路,見圖7。

圖7 TRIM28相關免疫調節(jié)因子的KEGG通路富集分析Fig.7 KEGG enrichment analysis of TRIM28-related immunomodulatory factors

3 討論

迄今為止,許多研究表明,乳腺癌組織中TRIM28蛋白的表達顯著上調[12-13]。WEI等[12]研究發(fā)現,TRIM28蛋白在晚期乳腺癌組織中高度表達,并通過穩(wěn)定TWIST1來增強乳腺癌轉移,表明靶向TRIM28蛋白可能是乳腺癌治療的有效策略。除此之外,有研究報道,TRIM28蛋白的高表達還是乳腺癌患者預后不良的預測指標[13]。本研究結果顯示,腫瘤組織中TRIM28蛋白的表達顯著高于癌旁樣本,這與先前的研究結果一致[12-13]。此外,本研究使用siRNA敲低了MCF7乳腺癌細胞系中的TRIM28,結果發(fā)現,si-TRIM28組細胞中TRIM28蛋白相對表達量顯著低于si-control組;2組細胞培養(yǎng)第0天的存活率比較差異無統(tǒng)計學意義,si-TRIM28組細胞培養(yǎng)第4天的存活率顯著低于si-control組,si-TRIM28組MCF7細胞克隆形成數量顯著少于si-control組;提示,TRIM28能夠提高MCF7細胞的增殖和集落形成能力,從而促進乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。

乳腺癌的發(fā)生發(fā)展受到導管微環(huán)境中多種因素的影響,既包含了免疫細胞、脂肪細胞、成纖維細胞和一系列微生物,也包括可溶性生長因子、細胞因子、趨化因子、前列腺素等[14]。在這些因素中,免疫細胞所發(fā)揮的作用至關重要。從正常乳腺組織的免疫監(jiān)視,一直到原發(fā)性和轉移性乳腺癌,免疫細胞貫穿整個乳腺癌發(fā)生過程[15]。本研究通過對TCGA數據庫中乳腺癌組織樣本分析發(fā)現,乳腺癌組織與癌旁組織中巨噬細胞亞群、B細胞亞群、T細胞亞群、活化的NK細胞、單核細胞和嗜酸性粒細胞計數均有顯著差異。目前,免疫療法在乳腺癌的臨床治療中取得了巨大的突破,發(fā)現新的免疫治療靶標對乳腺癌的發(fā)生發(fā)展機制和防治具有重要意義[16]。為了明確TRIM28蛋白和乳腺癌中腫瘤浸潤免疫細胞之間的關系,本研究計算了TRIM28蛋白和免疫細胞之間的相關性,結果顯示,TRIM28蛋白與浸潤的單核細胞和調節(jié)性T細胞呈正相關,與活化的樹突狀細胞、活化的記憶CD4 T細胞、靜息的記憶CD4 T細胞和γδ T細胞呈負相關。CAR-T 細胞療法是一種由過繼性 T 細胞轉移開發(fā)的免疫療法[17-18],該治療方法也是近些年乳腺癌免疫治療的新方法[19]。本研究證實TRIM28蛋白與T細胞密切相關,這為后續(xù)進一步研究TRIM28蛋白是否成為CAR-T細胞治療的潛在靶點提供了依據。

此外,本研究結果顯示,TRIM28基因和相關的免疫調節(jié)因子參與了多種癌癥/免疫信號通路,如癌癥通路、T細胞受體信號通路、Notch信號通路、Wnt信號通路和NF-κB信號通路;對與TRIM28基因相關的58個免疫調節(jié)因子進行KEGG信號通路富集分析結果顯示,免疫調節(jié)因子CSF1R、CXCL12、CD27、CD40和CD40LG共同參與了T細胞受體信號通路、NK細胞介導的細胞毒性、NF-κB信號通路等信號通路。而Notch信號通路是一種進化保守的細胞間通訊機制,在許多細胞類型和不同的發(fā)育階段發(fā)揮作用[20]。在哺乳動物的發(fā)育過程中,Notch信號通路控制著器官發(fā)育的各個方面,還與細胞增殖和細胞死亡的調節(jié)有關[21-23]。Notch信號通路在乳腺癌中異常激活,主要通過如Notch1、2和3的PEST結構域激活性突變以及破壞NRR和異構化結構域的突變等誘導[22]。Notch還與其他的生長因子、促炎細胞因子、轉錄因子和促癌通路相互作用。Notch可以聯合缺氧誘導因子1-α和G 蛋白偶聯雌激素受體誘導癌細胞中的血管生成和上皮間充質轉化促進乳腺癌的發(fā)展[21]。更重要的是,Notch還與Wnt通路相互串擾以調控乳腺癌發(fā)生發(fā)展[24]。Wnt信號通路不僅僅局限于健康乳房和乳腺的發(fā)育和維持,而且還在乳腺癌發(fā)病機制中也起著同樣突出的作用[25]:一方面,激活的Wnt信號通路通過Notch依賴性機制觸發(fā)人乳腺上皮細胞的致癌轉化[26];另一方面,異常的Wnt/β-連環(huán)蛋白信號傳導也是乳腺癌的一個重要特征[24]。因此,NF-κB信號通路參與細胞因子的產生,調節(jié)癌癥和炎癥中的免疫反應。在乳腺癌基質中浸潤的白細胞通過NF-kB信號通路導致乳腺上皮細胞惡性腫瘤的增加[27]。因此,推測TRIM28基因通過以上信號通路交叉作用參與調節(jié)乳腺癌中的免疫微環(huán)境。

4 結論

TRIM28蛋白在乳腺癌中高度表達,敲低TRIM28基因可抑制乳腺癌細胞的增殖能力和集落形成能力;TRIM28蛋白與腫瘤浸潤免疫細胞密切相關,可能通過多種免疫/癌癥相關信號通路參與調節(jié)乳腺癌免疫微環(huán)境。因此,TRIM28蛋白與乳腺癌的腫瘤免疫微環(huán)境密切相關,這為臨床靶向免疫治療轉化提供了基礎。但是還需進一步的實驗驗證乳腺癌中TRIM28蛋白與免疫細胞之間的聯系和相關作用機制。