參麥顆粒中紅參摻偽研究*

雷 蓉，劉亞茹，2，王曉蕾，劉永利△

（1. 河北省藥品醫療器械檢驗研究院·河北省中藥質量評價與標準研究重點實驗室，河北 石家莊 050227；2. 河北醫科大學，河北 石家莊 050017）

參麥顆粒由紅參、南沙參、麥冬、黃精、山藥、枸杞子等中藥組方，具有養陰生津功效，主要用于治療面黃肌瘦、津少口渴、腰膝酸軟、食欲不振、頭暈眼花、心悸氣短、神經衰弱等癥［1］。方中紅參為五加科植物人參Panax ginsengC. A. Mey. 的栽培品經蒸制后的干燥根和根莖，具有大補元氣、復脈固脫、益氣攝血等功效。西洋參為五加科植物西洋參Panax quinquefoliumL. 的干燥根，具有補氣養陰、清熱生津等功效，原產于加拿大、美國等北美地區，現主要栽培于我國山東、東北等地［1-2］。人參、西洋參主要含皂苷類成分，但兩者所含皂苷種類與含量及比例有一定差異，特別是擬人參皂苷F11，其在西洋參中含量較高，而人參中基本不含，因此以其作為判斷非法添加的依據［3-9］。近年來，西洋參冒充人參或西洋參摻入人參進行含人參制劑投料生產屢有發生，而烏雞白鳳丸、消糜栓、人參養榮丸（大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸）中擬人參皂苷F11檢查項補充檢驗方法也相繼頒布，用于西洋參摻偽人參投料的監督檢驗?？紤]到紅參是由人參經蒸制所得，為進一步篩查紅參中是否也存在西洋參摻偽的投料情況，本研究中結合參麥顆粒中紅參用量少（僅0.2%）、輔料蔗糖用量大（占92%）、基質效應復雜的處方特點，建立了固相萃?。⊿PE）［10-19］-超高效液相色譜串聯質譜（UPLC - MS/MS）法檢查制劑中是否含有擬人參皂苷F11，為其中紅參的質量控制提供參考?，F報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AB SCIEX Triple Quad 6500+高效液相色譜- 質譜聯用儀（配置SCIEX OS 軟件、電噴霧離子源，美國AB SCIEX公司）；XPE26型電子天平、XS105DU型電子天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度分別為0.001 mg 和0.01 mg）；KQ - 500DE 型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Milli - Q 超純水制備系統（美國Millipore公司）。

1.2 試藥

參麥顆粒（廠家A，B，C，編號分別為S1-S28，S29-S51，S52- S85；為2022年國家藥品抽檢樣品）；擬人參皂苷F11對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110841 - 201406，含量測定用）；甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純，水為超純水。紅參、西洋參藥材均購自河北安國中藥材市場，經河北省醫療器械檢驗研究院段吉平主任藥師鑒定為正品。

2 方法與結果

2.1 試驗條件

色譜條件：色譜柱為Shimadzu Shim-pack GIST C18柱（100 mm×2.1 mm，2 μm）；流動相為乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～2 min 時20%A →50%A，2～4.5 min 時50%A →80%A）；流速為0.35 mL/ min；柱溫為40 ℃；進樣量為5 μL。

質譜條件：電噴霧離子源、負離子模式（ESI-），多反應監測（MRM）模式；電噴霧電壓5 500 V；離子源溫度500 ℃；氣簾氣（CUR）壓15.0 psi；碰撞氣（CAD）壓10.0 psi；霧化氣（氮氣）壓50.0 psi；輔助氣壓50.0 psi；射入電壓（EP）10 V；射出電壓（CXP）15 V。擬人參皂苷F11的母離子m/z799.6，子離子m/z653.7（定量離子），m/z491.6（定性離子），去簇電壓（V）-20 V，碰撞能量-50 V。

2.2 溶液制備

對照品溶液：取擬人參皂苷F11對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL 含擬人參皂苷F1110 ng 的溶液，即得。

供試品溶液：取樣品細粉約2.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入20 mL 水，密塞，超聲（功率700 W，頻率80 kHz）處理30 min，取出，冷卻至室溫，濾過，取續濾液10 mL，經C18固相萃取小柱（500 mg，容量為6 mL，預先用甲醇、水各6 mL 洗脫）層析，用水15 mL洗脫，放置5 min，繼續用甲醇15 mL 洗脫；收集洗脫液，置蒸發皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解，置5 mL容量瓶中，加甲醇稀釋并定容，經0.22 μm濾膜濾過，取續濾液，即得。

參比溶液、陰性對照品溶液和陽性對照品溶液：按參麥顆粒處方工藝及比例制得參比樣品，缺紅參的陰性樣品，以及將紅參換為西洋參的陽性樣品，按供試品溶液制備方法分別制備參比溶液、陰性對照品溶液和陽性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性考察：分別取2.2 項下對照品溶液、參比溶液、陰性對照品溶液、陽性對照品溶液各適量，按2.1項下試驗條件進樣測定，記錄圖譜。結果顯示，除陽性對照品溶液外，陰性對照品溶液和參比溶液均未檢出擬人參皂苷F11，說明參麥顆粒中其他藥味對測定無干擾，表明方法的專屬性良好。詳見圖1。

1. 擬人參皂苷F11A1 - D1.m / z 799.6 →653.7 A2 - D2.m / z 799.6 →491.6A1、A2. 對照品溶液 B1、B2. 陰性對照品溶液 C1，C2. 參比溶液 D1，D2. 陽性對照品溶液圖1 MRM圖1.Pseudoginsenoside F11A1 - D1.m / z 799.6 →653.7A2 - D2.m / z 799.6 →491.6A1，A2.Reference solution of pseudoginsenoside F11 B1，B2.Negative reference solution of Shenmai Granules C1，C2.Reference solution Negative reference solution of Shenmai Granules D1，D2.Positive reference solution of Shenmai GranulesFig.1 MRM diagrams

線性關系考察：取擬人參皂苷F11對照品適量，加甲醇制成質量濃度分別為344.0，103.2，51.60，25.80，9.030 ng/mL 系列對照品溶液，按2.1 項下試驗條件進樣測定，記錄離子強度，以待測成分質量濃度（X，ng/mL）為橫坐標、離子強度（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y1=916.18X1+6 193.91（r=0.999 2，n=5）。結果表明，擬人參皂苷F11質量濃度在9.030～344.0 ng/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

基質效應考察：取2.2 項下參比溶液（為基質），配制質量濃度為68.80 ng/mL 的對照品溶液，并取2.2項下對照品溶液，按2.1 項下試驗條件進樣測定，記錄峰面積。結果表明，以參比溶液為基質對照品溶液的峰面積（14 346.9 →3 090.4）較以甲醇為基質的峰面積（75 026.3 →12 035.1）明顯降低，基質效應明顯，故以參比溶液為基質制備系列對照品溶液（待測成分質量濃度分別為344.0，103.2，51.60，25.80，9.030 ng/mL），按2.1 項下試驗條件進樣測定，記錄離子強度，以待測成分質量濃度（X，ng/mL）為橫坐標、離子強度（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y2= 160.91X2+1 354.05（r=0.999 3，n=5）。結果表明，擬人參皂苷F11質量濃度在9.030～344.0 ng/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

檢測限和定量限考察：取“基質效應”項下以參比溶液為基質的對照品溶液適量，逐步稀釋，并按2.1 項下試驗條件進樣測定，對離子強度相對較低的定性離子對進行檢測，以信噪比（S/N）為3 和10 時待測成分質量濃度分別作為檢測限和定量限，結果分別為1.128 8 ng/mL和22.8 ng/mL。

精密度試驗：取2.2項下對照品溶液適量，按2.1項下試驗條件連續進樣測定6 次，記錄離子強度。結果擬人參皂苷F11峰面積的RSD為1.94%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液（編號S55）適量，分別于室溫下放置0，4，8，12，24 h時按2.1項下試驗條件進樣測定，記錄離子強度。結果擬人參皂苷F11峰面積的RSD為1.32%（n= 5），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內基本穩定。

重復性試驗：取同一樣品（編號S55）適量，按2.2項下方法平行制備6 份供試品溶液，按2.1 項下試驗條件進樣測定，記錄離子強度，帶入上述基質效應線性方程，計算含量。結果擬人參皂苷F11含量為312.05 ng/g，RSD為3.61%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取同一供試品溶液（編號S55）約1.0 g，共6 份，精密稱定，分別加入一定量的對照品溶液，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下試驗條件進樣測定，記錄離子強度，帶入上述基質效應線性方程計算加樣回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n=6）Tab.1 Results of the recovery test（n = 6）

2.4 樣品含量測定

取各批樣品適量，均平行3 份，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下試驗條件進樣測定，記錄離子強度，并計算樣品含量，結果見表2（其中，-為低于檢測限）。

表2 樣品含量測定結果（μg/g，n=3）Tab.2 Results of the content determination of pseudoginsenoside F11 in samples（μg / g，n = 3）

摻偽比例及轉移率考察：取已知含量的紅參、西洋參，按樣品處方工藝和比例分別制成5%西洋參陽性樣品、10%西洋參陽性樣品、西洋參陽性樣品各3 份，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下試驗條件進樣測定。結果各樣品中擬人參皂苷F11的轉移率分別為33.21%，33.70%，28.22%，平均轉移率為31.71%。

限度確定：結合摻偽比例及轉移率考察結果，且5%摻偽樣品溶液中擬人參皂苷F11的S/N=239，滿足定量限要求，以紅參中添加有5%以上的西洋參作為非法添加的判定依據，擬人參皂苷F11的質量濃度為10 ng/mL，折合參麥顆粒中的量為0.051 μg/g。故9 批樣品（S54，S55，S57，S60，S65，S67，S72，S80，S83）超出擬訂限度，檢出率為10.59%，均來自廠家C。

3 討論

3.1 供試品溶液制備方法考察

樣品處方中，紅參僅占0.2%，蔗糖占92%，且各成分含量較低，基質復雜，易造成色譜系統污染。SPE小柱目前常用于樣品前處理，是一項結合了選擇性保留、選擇性洗脫等過程的分離技術，可實現從復雜樣品中提取凈化或富集微量目標化合物，降低樣品基質干擾，提高檢測靈敏度的目的，且操作簡便、回收率和重復性好。預試驗中考察了C18柱、硅膠柱、C8柱、反相親水親脂平衡柱HLB、氨基SPE 小柱，結果顯示，C18柱固相萃取柱可有效除去處方中的蔗糖，且回收率最高，操作簡便，可有效減少有機試劑的使用和廢物產生，故選擇C18固相萃取柱用于供試品溶液提取。

3.2 試驗條件考察

預試驗中流動相考察了乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%甲酸水溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液，并進行梯度洗脫，分別監測m/z799.6 →653.6，491.6 和m/z845.5 →653.6，491.6 離子對，后者總體響應相對較低，而前者在4種體系中差異不大，但乙腈-水的流動相柱壓較低，配制簡單，故選擇乙腈- 水為流動相，選擇m/z799.6 →653.6，491.6為監測離子對。

3.3 擬人參皂苷F11 檢出判定原則

以擬人參皂苷F11的質量濃度10 ng/mL 為西洋參非法添加判定依據，即供試品溶液的提取離子流色譜中，同時出現與對照品溶液色譜相應的色譜峰，且供試品溶液色譜中m/z799.6 →653.6 的色譜峰面積值大于對照品溶液中相應的峰面積值，視為檢出。

3.4 結果分析

85批參麥顆粒中有9批樣品擬人參皂苷F11含量超出擬訂限度，摻偽比例在5.41%～7.23%，推斷投料用紅參可能存在西洋參摻偽現象，須引起企業重視。在市場上收集紅參藥材時發現一些不法商販將采收加工中產生的“下腳料”、個小的西洋參摻入人參藥材或飲片中加工成“紅參”，不易區分，借此提高利潤。部分企業貪圖便宜，選用價格較低的摻雜部分偽品的紅參。故企業需提高藥材鑒定人員的技術水平，從源頭上控制飲片質量。

3.5 方法評價

本研究中建立了UPLC-MS/MS 法對參麥顆粒中紅參中擬人參皂苷F11的檢查方法，前處理中采用的SPE 技術能有效從復雜基質樣品中富集、凈化特征成分，提高檢測靈敏度、節省溶劑。該方法專屬性強、準確度高、簡單快速，可對制劑的質量控制和監督提供有力的技術支持。