巨細胞病毒、EB病毒感染與兒童SLE疾病活動度的關(guān)系

曹佳璐，張德，李娜，荊會娟

1 聊城市第二人民醫(yī)院檢驗科，山東聊城 252600；2 聊城市第二人民醫(yī)院小兒內(nèi)科

兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種可累及多臟器、多系統(tǒng)的自身免疫性疾病，其發(fā)病機制非常復(fù)雜，與遺傳因素、環(huán)境因素以及感染因素等密切相關(guān)［1］。巨細胞病毒（CMV）和EB 病毒（EBV）是兩種常見的皰疹病毒科病毒。近年研究發(fā)現(xiàn)，CMV、EBV感染與自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展有著密切聯(lián)系［2］。CMV、EBV均可激活機體內(nèi)T淋巴細胞和B淋巴細胞，引起免疫炎癥反應(yīng)并產(chǎn)生一系列炎癥因子和自身抗體，還能引起機體免疫耐受異常，進而促進自身免疫炎癥反應(yīng)發(fā)生。因此，CMV、EBV 感染可能在SLE 的病理生理過程中起著重要作用［3］。有研究發(fā)現(xiàn)，SLE 患者CMV、EBV 感染率顯著增加，CMV、EBV 感染后可引起機體外周血CD8+細胞比例增加、CD4+與CD8+比值倒置，從而促進SLE 的發(fā)生、發(fā)展［4］。但目前CMV、EBV 感染與兒童SLE 疾病活動度的關(guān)系鮮有報道。鑒于此，本研究探討了CMV、EBV 感染與兒童SLE 疾病活動度的關(guān)系。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2021 年1 月—2023 年1 月聊城市第二人民醫(yī)院小兒內(nèi)科收治的SLE 患兒98 例（觀察組）。兒童SLE 診斷依據(jù)《中國兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷與治療指南》［5］。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合SLE 診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡＜14 歲；③認知功能正常，治療依從性好；④臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他嚴重結(jié)締組織疾病者；②合并重要臟器嚴重功能不全者；③合并嚴重血液系統(tǒng)疾病者；④合并惡性腫瘤者；⑤合并先天性疾病者；⑥合并結(jié)核病者。其中，男48 例、女50 例，年齡3～10（6.69 ±1.33）歲；初發(fā)且入院前未接受任何治療43 例，已使用激素或免疫抑制劑正規(guī)療程治療至少1 年且病情穩(wěn)定55 例。同期另選在聊城市第二人民醫(yī)院門診體檢健康的兒童100 例（對照組），男53 例、女47 例，年齡4～10（7.03 ± 1.45）歲。兩組性別、年齡具有可比性。本研究經(jīng)聊城市第二人民醫(yī)院倫理委員會審核通過（批件編號：2023-03-012），所有患兒監(jiān)護人對本研究知情并簽署書面知情同意書。

1.2 實驗室檢查 觀察組入院次日，對照組體檢當(dāng)日，采集清晨空腹外周靜脈血10 mL，1 000 × g 離心10 min，留取上層血清，-80 ℃保存。采用ELISA 法檢測CMV-IgM、抗核小體抗體（ANuA）、抗雙鏈DNA（ds-DNA）抗體、抗β2糖蛋白1（β2-GP1）抗體，采用直接法行Coombs實驗，采用魏氏法檢測紅細胞沉降率（ESR），采用速率散射比濁法檢測補體C3，采用CytoFLEX S流式細胞儀檢測CD23，采用實時熒光定量PCR儀檢測EBV DNA。

1.3 SLE 疾病活動度評價 SLE 患兒入院次日評估SLE疾病活動指數(shù)（SLEDAI）。SLEDAI 0～4分表示基本無活動，5～9 分表示輕度活動，10～14 分表示中度活動，≥15分表示重度活動［6］。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS23.0 統(tǒng)計軟件。符合正態(tài)分布的計量資料以xˉ ±s表示，結(jié)果比較采用獨立樣本t檢驗。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。相關(guān)性分析采用Spearman 或Pearson 相關(guān)分析法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組CMV-IgM、EBV DNA陽性率比較 觀察組與對照組CMV-IgM 陽性率分別為27.55%（27/98）、4.00%（4/100），EBV DNA 陽性率分別為26.53%（26/98）、11.00%（11/100）。觀察組CMV-IgM、EBV DNA 陽性率均高于對照組（χ2分別為20.789、7.857，P均＜0.05）。

2.2 SLE患兒初發(fā)者與穩(wěn)定者CMV-IgM、EBV DNA陽性率比較 SLE患兒初發(fā)者與穩(wěn)定者CMV-IgM陽性率分別為13.95%（6/43）、38.18%（21/55），EBV DNA 陽性率分別為44.19%（19/43）、87.27%（48/55）。SLE 患兒初發(fā)者CMV-IgM 陽性率低于其穩(wěn)定者（χ2=7.097，P＜0.05），EBV DNA 陽性率高于其穩(wěn)定者（χ2=12.253，P＜0.05）。

2.3 SLE 患兒CMV-IgM 陽性者與陰性者疾病活動相關(guān)指標(biāo)比較 見表1、2。

表1 SLE患兒CMV-IgM陽性者與陰性者ESR、補體C3、SLEDAI比較（± s）

表1 SLE患兒CMV-IgM陽性者與陰性者ESR、補體C3、SLEDAI比較（± s）

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表2 SLE患兒CMV-IgM陽性者與陰性者ANuA、抗ds-DNA抗體、抗β2-GP1抗體及Coombs實驗和CD23陽性率比較［例（%）］

2.4 SLE 患兒EBV DNA 陽性者與陰性者疾病活動相關(guān)指標(biāo)比較 見表3、4。

表3 SLE患兒EBV DNA陽性者與陰性者ESR、補體C3、SLEDAI比較（xˉ ± s）

表4 SLE患兒EBV DNA陽性者與陰性者ANuA、抗ds-DNA抗體、抗β2-GP1抗體及CD23陽性比較［例（%）］

2.5 SLE 患兒CMV-IgM、EBV DNA 陽性與疾病活動相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系 SLE 患兒CMV-IgM 陽性與ESR、SLEDAI以及ANuA、抗ds-DNA 抗體、抗β2-GP1抗體、CD23 陽性均呈正相關(guān)關(guān)系（r分別為0.601、0.524、0.519、0.554、0.618、0.573，P均＜0.05），與補體C3 呈負相關(guān)關(guān)系（r=-0.533，P＜0.05）；SLE 患兒EBV DNA 陽性與ESR、SLEDAI 以及ANuA、抗ds-DNA 抗體、抗β2-GP1 抗體、CD23 陽性均呈正相關(guān)關(guān)系（r分別為0.526、0.612、0.591、0.538、0.464、0.587，P均＜0.05），與補體C3 呈負相關(guān)關(guān)系（r=-0.479，P＜0.05）。

3 討論

SLE 是一種常見的自身免疫性疾病，約20%在兒童期發(fā)病，典型癥狀包括對稱性頰部蝶形紅斑及不同程度關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、發(fā)熱等［7］。兒童SLE 機體存在嚴重的免疫功能紊亂，以淋巴細胞異常凋亡、B淋巴細胞功能亢進、T淋巴細胞功能失調(diào)以及多種自身抗體異常表達為主要特征［8］。SLE 的發(fā)病機制非常復(fù)雜，與遺傳因素、環(huán)境因素以及感染因素等密切相關(guān)［1］。普遍認為，SLE 的發(fā)生與多種病原體感染密切相關(guān)，如CMV、EBV、皰疹病毒等。有研究報道，CMV、EBV 感染可能通過調(diào)控細胞免疫、影響細胞因子分泌等途徑參與SLE 的發(fā)生和發(fā)展［9］。但現(xiàn)階段兒童SLE 的發(fā)生與CMV、EBV 感染的關(guān)系尚不完全清楚，仍需進一步探索。

CMV 是一種雙鏈DNA 病毒，屬于皰疹病毒科。CMV 能夠攻擊多種靶細胞，如上皮細胞、神經(jīng)細胞、內(nèi)皮細胞等［10］。近年研究發(fā)現(xiàn)，CMV 感染可引起機體外周血CD8+細胞比例增加、CD4+與CD8+比值倒置，從而在SLE 的病理生理過程中發(fā)揮重要作用［3-4］。但目前CMV 感染與兒童SLE 疾病活動度的關(guān)系鮮有報道。本研究結(jié)果顯示，觀察組CMV-IgM陽性率顯著高于對照組，說明在兒童SLE 中CMV 感染率較高，并且SLE 患兒初發(fā)者CMV-IgM 陽性率低于其穩(wěn)定者，這可能與初發(fā)SLE 患兒體內(nèi)免疫系統(tǒng)尚未完全激活，病原體可能處于活動感染期有關(guān)。究其原因，SLE 的發(fā)生、發(fā)展與淋巴細胞異常凋亡及其亞群失調(diào)有關(guān)，而CMV 感染亦可引起機體類似的免疫學(xué)改變。因此，CMV 感染可能與SLE 的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。李詠等［11］研究發(fā)現(xiàn)，SLE 患兒新發(fā)者CMV感染率顯著高于其穩(wěn)定者。但也有研究認為，SLE與CMV感染并無直接關(guān)系［12］。目前，SLE患兒易感染CMV還是CMV感染可促進SLE病情進展尚無定論。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，SLE 患兒CMV-IgM 陽性者ESR、SLEDAI 及ANuA、抗ds-DNA 抗體、抗β2-GP1抗體、Coombs 實驗陽性率均顯著高于其陰性者，而補體C3 顯著低于其陰性者。進一步研究發(fā)現(xiàn)，SLE患兒CMV-IgM 陽性與ESR、SLEDAI 及ANuA、抗ds-DNA抗體、抗β2-GP1抗體、CD23陽性均呈正相關(guān)關(guān)系，與補體C3 呈負相關(guān)關(guān)系。結(jié)果提示，CMV 感染可能與兒童SLE 疾病活動度有關(guān)。SLE 患兒初發(fā)者CMV-IgM 陽性率低于其穩(wěn)定者，這可能與初發(fā)SLE 患兒體內(nèi)免疫系統(tǒng)尚未被完全激活，免疫球蛋白介導(dǎo)的抗體反應(yīng)低下有關(guān)；也可能與穩(wěn)定期SLE患兒長期使用免疫抑制劑或激素類藥物，白細胞和免疫球蛋白下降，導(dǎo)致機體免疫功能低下有關(guān)。SLE 患兒感染CMV 后，不僅可通過激活單核-巨噬細胞引起炎癥反應(yīng)，還可通過抗體依賴細胞介導(dǎo)的細胞毒作用使自然殺傷細胞數(shù)量減少而降低其免疫防御功能，進而加速SLE 病情進展。此外，CMV 感染還能啟動患兒體內(nèi)NF-κB 信號通路、抗體依賴細胞介導(dǎo)的細胞毒作用等靶細胞凋亡程序，使眾多細胞內(nèi)成分暴露，產(chǎn)生各種抗體，從而損害免疫系統(tǒng)功能，加速SLE的發(fā)生、發(fā)展［13］。

EBV 是一種雙鏈線性DNA 病毒，亦屬于皰疹病毒科。EBV 感染在兒童期極為常見，表現(xiàn)為活動性感染和潛伏性感染兩種狀態(tài)［14］。近年研究發(fā)現(xiàn)，EBV 感染可引起機體外周血CD8+細胞比例增加、CD4+與CD8+比值倒置，從而在SLE 的病理生理過程中發(fā)揮重要作用［3-4］。但目前EBV 感染與兒童SLE疾病活動度的關(guān)系鮮有報道。本研究結(jié)果顯示，觀察組EBV DNA 陽性率顯著高于對照組，說明在兒童SLE 中EBV 感染率較高；SLE 患兒初發(fā)者EBV DNA陽性率高于其穩(wěn)定者，說明SLE 患兒體內(nèi)存在EBV活動性感染，可能是由于SLE 患兒體內(nèi)處于潛伏性感染的EBV 被激活有關(guān)，再者初發(fā)SLE 患兒體內(nèi)免疫系統(tǒng)尚未被完全激活，免疫球蛋白介導(dǎo)的抗體反應(yīng)低下，亦可導(dǎo)致EBV 活動明顯。EBV 感染極易引起淋巴瘤和傳染性單核細胞增多癥，還可導(dǎo)致過敏反應(yīng)和自身免疫性疾病發(fā)生［15］。有研究報道，SLE患者血清EBV 抗體滴度顯著升高［16］，表明SLE 患者EBV 活動性感染明顯。本研究結(jié)果顯示，SLE 患兒EBV DNA 陽性者ESR、SLEDAI 及ANuA、抗ds-DNA抗體、抗β2-GP1 抗體、CD23 陽性率均高于其陰性者，而補體C3 低于其陰性者；進一步研究發(fā)現(xiàn)，SLE患兒EBV DNA 陽性與ESR、SLEDAI 以及ANuA、抗ds-DNA抗體、抗β2-GP1抗體、CD23陽性均呈正相關(guān)關(guān)系，與補體C3 均呈負相關(guān)關(guān)系。結(jié)果提示，EBV感染可能與兒童SLE 疾病活動度有關(guān)。SLE 患兒EBV 感染后可通過多種途徑活化體內(nèi)B 淋巴細胞，導(dǎo)致機體免疫功能紊亂，細胞異常凋亡、細胞內(nèi)成分暴露，進而產(chǎn)生大量自身抗體，加重SLE 病情。此外，由于EBV 可在SLE 患兒體內(nèi)處于潛伏感染狀態(tài)，機體體液免疫雖可防止外源性病原微生物入侵，但無法清除體內(nèi)處于潛伏感染狀態(tài)的EBV。因此，SLE 患兒發(fā)病后機體免疫系統(tǒng)遭到破壞，進而感染EBV，加重SLE病情，從而形成惡性循環(huán)。

綜上所述，CMV、EBV感染與兒童SLE疾病活動度密切相關(guān)，在臨床工作中應(yīng)積極監(jiān)測病毒感染并制定相應(yīng)的抗病毒治療措施，從而更好地控制SLE病情。