電感耦合等離子體質譜法同時測定腎寧散膠囊中硼、鎂、錳、鉀的含量*

韓吳琦,霍 蓓,李趙平 ,趙玉泉,吳穎楠,宮彥民

(1.開封市食品藥品檢驗所, 河南 開封 475000; 2.河南省食品與鹽業檢驗技術研究院,河南 鄭州 450003; 3.開封大宋制藥有限公司,河南 開封 475000)

腎寧散膠囊為開封大宋制藥有限公司獨家生產藥品,1985年獲得發明專利,目前已被列入河南省尉氏縣非物質文化遺產保護目錄。腎寧散膠囊由西瓜翠衣、紫皮大蒜等藥物組成,具有消炎、利尿、消除浮腫及尿蛋白的功效,用于治療急慢性腎盂腎炎、腎小球腎炎。服用時用白茅根50 g煎水400 mL早(空腹)、晚沖服,每次12～20粒;小兒酌減或遵醫囑[1]。其處方構成簡單,制法獨特,歷史悠久,作用明確,療效顯著,但執行標準仍為《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第六冊(一九九二年)WS3-B-1151-92,標準中只針對藥品的處方、制法、性狀、pH值、干燥失重、砷鹽、熾灼殘渣等進行了規定,未對確保藥品療效的成分、含量等進行規定。現有相關文獻大部分為腎寧散膠囊的臨床療效、治療方法的報道[2-5],僅一篇是關于腎寧散膠囊單一微量元素鋅的含量測定研究[6],未見其多元素同時測定分析的研究。為進一步控制腎寧散膠囊產品質量,本研究對采用電感耦合等離子體質譜法同時測定腎寧散膠囊中硼(B)、鎂(Mg)、錳(Mn)、鉀(K)4種元素的含量進行了初步研究,并建立了含量測定方法。該方法操作簡便,重復性好,精密度高,可有效控制腎寧散膠囊的質量,為該藥品質量標準研究提供思路。

1 藥品、試劑與儀器

腎寧散膠囊,開封大宋制藥有限公司產品,0.5 g/粒,批號20210601、20210616、20210614、20160823、20160824、20160825、20160826、20160827、20160828。 B、Mg、Mn、K元素標準溶液(質量分數1 000 mg/L)和 鋰、鈧(質量分數1 000 mg/L)內標溶液,由國家有色金屬及材料研究中心提供;過氧化氫,優級純,500 mL/瓶,天津市科密歐化學試劑有限公司產品,批號20220515;硝酸,優級純,2.5 L/瓶,上海安譜實驗科技股份有限公司供應,批號22381200;水為超純水。7900型電感耦合等離子體質譜儀,美國安捷倫科技有限公司產品;CEM Mars 6型微波消解儀,美國培安科技公司產品;BHW-09C型趕酸器,上海博通化學科技有限公司產品;UPR-Ⅱ-10T超純水制備系統,西安優普儀器設備有限公司產品;CP225D型分析天平,德國賽多利斯集團產品。所有使用玻璃器皿均采用體積分數300 mL/L硝酸浸泡24 h,然后用超純水清洗3遍,晾干。

2 方法與結果

2.1 儀器工作條件

射頻功率1 550 W,霧化室溫度2 ℃。元素分析模式:碰撞反應池;碰撞氣體為氦氣,流量4.3 mL/min;等離子體氣體流速15.0 L/min;輔助氣體流速1.0 L/min;掃描方式是跳峰;測量模式是動能甄別;掃描次數20次;重復次數3次;樣品提升速度0.3 r/s。

2.2 標準曲線溶液的制備

精密量取硼、鎂、錳、鉀單元素標準溶液(1 000 mg/L)各0.1 mL,置100 mL量瓶中,用20 mL/L 硝酸溶液分別定容至刻度,得1 mg/L的中間單標溶液。分別取B、Mg、Mn、K中間單標溶液,用體積分數20 mL/L硝酸配制成B、Mn 2、5、10、20、50 μg/L,Mg、K 5、10、20、50、100 μg/L 的系列混合標準溶液;再分別取含鋰Li(7)、鈧Sc(45)元素的內標溶液儲備液(1 000 mg/L)配制成100 μg/L 的混合內標溶液,在線加入。

2.3 供試品溶液的制備

取腎寧散膠囊20粒,混勻,每份樣品精密稱取0.10 g,置于微波消解罐中,加2 mL過氧化氫和8 mL硝酸,放置過夜,預消解(100 ℃,1 h)后于微波消解儀中消解,消解程序見表1。消解完成后,將其置于趕酸器上140 ℃趕酸3 h(黃煙消失),冷卻至室溫后轉移至50 mL量瓶中,用20 mL/L 硝酸清洗3次消解罐,轉移至容量瓶中并定容至刻度,即得供試品溶液。同時做試劑空白試驗。測試時根據線性范圍具體稀釋。每個樣品平行2份,計算測定結果的平均值和標準偏差。

表1 微波消解儀的消解程序

2.4 方法學考察

2.4.1 標準系列的線性方程、相關系數及檢測限

將系列標準溶液與內標液同時進樣,儀器自動計算線性關系及相關系數,所測4種混合元素的線性關系良好,相關系數(r)均≥0.99,檢測限為0.017 4 ～2.8610 μg/L 。見表2。

表2 方法的線性方程、線性范圍及檢測限

2.4.2 精密度與重復性試驗

取50 μg/L混合標準溶液,按2.3項下方法重復測定6次。結果:B、Mg、Mn、K的相對標準偏差(relative standard deviation,RSD)依次為2.55%、2.52%、3.05%、1.22%。取同一批號樣品,按2.3項下方法制備待測樣品,平行消解6份樣品,進行測定。結果:6份樣品中B、Mg、Mn、K的RSD依次為3.20%、2.63%、2.94%、1.05%。結果表明,方法精密度良好。

2.4.3 加樣回收率試驗

按照2.3項下條件制備樣品,精密稱取9份,每份0.10 g;分別置微波消解管中,每3份為一組;分別加入3個不同質量分數的混合標準溶液,按照2.3項下微波消解程序制備供試品溶液;趕酸后用20 mL/L硝酸定容至50 mL量瓶中,制得高、中、低3個質量分數供試品溶液(由于每種元素添加量不同,具體數據見表3)各3份;測定,計算回收率。結果:加樣回收率87.27 %～98.22 %。見表3。

表3 加標回收率實驗結果 n=3

2.4.4 樣品測定結果

取腎寧散膠囊9批次樣品,按照2.3項下方法制備溶液,按2.1項下條件測定,計算4種元素的含量。結果見表4。結果表明,不同批次腎寧散膠囊中元素B、Mg、Mn和K含量差異較小,B、Mg、Mn和K可以作為其質量控制的指標。

表4 樣品中4種元素的測定結果 μg·g-1,n=2

3 討 論

微波消解法是利用微波輻射對樣品進行消解,使樣品中的物質解離成分子或離子的方法,具有速度快、自動化高[7]等優點,可有效提高元素檢測結果的準確性和精密度,是一種很好的元素測定前處理方法。電感耦合等離子體質譜法可以同時檢測多種元素,將分析速度快、準確度和靈敏度高、干擾較少等優勢結合,在微量元素成分分析方面起著重要的作用[8-9]。

本實驗采用微波消解法進行樣品前處理。在消解過程中,當稱樣量為常規量0.3 g時,直接預消解會發生消解液溢出的現象,但僅減少稱樣量還有消解液外溢的可能,加消解液靜置過夜后再進行預消解則解決了消解液外溢現象。消解液容易外溢說明腎寧散膠囊中除了活性炭外有可能存在其他物質。在實驗中,在常規的消解溫度和時間下消解效果并不理想,存在大量未消解物質;適當提高消解溫度、延長消解時間后仍有微量沉淀物;最后將消解后的待測樣品液過濾,對澄清的待測液進行測定,通過加標回收驗證微量沉淀物不影響測定結果。

從實驗過程可以看出,腎寧散膠囊樣品較難消解,減少消解樣品量、延長消解時間、提高消解溫度可達到一個較好的消解效果。在優化微波消解后,獲得的待測溶液采用電感耦合等離子體質譜法進行分析。電感耦合等離子體質譜儀是高精密儀器,所使用的試劑必須純度高,測定基質復雜的樣品時一定要先用濾膜過濾再進行測定,以免污染儀器;在測定樣品時,需要將儀器進行調諧,使其處于最優測定條件。每次測定樣品之前都需進行標準曲線的測定,因為儀器調諧后狀態并不完全一致,標準曲線不具有重復使用性。另外,在測定樣品時還要根據樣品基質情況判斷是否需要加內標溶液或是否延長沖洗時間[10-11]等。

本研究建立的腎寧散膠囊中B、Mg、Mn、K元素含量測定方法,為探究該藥質量控制方法的研究提供了借鑒作用。雖然目前還無法確定這4種微量元素含量與臨床療效之間的關系,但該法對腎寧散膠囊質量標準的建立提供了借鑒,為該藥品標準的提升打下了理論的基礎。