頂空氣相色譜法測定中藥液袋中11種溶劑殘留量

楊慶芳

[安陽市市場監(jiān)管審評中心(安陽市藥物警戒中心),河南 安陽 455000]

中藥液袋屬于藥品包裝材料,藥品包裝材料與藥品質(zhì)量相關(guān),關(guān)乎用藥安全。許多中藥液袋在印刷、復合、涂布等生產(chǎn)過程中因涉及有機溶劑而致溶劑殘留偏高,許多溶劑會遷移至藥品中而影響用藥安全[1-3]。丙酮[4]、甲醇[5-6]、甲苯[7]、苯[8]、乙酸乙酯、乙酸丁酯、異丙醇[9]、乙苯等試劑對皮膚、呼吸道、眼結(jié)膜等有一定的刺激作用,輕度表現(xiàn)為頭痛、頭暈、惡心,重者可致不同程度的意識障礙,甚至可致臟器損害和致癌。目前國內(nèi)很少有人關(guān)注中藥液袋中殘留溶劑問題,為了更好地控制中藥液袋的質(zhì)量,參考相關(guān)方法[10-12],本實驗采用頂空氣相色譜法測定中藥液袋中11種溶劑(丙酮、乙酸乙酯、甲醇、異丙醇、苯、甲苯、乙酸丁酯、乙苯、對二甲苯、間二甲苯、鄰二甲苯)的殘留量,對中藥液袋的質(zhì)量研究提供參考依據(jù)。

1 樣品、試劑與儀器

實驗用中藥液袋生產(chǎn)廠家和批號見表1。丙酮、乙酸乙酯、甲醇、異丙醇、苯、甲苯、乙酸丁酯、乙苯、對二甲苯、間二甲苯、鄰二甲苯,均為色譜純,天津市科密歐化學試劑有限公司產(chǎn)品;正己烷,分析純,天津市科密歐化學試劑有限公司產(chǎn)品;Aliglent 7890B氣相色譜儀、7697A頂空進樣器、氫火焰離子化檢測器,均為安捷倫科技有限公司產(chǎn)品;XS205DU型電子天平,瑞士梅特勒-托利多有限公司產(chǎn)品。

表1 實驗樣品來源信息

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

HP-INNOWAX毛細管柱(60 m×0.32 mm,0.50 μm),進樣口溫度 200 ℃,分流比10∶1;檢測器溫度220 ℃。程序升溫模式:初始溫度 50 ℃,保持 2 min;以 2 ℃/min升至 80 ℃,保持 10 min;以 10 ℃/min 升至 170 ℃,保持 15 min。以氮氣為載氣,流速 1.0 mL/min。頂空加熱箱溫度105 ℃,定量環(huán)/閥溫度115 ℃,傳輸線溫度 125 ℃,樣品平衡時間 60 min。

2.2 混合對照品溶液的配制

分別精密稱取 0.25 g 丙酮、乙酸乙酯、甲醇、異丙醇、苯、甲苯、乙酸丁酯、乙苯、對二甲苯、間二甲苯、鄰二甲苯,置于25 mL容量瓶中,加正己烷稀釋至刻度,搖勻,作為對照儲備液(10 g/L)。分別精密量取上述對照儲備液適量,加正己烷稀釋,搖勻,作為系列混合對照品溶液。

2.3 供試品的配制

取樣品適量,裁取內(nèi)表面積100 cm2,將其迅速裁成1 cm × 3 cm大小,置20 mL頂空瓶中,加入2粒玻璃珠后,壓蓋,密封,作為供試品。

2.4 方法學驗證

2.4.1 專屬性試驗

取2.2項下混合對照品溶液1 mL,在2.1項下色譜條件進行測定,得到丙酮、乙酸乙酯、甲醇等11種溶劑的色譜圖。見圖1。

1.丙酮;2.乙酸乙酯;3.甲醇;4.異丙醇;5.苯;6.甲苯;7.乙酸丁酯;8.乙苯;9.對二甲苯;10.間二甲苯;11.鄰二甲苯

2.4.2 檢測限

取2.2項下混合對照品溶液,用正己烷逐步稀釋,按2.1項下色譜條件進行測定,記錄11種殘留溶劑的信噪比,以信噪比為3∶1時的進樣濃度作為檢測限,各溶劑的檢測限濃度見表2。

表2 11種溶劑的檢測限實驗結(jié)果

2.4.3 定量限

取2.2項下混合對照品溶液,用正己烷逐步稀釋,按2.1項下色譜條件進行測定,記錄11種殘留溶劑的信噪比,以信噪比為10∶1時的進樣濃度作為定量限,各溶劑的定量限濃度見表3。

表3 11種溶劑的定量限實驗結(jié)果

2.4.4 線性試驗

分別取11種溶劑系列對照品溶液,按2.1項下色譜條件進行測定,以溶劑的峰面積為X軸,濃度為Y軸,建立線性回歸方程。各溶劑線性試驗結(jié)果見表4。

表4 11種溶劑線性方程與線性范圍

2.4.5 精密度試驗

取質(zhì)量分數(shù)0.1g/L的混合對照品溶液1mL,按2.1項下色譜條件進行測定,重復進樣6次,計算相對標準偏差。結(jié)果見表5。

表5 精密度試驗結(jié)果 n=6

2.4.6 穩(wěn)定性試驗

取質(zhì)量分數(shù)0.1g/L的混合對照品溶液1mL,分別在0、3、6、9、12、20、24h時取樣,按2.1項下色譜條件進行測定,記錄色譜峰面積,計算日內(nèi)相對標準偏差。結(jié)果見表6。結(jié)果顯示,溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

表6 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.4.7 回收率試驗

取樣品適量,裁取內(nèi)表面積100cm2,將其迅速裁成1cm× 3cm大小,置20mL頂空瓶中,加入兩粒玻璃珠后,分別加入低、中、高3種質(zhì)量分數(shù)(加入量見表7)的11種溶劑混合對照品溶液,壓蓋,密封。配制回收率測試溶液,每個質(zhì)量分數(shù)平行制備3份。按2.1項下色譜條件進行測定,計算回收率。結(jié)果見表7。

表7 回收率測定結(jié)果 n=9

2.5 樣品測定結(jié)果

不同材質(zhì)、不同廠家的中藥液袋均檢出殘留溶劑,檢出率100%。其中檢出2種殘留溶劑的樣品3批,檢出3種者2批,檢出4種者2批,檢出5種者1批。甲醇的檢出率最高,8批均檢出甲醇,檢出率100%;其次是丙酮和乙酸乙酯的檢出率,檢出率為62.50%。結(jié)果見表8。

表8 每100 cm2樣品中11種成分的含量 μg

3 討 論

3.1 程序升溫的溫度和速率的選擇

程序升溫的選擇主要是由混合物質(zhì)的組成及其物理性質(zhì)所決定的,溫度和升溫速率直接影響溶劑的分離效能、保留時間、分離度。本實驗分別測定初始溫度(40、50 、60 、70 ℃)和升溫速率(2、4、6、8、10mL/min)對11種溶劑分離效果的影響,兼顧保留時間、分離度、對稱因子等因素,最終選擇2.1項下參數(shù)。在此條件下,11種溶劑均可得到良好的分離,能滿足定量分析的要求。

3.2 平衡溫度和平衡時間的選擇

本實驗分別以11種溶劑回收的含量為指標,先固定平衡時間20min,在平衡溫度50、70、90、100、105、110 ℃下進行實驗來選擇最佳溫度,結(jié)果顯示,平衡溫度105 ℃時11種溶劑回收的含量最高且基本趨于穩(wěn)定。再固定平衡溫度105 ℃,在平衡時間20、30、40、50、60、70min下進行實驗來選擇最佳平衡時間,結(jié)果顯示,平衡時間60min時,11種溶劑峰面積達到最大并基本趨于穩(wěn)定。因此選擇105 ℃、60min分別為最佳平衡溫度和時間。

目前對中藥液袋的檢測主要集中在藥用瓶墊、藥用鋁箔、藥用復合硬片等方面。本實驗所建立中藥液袋中11種溶劑殘留量的頂空氣相色譜檢測方法,11種溶劑在一定濃度范圍內(nèi)呈線性,回收率、精密度和重復性等均達到了要求。該方法簡單、靈敏,可滿足中藥液袋中多種溶劑殘留量的定性、定量測定要求。本研究為完善中藥液袋的質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)。