復方狗骨膠顆粒制備工藝研究 *

邱 田 王 芳 裴明莉 生家耀 張 燕

（1.滕州市中醫醫院骨傷科，山東 棗莊 277599；2.滕州市中醫醫院中藥房，山東 棗莊 277599）

狗骨為近代中藥虎骨的替代品［1］，藥用記載首見于《名醫別錄》［2］之“狗骨灰，主下痢、生肌、敷馬瘡”。狗骨早期多以燒灰入藥，外用治療內外婦兒等疾患；自宋代開始用于治療筋骨傷折疼痛，配制八骨散方、虎骨膏方等［3］，擴增狗骨補骨、溫腎強筋等功效［4］。近年來，不乏狗骨膠［5］的復方制劑相關中成藥，但對其臨床科研研究基礎較為薄弱［6］。本研究考察復方狗骨膠顆粒的最佳制備工藝，旨在為復方狗骨膠顆粒的產品開發提供數據參考。

1 處方選擇

狗骨5000 g，犬科動物Canis FamiliarisL.的四肢骨，購買于滕州市大塢鎮。熟地黃500 g，玄參科植物地黃Rehmannia glutinosaLibosch.的新鮮或干燥塊根的炮制加工品，購自山東寧康中藥飲片股份有限公司，產地河南。山萸肉500 g，山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalisSieb.et Zucc 的成熟果肉，購自山東寧康中藥飲片股份有限公司，產地浙江。狗脊800 g，蚌殼蕨科植物金毛狗脊Cibotium barometz（L）J.Sm.的干燥根莖，購自棗莊嘉誠醫藥有限公司，產地云南。骨碎補800 g，水龍骨科植物槲蕨Drynaria fortunei（Kunze）J.Sm.的干燥根莖，購自棗莊嘉誠醫藥有限公司，產地四川。牛膝500 g，莧科植物牛膝（懷牛膝）Achyranthes bidentataBl.的根，購自安徽普仁中藥飲片有限公司，產地河南。杜仲500 g，杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoidesOliv.的樹皮，購自山東寧康中藥飲片股份有限公司，產地云南。黃芪500 g，豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao 的根，購自山東一方藥業有限公司，產地內蒙古。紅花500 g，菊科植物紅花Carthamus tinctoriusL.的干燥花，購自山東百味堂中藥飲片有限公司，產地河南。丹參500 g，唇形科植物丹參Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根及根莖，購自安徽普仁中藥飲片有限公司，產地四川。山藥500 g，薯蕷科植物薯蕷Dioscorea oppositaThunb.的干燥根莖，購自山東一方藥業有限公司，產地河南。

輔料：95%乙醇（河南漢永酒精有限公司）、蔗糖（河南萬邦實業有限公司）300 g，山藥粉500 g。

2 儀器與設備

TQ-0.3 型多功能提取器（浙江森力機械科技股份有限公司），JH300GYF 型密度測定儀（上海浦春計量儀器有限公司），真空泵（醫院智慧藥房提供），DHG-9023A型烤箱（南北儀器有限公司），藥篩1 號10 目、7 號120目（醫院智慧藥房提供），JP-FSJ 型球磨機（永康市久品工貿有限公司）。

3 制備工藝研究

3.1 劑型選擇目前，常用的膠類中藥的品種即《中華人民共和國藥典：一部》所載藥，只有阿膠、鹿角膠、龜甲膠。20世紀70年代即有學者研制狗骨膠，但未成新藥。臨床證明，膠類中藥具有療效顯著、使用方便、體積小、便于攜帶等優點。近年來，課題組受相關研究資料、臨床實踐（滕州市中醫醫院名老中醫張義明主任醫師曾做過類似研究）及近年阿膠顆粒品種上市的啟發，選擇了狗骨膠顆粒作為制備研究的方向。

3.2 工藝路線的確定及選擇依據

3.2.1 工藝路線本品擬作膠類顆粒劑，其基本工藝路線見圖1。

圖1 狗骨膠顆粒工藝路線示意圖

3.2.2 處方藥物的性質狗骨性平，甘溫無毒，功效為健脾益腎、和絡生肌、強腰壯骨［7］，主治風濕腰腿痛、骨質疏松、關節痛、股骨頭壞死、骨折等癥，化學成分主要為蛋白質和無機元素、氨基酸，氨基酸主要為脯氨酸、谷氨酸、賴氨酸、甘氨酸等，無機物主要為鈣、磷、銅、錳等。

熟地黃味甘，性微溫，歸肝、腎經，功效為補血養陰、填精益髓［7］，主治內熱消渴、骨蒸潮熱、腰膝酸軟、盜汗遺精、眩暈、耳鳴、血虛萎黃、心悸、怔忡、崩漏下血、月經不調、須發早白等癥，化學成分主要為環烯醚萜類、紫羅蘭酮類、苯乙醇類等多種類型化合物［8］。

山藥味甘性平，歸脾、肺、腎經，功效為益氣養陰、補脾肺腎、固精止帶［7］，主治脾虛乏力、食少、泄瀉，腎虛尿頻、遺精，肺虛咳喘等，化學成分主要為多糖、氨基酸、脂肪酸、山藥素類化合物、微量元素、淀粉、蛋白質等，根莖中含有甾體、薯蕷皂苷、尿囊素、菲類及聯芐類等［9-11］。

山萸肉味酸、澀，性微溫，歸肝、腎經，功效為補益肝腎、收斂固澀［7］，主治虛喘、盜汗、遺尿滑精、內熱消渴、怔忡不寧、耳鳴眩暈、腰膝酸軟等癥，化學成分為環烯醚萜類、鞣質類、黃酮類、三萜類、芳香酚酸類、多糖類、甾體類、生物堿類、有機酸類、揮發油類等［12，13］。

狗脊味苦、甘，性溫，歸肝、腎經，功效為祛風濕、補肝腎、強腰膝［7］，主治腰背酸痛、風寒痹痛、手足麻木、半身不遂等癥，化學成分為芳香族類、揮發油類、蕨素類、酚酸類、黃酮類、皂苷類、糖及糖苷類、氨基酸類化合物以及無機元素［14］。

骨碎補味苦性溫，歸肝、腎經，功效為活血續傷、補腎強骨［7］，主治腎虛腰痛、跌撲閃挫、筋骨折傷，化學成分為黃酮類、三萜類、苯丙素類、木脂素類等［15］。

牛膝味苦、甘、酸，性平，歸肝、腎經，功效為活血通經、補肝腎、強筋骨、利水通淋、引火（血）下行［7］，主治腰膝酸痛、筋骨無力、痛經閉經、水腫、眩暈、吐血衄血等癥，化學成分主要為三萜皂苷類、甾酮類及多糖類，有少量的生物堿、黃酮類等成分，還含有精氨酸等12種氨基酸以及生物堿類、香豆素類等化合物和鐵、銅等微量元素。

杜仲味甘性溫，歸肝、腎經，功效為補肝腎、強筋骨、安胎［7］，化學成分為杜仲膠、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷、鞣質、黃酮類化合物等。

黃芪味甘性微溫，歸脾、肺經，功效為補氣健脾、升陽舉陷、益衛固表、利尿消腫、托毒生肌［7］，主治心悸氣短、表虛自汗、乏力、食少便溏、體虛浮腫、子宮脫垂、瘡瘍潰后久不愈合等癥，化學成分主要為皂苷類、多糖類、黃酮類、氨基酸類、生物堿類等［16］。

紅花味辛性溫，歸心、肝經，功效為活血通經、祛瘀止痛［7］，主治跌打損傷、瘀滯腫痛，化學成分為紅花醌苷、新紅花苷、紅花苷、紅花黃色素和黃色素，另含紅花油，油中包括棕櫚酸、肉豆蔻酸、月桂酸、硬脂酸、花生酸、油酸等。

丹參味苦性微寒，歸心、心包、肝經，功效為活血調經、祛瘀止痛、涼血消癰、除煩安神［7］，主治月經不調、經閉痛經、瘡瘍腫痛、胸腹刺痛、心煩不眠、心絞痛，化學成分為丹參酮類、丹酚酸類、揮發油類、多糖類和含氮化合物等。

3.3 生產條件本品為膠類顆粒制劑，其中還包括部分中藥材的提取物。在制備生產中，除應具有相應的鮮狗骨的浸泡［17］、清洗、除垢、切鋸等必要的設備外，還應備水蒸氣夾層鍋，過濾設備，中藥的提取、濃縮設備以及制粒設備，如噴霧干燥及沸騰床干燥設備和分裝包裝設備。

3.4 狗骨膠液提取條件的篩選

3.4.1 正交試驗設計選取3 個影響狗骨膠液制作的重要因素，包括制作溫度（A）、制作時間（B）、配比（C），進行三因素試驗設計。將中藥狗骨平均分成9 份，指標是狗骨膠液的得率，通過試驗結果，確定最優狗骨膠液的制作方案。正交試驗因素及水平見表1。

表1 L9（34）正交試驗因素與水平

3.4.2 驗證試驗結果與分析對最優制作進行放大試驗，得出A2B1C1組合與A2B1C2組合的結果無明顯差異。見表2。鑒于時間成本和用料成本考慮，確定最優制作方案為A2B1C1，并以最優制作方案制作10 份狗骨膠液，即S1～S10。

表2 驗證試驗結果

3.4.3 正交試驗結果分析以狗骨膠液得率作為指標評價狗骨膠液的制作方案，以綜合加權評分法計算，方差分析見表3，試驗結果分析見表4。

表3 正交試驗方差分析

表4 正交試驗結果分析

由表3、表4得出結論，影響指標的三大因素制作溫度（A）、制作時間（B）、配比（C）對狗骨膠液制作方案的影響大小依次為A＞C＞B，最優制作方案應為A2B1C2，即制作溫度115 ℃、制作時間16 h、配比1∶7。根據方差分析結果，制作溫度對狗骨膠液的制備影響有統計學意義，制作時間與配比對狗骨膠液的制備影響無統計學意義。鑒于時間成本和用料成本，優先考慮最佳方案為A2B1C1，即制作溫度115 ℃、制作時間16 h、配比1∶6。

綜上所述，本品的制備工藝路線可確定如下：

（1）狗骨膠液的制作：①原材料處理：取新鮮狗骨的四肢骨5000 g，清水沖洗2次，并去除附著的筋肉，置入水容器中浸泡3 d，每日換水1 次，直至附骨上的筋肉完全腐爛脫落，切碎或鋸成3～5 cm長的短節，再用1%～2%的碳酸氫鈉液（山東海化集團有限公司）洗去油脂，用清水沖洗3次，至水pH為中性。②提取膠液：加入6倍量的清水于提取罐內，加熱115 ℃提取16 h，應隨時加水使狗骨與水的比例為1∶6，過濾提取濾液。③制作備用A液：連續提3次，合并3次提取液，放置沉淀24 h用白布過濾，三次提取液于夾層鍋中115 ℃濃縮至相對密度為1.30。

（2）中藥提取膏的制備：①選取中藥：稱取熟地黃、山萸肉、牛膝、杜仲、黃芪、紅花、丹參各500 g，狗脊、骨碎補各800 g。②水煮醇洗法提取：加入4 倍量的冷水浸泡2 h，于夾層提取鍋中提取2 h，過濾得到濾液；藥渣繼續加入3 倍量的冷水，再提取2 次，將3 次濾液合并，放置24 h沉淀、過濾。③制作中藥提取B膏：低溫100 ℃內濃縮至相對密度為1.00，加2倍量的95%乙醇攪拌，沉淀24 h，過濾出濾液，回收乙醇并濃縮相對密度為1.30。

（3）合并A 液B 膏：取A、B 稠膏合并，加山藥粉500 g、蔗糖300 g混勻，用90%的乙醇適量制成軟材，通過1號篩（13～14目）制成顆粒，低溫干燥，分裝。