自擬參麥加味湯抑制FOXM1的表達發揮抑制氣陰兩虛非小細胞肺癌的臨床作用分析

吳玉英,林惠琴,周藝軍,劉文捷

(泉州市第一醫院全科醫學科,福建 泉州 362000)

近年來,非小細胞肺癌的發病率和死亡率呈現明顯上升的趨勢。這與多種因素密切相關。首先,不健康的生活方式如吸煙、飲食不平衡等習慣成為主要風險因素。探究治療非小細胞肺癌的更有效方法一直是臨床研究重點。研究顯示,FOXM1在腫瘤發展中起促進作用。因此,抑制FOXM1對治療非小細胞肺癌至關重要[1]。臨床發現,自擬參麥加味湯對非小細胞肺癌有療效,推測其通過抑制FOXM1表達發揮治療作用。這對非小細胞肺癌的靶向藥物治療具有突破價值,為免疫治療提供參考。本文通過對比試驗,研究自擬參麥加味湯抑制FOXM1表達與非小細胞肺癌的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2021年8 月至 2022年 8 月在我科住院的52例非小細胞肺癌患者作為本次試驗研究對象,采用隨機平均分組法分為觀察組和對照組,各有26例,統計得出觀察組中男14例,女12例,年齡為58～80歲,平均年齡(69.02±4.13)歲;對照組病患中男13例,女13例,年齡為56～81歲,平均年齡(69.16±4.61)歲。納入標準:①年齡>55歲;②經病理組織學檢查確診的非鱗非小細胞肺癌患者,病理組織學類型參照2015年版WHO肺腫瘤組織學四期分型標準[2-3];③ECOG評分0～2分;④預估生存期大于3個月以上;排除標準:①具備肺結核典型影像學表現,但缺乏病理學金標準依據;②合并其他惡性腫瘤;③合并艾滋病、巨細胞病毒和乙肝病毒感染;④合并自身免疫性疾病;⑤12月內曾接受過放化療及細胞免疫治療;⑥依從性差。

1.2 方法

1.2.1 常規治療

首先對老年肺癌患者給予常規的西藥和化療治療,化療藥物選擇培美曲塞二鈉+注射用卡鉑,給藥方法:在治療的第一天給藥培美曲塞二鈉500mg/m2(四川匯宇制藥股份有限公司),將培美曲塞二鈉采用0.9%的氯化鈉注射液稀釋到100mL,靜脈滴注給藥。注射用卡鉑(齊魯制藥有限公司)AUC=5與5%葡萄糖注射液混合,靜脈滴注。

1.2.2 自擬參麥加味湯治療的方法

老年肺癌患者治療方法:在常規治療的基礎上給予患者自擬參麥加味湯治療。以7天為一個療程,觀察2～3個療程。治療期間觀察和記錄患者的體征變化以及臨床上的表現,及時對患者進行呼吸道檢查,胸片的拍攝,觀察患者呼吸道改善的情況。通過體外培養并取處于對數生長期的A549細胞用于實驗,肺癌氣陰兩虛證患者在生脈飲的基礎上自擬參麥加味湯,主要的處方藥有:人參15g、麥冬15g,五味子10g;辨證加減痰濁甚者加干姜、細辛溫肺化飲,咳嗽甚加紫苑蜜百部潤肺止咳氣喘甚者加杏仁、厚樸降氣平喘;氣喘欲脫者加白芍、訶子肉、蛤殼納氣平喘。將藥材取水煎煮,取400mL的汁水,給予患者早晚兩次服下。

自擬參麥加味湯治療以7天為一個療程,培美曲塞聯合卡鉑治療為21天一個療程,兩組患者均治療3個療程。治療期間嚴密監測患者,觀察和記錄患者的體征變化以及臨床上的表現,觀察患者呼吸道改善的情況。

1.2.3 調控FOXM1基因及蛋白的表達對非小細胞肺癌治療方法

運用Annexin-V-FITC/PI雙染法檢測自擬參麥加味湯對人非小細胞肺癌FOXM1的表達水平作用;采用逆轉-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)法檢測各組細胞中FOXM1相關基因的表達;采用Westernblot方法檢測FOXM1的表達水平相關蛋白表達水平的變化。

1.3 觀察指標

1.3.1 療效分析

完全緩解(CR):所有目標病灶消失,并且非目標病灶消失或腫瘤標志物恢復正常。部分緩解(PR):目標病灶最長徑之和與基線狀態相比至少減少30%,并且非目標病灶未發生明顯進展或腫瘤標志物穩定。病變進展(PD):目標病灶最長徑之和與治療開始之后所記錄到的最小目標病灶最長徑之和相比增加20%,或者出現一個以上新病灶,同時非目標病灶可能持續存在或出現進展。病變穩定(SD):介于部分緩解和疾病進展之間,目標病灶未滿足部分緩解的定義,但也未達到疾病進展的標準。非目標病灶可能穩定或有輕微變化。總治療有效率=(CR+PR)/總例數×100%,對患者的呼吸道癥狀的改善情況進行觀察和記錄,對這52例病患的調查結果,并進行匯總,制成表格。

1.3.2 FOXM1的組織表達水平對比

FOXM1的表達水平的測定使用組織,做完治療有CR的取組織工作運用活檢針從患者身體特定部位取下一小塊組織進行病理學檢查。在某些情況下,可能需要進行切除手術來獲取更大的組織樣本,采用標準的組織學方法,如固定、切片和染色等,用于進一步的檢測和研究。選擇手術切除或者穿刺取樣的方式采集組織樣本。在手術過程中或穿刺過程中,采用鹽酸普魯卡因或鹽酸利多卡因進行局麻,并采用梭形切口,并確保與皮膚紋理垂直下刀,用于進一步的檢測和研究。統計兩組患者治療前后FOXM1的表達水平。比較不同樣本或實驗組之間FOXM1基因的相對表達水平。這可以通過實時定量聚合酶鏈反應(qPCR)或基因芯片等技術來進行。通過比較對照組和觀察組中FOXM1蛋白的表達水平,判斷其高低表達狀態。通過統計分析,以7.0%作為cut-off值,以區分FOXM1的高低表達狀態,并且與其他臨床、生物學或分子特征具有關聯性。

1.3.3 對比兩組患者外周血T淋巴細胞水平情況以及患者外周血T淋巴細胞水平情況

(1) 收集兩組研究對象的外周空腹靜脈血,約6mL。使用EDTA作為抗凝劑,以1∶1的比例與PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)混合后,將其輕輕加入同體積的淋巴細胞分離液的上層。然后,進行2000g的離心過程,持續20min,使淋巴細胞沉淀到中層。接下來,使用巴氏管輕柔地吸取中層淋巴細胞層,然后用PBS清洗3次,以去除離心過程中的雜質。在洗滌完畢后,向淋巴細胞中加入CD45、CD71和TER119的流式細胞學抗體。將試管放置于避光的室溫搖床上,孵育20min,讓抗體與細胞充分結合。之后,再次使用PBS進行三次清洗,以去除未結合的抗體。為了檢測CD45+紅系祖細胞的存在,采用流式細胞檢測儀進行分析。將處理后的細胞樣品放入流式細胞儀中,根據設備的設置和操作指南進行相應的檢測。

(2) T淋巴細胞亞群檢測:在室溫下,分別向已編號的試管中加入20mL的CD3、CD8、CD45、CD4抗體試劑。這些抗體試劑應來自CD3、CD8、CD45、CD4檢測試劑盒,根據試劑盒的說明書來確定添加的順序。在已做好標記的流式管管底部加入相應的抗體試劑。使用流式細胞儀對這些樣品進行檢測。該儀器可以根據細胞的熒光信號和特定的抗體結合情況,準確地確定T淋巴細胞亞群的存在和比例。

1.4 統計分析

2 結果

2.1 兩組患者臨床療效對比

總緩解率對比,觀察組92.50%高于對照組72.50%,觀察組和對照組治療有效率存在統計學差異(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者的臨床療效對比

2.2 兩組患者治療前后FOXM1的表達水平對比

治療前兩組患者組織FOXM1的表達水平無任何高表達和低表達差異,治療后,觀察組高表達僅剩10.0%,低于對照組的50.0%,P<0.05。見表2。

表2 兩組患者治療前后FOXM1的表達水平對比

2.3 兩組患者紅細胞免疫功能對比

本研究結果表明,觀察組患者RBC-C3bRR、RBC-ICR低于對照組,RBC-CaR高于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者紅細胞免疫功能對比

2.4 兩組患者CD3、CD8、CD45、CD4 水平的情況

觀察組的CD3、CD45、CD4水平均小于對照組,而觀察組CD8水平高于對照組,因此觀察組和對照組具有一定統計學差異(P<0.05)。見表4。

表4 兩組患者CD3、CD8、CD45、CD4 水平的對比

3 討論

非小細胞肺癌是目前臨床常見疾病,在許多引起非小細胞肺癌發生的原因中,病人自身免疫功能的降低也是一種十分關鍵的因素。臨床上證實FOXM1表達與腫瘤轉移密切相關,FOXM1表達水平越高,腫瘤細胞發生轉移的概率越大[3]。之前的研究報道 FOXM1在腫瘤的發生中起到重要作用[4]。然而,鮮有研究利用大量NSCLC患者組織標本研究FOXmL的表達是否可以影響腫瘤的發展、轉移及預測預后等[5]。中醫角度看,肺癌屬于肺積、息賁范疇,氣陰兩虛型最常見。治療目標是扶正祛邪、標本兼治。早期化痰軟堅、利濕解毒、行氣活血;晚期正虛扶正。人參為主的自擬參麥加味湯對FOXM1表達的影響受關注。本文研究此湯劑對非小細胞肺癌FOXM1表達的影響,探索其治療效果。治療效果觀察顯示,觀察組患者效果優于對照組(P<0.05)。治療后,觀察組患者FOXM1高表達低于對照組,低表達比例高于對照組(P<0.05)。FOXM1表達水平與治療效果成反比,高表達提示病情嚴重,低表達則提示病情穩定[5]。FOXM1在促進腫瘤生長和轉移中起重要作用。自擬參麥加味湯是健脾和胃的藥方,可增強抗病能力。該湯用于治療中醫肺癌辨證施治分型中的氣陰兩虛證,具有補益肺氣、育陰養血等功效[6]。在使用自擬參麥加味湯干預后,觀察組治療效果更好,在癌癥發展中可能促進癌細胞增生和轉化。腫瘤細胞逃避和抵抗免疫攻擊,CD8細胞過度活躍可能限制免疫細胞對癌細胞的殺傷效應[7]。本研究結果表明,比較了觀察組和對照組的CD3、CD45、CD4和CD8水平。根據結果顯示,觀察組的CD3、CD45、CD4水平均小于對照組,而觀察組的CD8水平高于對照組。這表明觀察組與對照組在CD4和CD8細胞的含量上存在一定統計學差異(P<0.05)。可見非小細胞肺癌患者相較于健康患者,紅細胞免疫功能異常,且自身抵抗力也更低。本研究結果表明,自擬參麥加味湯治療后,各項指標得到改善,FOXM1表達強度可作為預測NSCLC患者預后的生物標志物,有助于篩選高轉移風險患者,為非小細胞肺癌的治療方案制定提供指導[8]。

綜上所述,自擬參麥加味湯可作為非小細胞肺癌能量阻斷劑,對患者FOXIM1的表達進行抑制,發揮抑制非小細胞肺癌發展的作用。